FORMATO DE INFORME DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CARRERA: Ingeniería Ambiental ASIGNATURA: Microbiología

NRO. 1 TÍTULO PRÁCTICA: Tinción Gram
PRÁCTICA:
INTEGRANTES: Miles Armijos Gisela Elisabeth, Solórzano Párraga Jorge Luis
OBJETIVO GENERAL:

 Comprobar si los microorganismos examinados son Gram positivo y Gram negativo

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Realizar una tinción de Gram sobre una muestra problema.

 Aprender a diferenciar entre microorganismos Gram positivo y Gram negativo
 Reconocer los materiales y sus usos para el cuidado del laboratorio

INTRODUCCIÓN:

Para la elaboración de una tinción de Gram es necesario utilizar dos colorantes. Uno de ellos que es
primario, como es el cristal violeta, y otro de contraste, como la safranina. De igual manera se utiliza un
mordiente para la safranina, como es el Lugol y un decolorante como el alcohol/acetona.

Esta tinción pone de manifiesto la afinidad tintorial de la pared, la cual depende de su composición para
que el microorganismo sea considerado Gram positivo y Gram negativo
Los microorganismos Gram positivos se diferencian de los Gram negativos en que tienen una capa
gruesa de peptidoglicano y en esta no presenta una membrana lipídica externa, mientras la Gram
negativa contiene una capa más delgada de peptidoglicano y este si presenta una membrana lipídica
externa.
Los microorganismos generalmente contienen patogenos los cuales afectan la salud del ser humano por
eso es muy importante trabajr con estas bacterias de una manera cuidadosa para evitar enfermedades en
el ser humano, es necesario utilizar la tincion Gram para saber que tipo de tejidos poseen estas bacterias
ya qiue al momento de la tincion Gram estas pueden variar su color, es decir, si es de color morado estas
seran gram poisitovas y si se marcan de rosado se consideran gram negativas, teniendo en cuenta que
estas causan diferentes tipos de infecciones.

METODOLOGÍA:
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En la presente practica de laboratorio se reconoció los materiales de laboratorio y después se realizó un
estudio sobre los microrganismos el cual se va a poder observar después de haber colocado los
colorantes, y así conocer qué tipo de tejidos tienen dichas bacterias método por el cual se va a seguir en
esta práctica que es la tinción Gram la cual consiste en poner varios colorantes e ir enjuagando los
colorantes y fijar la muestra para al final colocar en el microscopio y saber qué resultados nos dio.

Materiales Cantidad

Por curso Por grupo

Aspersores de Alcohol (70%) 5 1
Cajas de fósforos 2 1
Cajas Petri de vidrio 5 1
Tubos de ensayo con tapa 5 1
Gradilla 5 1
Asa de siembra 5 1
Gotero con solución salina 0,9% 5 1
Kit de tinción gram 5 1
Bandeja para tinción 5 1
Picetas con agua destilada 5 1
Pinzas para tincion 5 1
Cepa de Bacillus spp en AN 5 1
Cepa de Pseudomona en AN 5 1
Cepa de Staphylococus aureus en AN 5 1
Cepa de Lactobacillus spp en AN 5 1
Cepa de Candida spp en AN 5 1
Aceite de inmersión 5 1
Lapiz de cera 5 1

Reactivos
Materiales Cantidad

Por curso Por grupo

Alcohol (70%) Necesario para los Necesario para los
aspersores aspersores

Equipos
Materiales Cantidad

Por curso Por grupo

Autoclave 1 1
Incubadora 1 1
Microscopios 5 1

La metodología para realizar la tinción Gram es muy sencillo:

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 Tener en un recipiente una muestra de bacterias a temperatura de 36-38 grados

 Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un asa de inoculación.

 Expandir dicha muestra sobre un portaobjetos y pasarla por 3 ocasiones rápidas por el mechero.
 Fijar la muestra mediante un alcohol.
 Aplicar el cristal violeta sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
 Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador de Lugol. El Lugol y el cristal violeta forman
un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
 Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol durante unos segundos.
 Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina para distinguir las Gram negativas que
aparecerán bajo el microscopio con un tono rosado. Después lavamos con agua.
 Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color violeta las Gram
positivas y de color rosadas las Gram negativas.

