LABORATORIO DE LAS ESTRUCTURAS DE LAS CELULAS EUCARIOTAS

CON TINCIONES SIMPLES

Daniel Enrique Estupiñán Sierra; Dayrom Jair Vargas Parada; Lizeht Natalia
Jauregui Sánchez; María José Maldonado Barbosa
Grupo de lab: 3 Grupo: AA
Resumen:

Las células eucariotas, muestran su material genético disperso en el citoplasma. Las

bacterias son un claro ejemplo de estas células que están presentes en cualquier medio
gracias a su diverso metabolismo; dependiendo del grosor de su pared se clasifica en: Gram
positivas y Gram negativas. Se analizan diferentes cosas desde yogur hasta agua estancada
para poder observar claramente las bacterias en ella con un método muy simple como la
tinción la cual ayuda a identificar la bacteria, también dependiendo del aumento y la tinción
se puede identificar mejor la morfología de estas.

Palabras claves: Tinciones simples, citoplasma, células procariotas, bacterias Gram.

Abstract:

Eukaryotic cells show their genetic material dispersed in the cytoplasm. Bacteria are a clear
example of these cells that are present in any medium thanks to their diverse metabolism;
depending on the thickness of your wall is classified into: Gram positive and Gram
negative. Different things from yogurt to stagnant water are analyzed to be able to clearly
observe the bacteria in it with a very simple method such as staining which helps to identify
the bacteria, also depending on the increase and staining the morphology of these can be
better identified

