Cátedra de Histología

Tema: Métodos Histológicos: Técnicas

de Tinción
Técnicas Histológicas
Se llama técnica histológica a la serie de pasos
que han de darse para obtener un preparado
observable con el microscopio
 Pasos para la Preparación de
Tejidos Histológicos
 Obtención de la muestra del
tejido
 Fijación
 Deshidratación
 Aclaramiento
 Inclusión
 Corte
 Coloración
 Montaje
1.Obtención de la muestra: El material humano puede
provenir de tres fuentes:
Necropsias: son las piezas que se obtienen
de un cadáver.
Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen
de un sujeto con vida.

Piezas operadas: los tejidos que han sido

extraídos de las intervenciones quirúrgicas.
Preparación Histológica de los tejidos
2.- Fijación: Su propósito es mantener la morfología del tejido
lo más parecida posible a lo que ésta tenía antes de hacer la
extracción. Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares
que iniciarían la Autólisis –
abolir el metabolismo celular,
• impedir la degradación enzimática de las células y de los tejidos
por autólisis (autodigestión),
• destruir los microorganismos patógenos, como las bacterias, los
hongos o los virus y
• endurecer el tejido como consecuencia de la formación de enlaces
cruzados o de la desnaturalización de las moléculas proteicas

Métodos: Químico → inmersión

Físico: congelación
Los más usados son:
Formaldehído y glutaraldehído reaccionan con los grupos
aminos de las proteínas
Preparación Histológica de los tejidos

3.- Deshidratación: se elimina

completamente el agua para que se pueda
embeber adecuadamente el tejido en aquellos
medios de inclusión que no sean hidrosolubles.
(Alcohol etilíco en concentraciones crecientes)
4.- Aclaramiento: Se llama aclaramiento ya
que el tejido se torna transparente o claro en el
xileno, esto se debe a que cambia su índice de
refracción. La sustancia comúnmente utilizada
es el Xileno o Xilol.

5.- Inclusión: Proceso que tiene por objeto

“rellenar o infiltrar” completamente la muestra
histológica con el medio que se va a usar para la
imbibición del tejido. (Baños sucesivos de
parafina fundida) Debido al calor, el xilol o el
benzol se evaporan y los espacios anteriormente
ocupados por ellos son ahora ocupados por la
parafina.
Preparación Histológica de los tejidos
6.- Corte: Ahora se puede cortar en
secciones lo suficientemente delgadas
como para permitir el paso
de la luz.

7.- Coloración: Los cortes se colocan

sobre portaobjetos a los que se les ha
agregado una pequeña cantidad de
Albúmina, la cual actúa como adhesivo.
La parafina se elimina en un solvente
orgánico, de nuevo se incluyen en Xilol, y
la muestra se rehidrata haciéndola pasar
por una serie de graduaciones
decrecientes de alcohol etílico hasta llegar
a una solución 100% de agua.

Ya rehidratado se TIÑE EL TEJIDO. Los colorantes más utilizados

son la HEMATOXILINA Y la EOSINA.
Preparación Histológica de los tejidos

Reducción de la pieza Fijación Introducción en cassette

de deshidratación

Deshidratación en Penetración de la parafina Barras de Leuckart

alcoholes sucesivos 56-58ºC
Fundamentos Generales de la Preparación Histológica de los tejidos

Fractura del taco para

cortar
Corte en micrótomo

Bateria de coloración
H&E
Biopsias por congelación

• Evaluar de inmediato el tejido obtenido

durante el acto quirúrgico y el diagnóstico
Instantáneo, determina el paso siguiente en
la cirugía.
• Para identificar hallazgos intraoperatorios inesperados.
• Para saber si se ha extirpado toda la masa patológica y si el borde
de la resección quirúrgica está libre de tejido enfermo.
• Se congelan fragmentos de tejido usando anhídrido carbónico
comprimido o un líquido frío (isopentano) a una temp de -50ºC
• Corte del tejido congelado en un crióstato (cámara refrigerada que
contiene un micrótomo).
• Montaje del corte en un portaobjetos .
• Tinción del corte: HE, azul de metileno y PAS.
• El proceso puede tardar 10 minutos y el resultado se comunica al
cirujano inmediatamente.
Coloraciones Utilizadas en Microscopía Óptica