Ilustración 1: Ilustración 2:
Mechero de bunsen Muestra de bacterias

Ilustración 3: Ilustración 4:
Colorantes a utilizar. Caja petri

3
RESULTADO(S) OBTENIDO(S):

Ilustración 5:
Muestra de bacterias observada a través Ilustración 6:
del laboratorio Tinción gram negativa

DISCUSIÓN:
En esta práctica se pudo observar que los microrganismos en la tinción gram fueron rosados es decir de
gram positiva, pero es necesario conocer como estas bacterias incluyen en el ámbito clínico y cuál es la
diferencia entre las Gram positivas y las Gram negativas.
Las Gram positivas poseen una pared celular gruesa debido a sus peptidoglicanos mientras que en la
tinción Gram negativa su pared celular es mas delgada y también en su exterior esta posee una segunda
membrana plasmática.
Es así como las bacterias se van a teñir de colores diferentes ya que sus composiciones en la pared
celular van a dar un resultado distinto, En el caso de la decoloración las Gram negativas van a ser
solubles en el alcohol cetona, su capa es muy delgada lo cual no puede sostener el cristal violeta que se
coloca en la práctica, lo cual no sucede con las Gram positivas ya que estas al ser gruesas contiene el
cristal violeta y le dan paso al color morado.
Siempre se debe tener cuidado al utilizar estas bacterias ya que puede variar su tinción es asi como si al
colocar la muestra la ponemos en un medio no adecuado esta puede contaminarse y ya no existirán
resultados favorables
Los microorganismos Gram positivos pueden hacerse gram negativos al aumentar la acidez (Stearn,
1923)
Los microorganismos que aparecen como Gram positivos retienen el cristal violeta y los gram negativos
lo pierden (Forbes, 2009)

CUESTIONARIO:
 Describir los requisitos indispensables que debe tener un laboratorio de bioseguridad tipo 2.
- Para ingresar al laboratorio este debe ser limitado, es decir no pueden estar demasiadas personas dentro
del laboratorio especificado por el profesor

- Los laboratorios deberán tener equipos de emergencia para los estudiantes es decir en caso de que algún
estudiante sufra alguna lesión en los ojos con un compuesto este acuda a las duchas para enjuagarlo

- Los laboratorios deben y tener desinfectantes antes del ingreso y salida pues es indispensable
mantenerse limpios antes de trabajar con los equipos del laboratorio.

- Los equipos en el laboratorio deben estar en buen uso ya que los estudiantes los necesitaran para su uso.
- Al momento de manipular los equipos el estudiante deberá hacerlo de manera cuidadosa para evitar
cualquier percance de igual manera los equipos deben estar en buen estado ya que al momento de colocar

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alguna muestra en un congelador si este no está en buen estado puede causar problemas para poder
encontrar resultados de dicha muestra.

 Mencione tres principales recomendaciones de uso correcto de la autoclave.

- Para cada carga, los operadores deben usar como indicador de esterilización la cinta sensible de calor
para indicar que la carga ha pasado por un proceso efectivo de esterilización a vapor.

- Observe que esta cinta solamente indica que un determinado ciclo alcanzó la temperatura apropiada,
pero no indica que se calentó con la presión apropiada o por la cantidad adecuada de tiempo.

- Asegúrese que la cinta sensible de calor no contenga un indicador con base de plomo ya que este tipo
de cinta debe juntarse y manejarse como desecho peligroso. (Stanford , s.f.)

 Haga un cuadro comparativo de semejanzas y diferencias entre bacterias Gram Positivas y Gram
Negativas con un dibujo de lo observado.