Introducción siendo uno de los primeros organismos

vivos, y el Dominio de Arqueobacterias.
Las células procariotas son organismos
Se caracteriza por no poseer un núcleo
vivos unicelulares, pertenecientes al
celular delimitado por la membrana, por
imperio Prokaryota o reino Monera, a su
lo tanto, sus ribosomas son de menor
vez a estas pertenecen el Dominio de
tamaño y su material genético se
Eubacterias o también llamadas Bacterias,
encuentra disperso en el citoplasma en un
único cromosoma de cuerpo irregular
llamado nucleoide. Carecen de organelos
como las mitocondrias, cloroplastos,
aparato de Golgi y retículo
endoplasmático.
En cuanto a su estructura, las células
procariotas son pequeñas y simples. Se
encuentra delimitada por una membrana
plasmática y por fuera de la misma, está
rodeada de una pared celular que le
brinda protección.
Las bacterias son un microorganismo
unicelular procarionte. Por lo general su
tamaño varía entre 0,5 y 5 µm de
longitud. Presenta su ácido
desoxirribonucleico (ADN) libre en el
citoplasma, cuenta con una pared celular,
capa de polisacáridos, que recubre a la
célula dándole rigidez y protección.
Debido a su tamaño, son imposibles de
ser observadas a simple vista a excepción
de cuando se agrupan formando colonias.
En su morfología bacteriana, las bacterias
se presentan y clasifican según su forma y
tamaño, identificables como: cocos
(células esféricas), bacilos (forma de
bastón), espirilos (células en forma de
espiral) y vibrilos o vibriones (tienen
forma de coma).
Igualmente se pueden clasificar con
respecto a su pared celular, siendo así:
Gram positivas, estas cuentan con una
capa gruesa de peptidoglucano en su
pared celular y las Gram negativas,
presentando el caso contrario, poseen una
capa delgada de peptidoglucano en su
pared celular. De esta clasificación surge
“la tinción de Gram”, Este procedimiento
fue desarrollado por el médico danés
Hans Christian Gram, en el año de 1880,
quien demostró dos categorías generales
de bacterias que causaban neumonía:
algunas se teñían de violeta y otras se
teñían de rojo, donde las primeras
mencionadas se catalogan como gram +
(positivas), mientras las siguientes se
denominaron gram – (negativas).
(Rodríguez, Arenas, & Gea, 2018).
El yogurt es un producto lácteo obtenido
mediante la fermentación de la leche por
medio de las bacterias de los géneros
Lactobacillus y Streptococcus, las
principales cepas utilizadas son:
Streptococcus thermophilus,
Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus
acidophilus, y Bifidobacterium. Dichas
bacterias utilizadas son microorganismos
benignos que se encuentran en grandes
cantidades en la naturaleza, al igual que
en nuestro aparato digestivo.
Morfológicamente, estas bacterias son
parecidas debido a que se identifican en
forma de cocos y bacilos; siendo gram
positivas.
Objetivos
- Identificar y reconocer, mediante
la observación y buena
manipulación del microscopio, la
morfología de las bacterias y
diversos organismos unicelulares
presentes en las muestras.
- Realizar de manera eficiente la
tinción solicitada de cada muestra
y así proceder con la observación
de las bacterias presentes por
medio de dicha pigmentación.
- Analizar a detalle los tipos de
bacterias presentadas en
capítulo 2 del libro de Biología
Celular facilitado por el docente.
Materiales y métodos:
La práctica fue realizada en los
laboratorios de la universidad de
pamplona en la sede principal, para
realizar la práctica se tuvieron que utilizar
materiales tales como: yogurt,
microscopio invertido Zeiss,
cubreobjetos, portaobjetos, agua
estancada, mechero y asa.
Procedimientos:
Prueba del yogurt.
En esta prueba se esteriliza el asa y se
toma el portaobjetos. Se hace un
extendido con ayuda del cubreobjetos,
luego se pone en el microscopio y se
dispone a observar las moléculas del
yogurt.
Prueba del agua estancada:
Se toma el portaobjetos, y con ayuda de
un gotero se extiende el agua estancada
de su recipiente. Después se deposita una
gota de agua en el portaobjetos y se cubre
con el cubreobjetos, luego pasa a ser
observado en el microscopio
el
Prueba de Yogurt con tinción simple:
Se pone una pequeña muestra de yogurt
en el portaobjetos, y al igual que en la
otra prueba se realiza un extendido con
ayuda del asa, y se deja secar con ayuda
del mechero en bajo nivel. Luego al ya
estar un poco seco se le agrega una gota
de tinción y se localiza en el microscopio
para hacer observaciones
Resultados
Para realizar la observación de diferentes cocos seguido de bacilos, los cuales no
formas bacterianas de las dos muestras, se provocan una amenaza a la salud humana
utilizó la tinción con azul de metileno, el ya que son bacterias benignas que se
cual pertenece a los colorantes básicos. encuentran en el ambiente hasta en
Gran parte de los tejidos, especialmente nuestro interior (intestino). Igualmente se
los animales, son incoloros por lo que se puede hacer énfasis en que, en la muestra
requiere teñir para así poder observar sus con tinción de azul de metileno, hay
características morfológicas con mayor presencia de bacterias Gram positivas ya
facilidad en el microscopio. Una de las que, posterior a la realización de los
tinciones más conocidas es “la tinción de procedimientos y agregarle el colorante
Gram” la cual podía pigmentar de dos correspondiente, tomó un color azul
colores distintos: azul y rojo. Las oscuro.
bacterias teñidas de azul fueron
- Muestra de yogurt sin tinción.
denominadas Gram positivas, esto se
4x10x
debe a que su pared celular es más gruesa
debido a los peptidoglicanos y polímeros,
haciendo que resista la coloración. Y las
teñidas de rojo como Gram negativas,
estas tienen una capa delgada de
peptidoglucanos, más una bicapa de
10x 4x
lipoproteínas que se puede deshacer con
la decoloración, (Rodríguez, Arenas, &
Gea, 2018).

1. Yogurt.

Con respecto a la muestra tomada con el

yogurt, observada y analizada en el 50x 100x
microscopio, a primera vista se puede
notar que, tanto en la primera muestra sin
- Muestra de yogurt con tinción de
tinción como en la segunda muestra con
azul de metileno.
la tinción, se presencian principalmente
 - Muestra de agua residual con
tinción de azul de metileno.

4x 10x

100x

2. Agua residual. 4x

En este caso, los resultados de ambas Discusión

muestras comparativas tomadas en el
laboratorio, se evidencia distintos cocos, En los resultados del laboratorio se puedo

bacilos y estreptobacilos. A su vez, en la observar que mediante preparaciones en

muestra de agua residual con el fresco se encontraron en la muestra de

procedimiento de tinción con azul de yogurt, células en forma de cocos y

metileno, no se logró una fuerte bacilos, como lo son los Lactobacillus y

coloración sobre la muestra, aunque si se Streptococcus, bacterias que se

observan principalmente cocos y bacilos encuentran en todos los yogures, que

en ella. coinciden con el estudio de Díaz

Alvarado & Rubio Salgado (2016) estas
- Muestra de agua residual sin bacterias que son responsables de la
tinción. fermentación, donde se produce ácido
láctico a partir de la lactosa presente en la
leche y una serie de compuestos,
responsables del sabor y aroma típicos del
yogurt.
4x 10x
Figura 1. Yogurt bebible comercial
(Danup) vista microscópica