Fundamento: Radica en la propiedad que

tienen todos los tejidos para incorporar y
fijar de modo variable diversas sustancias
Coloreadas. Según su afinidad tisular:
• Colorantes Básicos: poseen una carga global
positiva (catiónicos), reaccionan con los componentes aniónicos de las
células. Ej. Hematoxilina

• Colorantes Ácidos: poseen una carga global negativa (aniónicos),

reaccionan con los componentes catiónicos de las células. Ej. Eosina

• Colorantes neutros: su carga global es neutra. Propiedad de colorear

junta o separadamente diversas estructuras. Ej. Giemsa

• Colorantes metacromáticos: colorantes básicos. Producen tonos de

color totalmente distintos al que se espera por el colorante empleado

• Colorantes Indiferentes: no poseen carácter ácido, básico o salino

definido. Colorean mediante impregnación.
 Coloraciones Utilizadas en Microscopía Óptica
Hematoxilina-Eosina (HE): utiliza dos tipos de
colorantes. La hematoxilina, que es un colorante básico,
colorea los componentes ácidos de la célula (núcleo) de
color morado; y la eosina, que es un colorante ácido, se
une a estructuras básicas de la célula (citoplasma)
otorgándole una tonalidad rosada.

Impregnación con sales

Tinción de Giemsa Tinción Azul de Toluidina de plata
Colorante neutro Colorante metacromático Coloración indiferente
Color Colorante Qué tiñe?
Rosado Eosina BASE (sustancia acidófila)
Violeta Hematoxilina ÁCIDO (sustancia basófila)
Coloraciones Utilizadas en Microscopía Óptica
• Coloración con PAS (ácido periódico-Shiff): se usa
para determinar la presencia de macromoléculas ricas
en glúcidos como glucógeno, glucoproteínas y
GAG. Se observa color fucsia al microscopio óptico.

• Coloración con Azán: (tricrómica): se obtiene tres colores

diferentes: Azul oscuro en los núcleos de la célula; Rojo en el
músculo, queratina y citoplasma celular, y Azul Claro en el
mucinógeno y colágeno, o sea en el tejido conjuntivo.

• Coloración con metales: actúan impregnando a ciertos

componentes celulares. Se usan para demostrar Aparato
de Golgi, y las neurofibrillas.
Coloraciones Utilizadas en Microscopía Óptica
• Coloración con hematoxilina férrica: útil para estudiar detalles
celulares finos. Ej. Las fibras elásticas y las mitocondrias
presentes en el citoplasma de ciertas células

• Tricrómico de Cajal y Gallego: implica

el uso de tres colorantes. Para demostración
diferencial y selectiva de las fibras colágenas y del músculo.

• La orceína y la fucsina resorcina: son colorantes para fibras

elásticas. Se observan entre bordeau y castaño oscuro.

• Carmín de Best: para tinción nuclear y detección de

glucógeno
Elementos celulares que presentan basofilia, es decir
afinidad por los colorantes básicos (¿con qué se
tiñería?) y se ven de color morado al microscopio
óptico
- Heterocromatina y nucléolos del núcleo
- Algunos componentes citoplasmáticos
- Material extracelular

Elementos celulares que presentan acidofilia, es decir

afinidad por los colorantes ácidos
(se tiñen con? E _ _ _ _ A)
y se ven de color rosado al microscopio óptico
-La mayoría de los filamentos citoplasmáticos
-La mayoría de los componentes
-membranosos intracelulares
-La mayoría de las fibras extracelulares