50x 100x
 Figura 2. Muestra de yogurt comercial
con tecnica de tinción para distinguir su
morfologia microscopica

En cuanto la tinción de Gram con la

muestra de yogurt, resulto que los
Lactobacillus y Streptococcus, son ambas
En cuanto a las preparacion en fresco y
bacterias Gram+ ya que toman un azul
tincion de agua residual (la cual no
oscuro, de acuerdo con Rodríguez,
logramos hacer correctamente, figura 5.)
Arenas, & Gea, 2018. Pues presentan una
observamos distintos cocos, bacilos y
pared celular gruesa conformada por
estreptobacilos. Donde concordamos de
peptidoglicanos y polímeros, e
su presencia con Bejarano Novoa &
impermeable, haciendo que resista la
Escobar Carvajal, 2015. Las bacterias del
decoloración. Comparando con los
agua residual son eubacterias procariotas,
resultados de Díaz Alvarado & Rubio
típicamente unicelulares (sin membrana
Salgado (2016), podemos ver como estas
celular). Morfológicamente son redondas
bacterias se tiñen de azul como lo
(cocos), cilíndricas (bacilos), curvadas
muestran en las siguientes figuras, en la
(vibriones), en espiral (espiroquetas) o
figura 2 se logra ver la morfología
filamentosas. Los cuales son los
microscópica, característica de este
principales responsables de la
Lactobacilo. La cual, consiste en células
degradación de la materia orgánica en un
cocoides en cadena en Gram positivos y
sistema biológico. Un centímetro de agua
en la figura 3 también se observó la
residual puede tener miles de millones de
morfología microscópica para este otro
bacterias.
Lactobacilo. Se observaron células de
forma bacilar Gram positivas. Figura 4. Muestra de agua residual,
practica de laboratorio.
 como son sus paredes celulares.
Actualmente la tinción de Gram sigue
siendo un método eficaz e importante en
el laboratorio, además de que es rápido y
económico, por lo que se debe
estandarizar para evitar errores técnicos o
de interpretación. (Rodríguez, P., Arenas,
R., & Gea, M. 2018).
Figura 5. Intento de tinción en agua
En el agua residual se pueden encontrar
residual
bacterias Gram positivas y Gram
negativas que presentan diferentes
morfologías como bacilos y cocos, lo cual
permite tener un acercamiento a los
microorganismos degradadores de la
carga orgánica. Lo que demuestra que el
humano no debe consumir estas aguas
contaminadas ya que está ingiriendo
Conclusiones
miles de bacterias degradadoras de

Tanto en el yogurt o en el agua residual, materia orgánica dentro de un organismo.

se presentan diferentes tipos de bacterias, Mientras que las bacterias del yogurt,

identificables mediante el uso del Lactobacillus y Streptococcus, son

microscopio, reconocibles por su consumibles por los humanos ya que se

morfología. Existen diferentes métodos tratan de bacterias usadas para la

como lo es la preparación en fresco para fermentación, de la leche para la

observar dichas bacterias es una técnica producción de yogurt.

muy sencilla que nos permite verlas, pero

Bibliografía
también tenemos las tinciones de Gram
que son también una técnica sencilla pero Díaz Alvarado, T., & Rubio Salgado, Á.

la cual nos da una información más A. (2016). Desarrollo de un Producto de

profunda, permitiéndonos saber si son Yogurt Bebible a base de leche de soya

Gram+ o Gram-, y con esto interpretar con sabor cereza.

Bejarano Novoa, M. E., & Escobar
Carvajal, M. (2015). Eficiencia del uso de
microorganismos para el tratamiento de
aguas residuales domésticas en una planta
de tratamiento de agua residual.
Cutipa Paucarima, E. C., & Ramos Borda,
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tratamiento biológico para agua residual
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https://www.genome.gov/es/genetics-

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Anexos

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Dibuje e indique la estructura
30, 2022, from Quimica.es website: procariota que observa.

https://www.quimica.es/enciclopedia/End Tomando como referencia la muestra del

yogurt, observándola con el objetivo 4x y
ospora.html 100x (con aceite de inmersión), a primera
vista se puede determinar la presencia
‌2.5.4: Coloración de endosporas (tinción principalmente de cocos.

diferencial). (2022, June). Retrieved

September 30, 2022, from LibreTexts

Español website:

https://espanol.libretexts.org/Biologia/Ma

nual_de_microbiologia_general/

02%3A_Fundamentos_de_microscopia_

montaje_y_coloraciones_de_muestras/

2.05%3A_Tinciones_comunmente_usada -Describa las estructuras

características de las células
s_en_microbiologia/ procariotas.
2.5.04%3A_Coloracion_de_endosporas_( R/:

tincion_diferencial) -Cápsula bacteriana: Es una cápsula

rígida y gruesa que recubre por la parte
exterior a la célula, algunas procariotas la
poseen.

-Pared celular: Es una envoltura rígida y

fuerte que se encarga de darle forma a la
célula situada entre la membrana
plasmática y la cápsula bacteriana (si
tiene).
-Membrana plasmática: Es la encargada
de regular la entrada y salida de
sustancias a la célula. En algunos casos,
dicha membrana se repliega hacia el
interior en forma de “mesosomas”
(intervienen en la respiración y
reproducción celular).

-Citoplasma: Se le denomina así al

espacio interior que está delimitado por la
membrana plasmática.
-ADN: Se encuentra dispuesto dentro de
un cuerpo irregular denominado
“nucleoide”. Está formado por una
molécula de ADN circular.
-Ribosomas: Son orgánulos que están
presentes en el citoplasma, se encargan de
la síntesis de proteínas.
-Flagelos: Se les llama así a las
prolongaciones del citoplasma que
permiten el movimiento de algunas
bacterias.
-Pili o Fimbrias: Son filamentos cortos y
abundantes que se encuentran alrededor
de la célula. Tiene como función fijar a la
bacteria al sustrato, intercambiar
moléculas con otras células o con el
exterior.
Dibuje una célula procariota e indique
sus estructuras celulares.
¿Cuál es el principal componente
químico de la pared celular de las
células procariotas?
R/: La pared celular de la mayoría de las
bacterias tiene peptidoglicano, un
polímero de azúcares y polipéptidos. El
peptidoglicano es inusual porque no solo
contiene L-aminoácidos, el tipo que
normalmente se usa para hacer proteínas,
sino también D-aminoácidos, (“Khan
Academy,” 2022).
¿Cuáles son las características de la
membrana plasmática en células
procariotas?
R/: Se encuentra debajo de la pared
celular. Es una capa doble de lípidos que
separa el interior de la célula al ambiente
externo. Sus principales componentes son
los fosfolípidos, lípidos compuestos de
una molécula de glicerol unida a una
cabeza de fosfato hidrofílico y a dos colas
hidrofóbicas, (“Membrana Plasmática |
NHGRI,” 2022).

¿Cuál es el fundamento de la tinción

diferencial denominada tinción de
Gram?
R/: Su principal objetivo es poder
observar con mayor facilidad la
morfología de los tejidos, bacterias, etc.
gracias al color que toman por la tinción
que se le realice, seguido de denominar y
analizar aquellas bacterias gram positivas
y gram negativas basado en si se tiñe o
llega a quedar incoloro.
¿Cuál es la diferencia estructural de la
pared celular entre las bacterias Gram
- y Gram +?
R/: Las bacterias gram positivas, poseen
una pared celular gruesa siendo
conformada por peptidoglicanos y
polímeros haciéndola impermeable,
resistente a la decoloración; las bacterias
gram negativas poseen una pared celular
delgada constituida por peptidoglicanos
más una bicapa de lipoproteínas que
pueden deshacer la decoloración.
La función primaria de las endosporas es
sobrevivir en tiempos de tensión
ambiental. Por lo tanto, son resistentes a
la radiación ultravioleta y gamma, a la
desecación, a lisozima, a la temperatura,
al hambre y a los desinfectantes químicos,
(“Endospora,” 2022). El tipo de tinción
que se utiliza es la “tinción Schaeffer-
Fulton”, donde la suspensión de
microorganismos se tiñe en caliente con
el colorante verde de malaquita, un
colorante soluble en agua por cuya razón
no se utiliza habitualmente en tinciones
convencionales. El calor modifica la
permeabilidad de las endosporas y
permite la entrada del colorante a través
de las capas externas, (“2.5.4: Coloración
de Endosporas (Tinción Diferencial),”
2022).

¿Cuáles son las desventajas que tiene la

coloración simple?

R/: Existe la posibilidad de que algunas

bacterias no tomen la tinción de Gram.

Aquellas bacterias que no tienen pared

celular, su coloración será muy débil.

Si la muestra a ser sometida a la tinción

es un tejido vivo, las células acaban
muriendo debido al procedimiento por lo
tanto no se puede llegar a observar células
activas en su estado natural.

¿Cuál es la función de la endospora y

qué colorantes son usados para la
tinción de esta estructura?