Gram positivo Gram negativo

Semejanzas
Las dos contienen peptidoglicano
Las dos contienen membrana
citoplasmatica
Los dos forman parte de las celulas
procariotas
-Su capa de peptidoglicano es grusa - Su capa de peptidoglicano es delgada
-No tienen capa lipidica externa - Tienen una capa lipidica externa
- Contiene una membrana - Contiene dos membranas
- No tiene un espacio periplasmico con - Tiene un espacio periplasmico con enzimas
enzimas hidroliticas hidroliticas
- Sin canales de porinas - Canales de porinas

CONCLUSIONES:
- Se pudo identificar que las bacterias se convirtieron en Gram positiva ya que la tinción es de color
rosado.
- El uso de los materiales de laboratorio debe ser de manera cuidadosa para así evitar cualquier tipo de
accidentes dentro del laboratorio, es importante escuchar las indicaciones del profesor para poder realizar
la práctica de una manera cuidadosa

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Bibliografía
Alcalde. (2010). Cosmética Natural y Ecológica regulación y clasificación. Recuperado el 20 de
febrero de 2013, de El portal de la Industria Estética: http://www.Macroestetica.com

Alonso, J. (2010). Curso de Fitodermatología. Buenos Aires, Argentina: Asociación Argentina de

Fitomedicina.

Forbes, B. A. (2009). Diagnostico Microbiologico. medica panamericana. Obtenido de

https://books.google.com.ec/books?
id=239cauKqSt0C&pg=PA81&dq=tincion+gram,&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwi4mrzpqIf0Ah
XNRDABHVM9BkUQ6AF6BAgFEAI#v=onepage&q=tincion%20gram%2C&f=false

Stanford . (s.f.). Environmental Health y Safety. Obtenido de

https://ehs.stanford.edu/reference/seguridad-del-autoclave

Stearn. (1923). Tincion Gram. Obtenido de https://es.slideshare.net/noheding/tincion-gram-

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ANEXO 2. RÚBRICA DE EVALUACIÓN

Criterios Excelente Bueno (70%) Regular (40%) Deficiente
(100%) (0.0%)
Introducción Se presentan toda Se presentan Implementa un Los párrafos no
(10%) la información y toda la orden, pero se guardan una
los párrafos información, omite secuencia u
guardan un orden pero los información orden lógico.
lógico de acuerdo párrafos no importante. No La información
con el tema. La guardan un toda la presentada no
información está orden lógico de información está es la
respaldada con su acuerdo con el citada. correspondiente
cita tema. La (0.4 puntos) al tema del
correspondiente. información artículo. La
(1 puntos) está respaldada información no
con su cita está citada.
correspondiente. (0 puntos)
(0.7 puntos)

Métodos Describe breve, Incluye todas Omite algunas No presenta las

(10%) clara y las de las metodologías
correctamente metodologías metodologías o utilizadas y

6
 todas las utilizadas, pero las describe solo indica los
metodologías algunas son incorrectamente. materiales
utilizadas extensas y no (0.4 puntos) utilizados.
indicando los son claras. (0 puntos)
materiales y (0.7 puntos)
equipos
utilizados.
(1 puntos)
Resultados La información La información La información La información
(25%) se encuentra se encuentra no se encuentra no ha sido
resumida y resumida pero resumida, pero resumida y no
representada no representada los gráficos se incluyen
adecuadamente adecuadamente incluidos gráficos que
con gráficos que con gráficos que ayudan a la faciliten la
facilitan la facilitan la comprensión de comprensión de
comprensión de comprensión de los resultados. los resultados
los resultados. los resultados. (1 puntos) (0 puntos)
(2.5 puntos) (1.75 puntos)
Discusión Interpreta y Interpreta y Interpreta, pero No interpreta y
(25%) analiza los analiza los no analiza los no analiza los
resultados resultados resultados resultados
obtenidos obtenidos, pero obtenidos y no obtenidos y no
comparándolos no compara con los compara con contrasta la
con referencias otras referencias otras referencias información.
bibliográficas. bibliográficas. bibliográficas. (0 puntos)
(2.5 puntos) (1.75 puntos) (1 punto)
Conclusiones Las conclusiones Las Las Las
(10%) están presentadas conclusiones conclusiones no conclusiones
claramente como están están no tienen
respuesta a la presentadas presentadas ninguna
interrogante que claramente pero correctamente, relación con el
originó el estudio no responden a no son claras y tema planteado
y a los objetivos la interrogante no responden a y con los
planteados. que originó el la interrogante objetivos del
(1 punto) estudio y a que originó el estudio.
todos los estudio y a (0 puntos)
objetivos todos los
planteados. objetivos
(0.7 puntos) planteados.
(0.4 puntos)
Redacción y Coloca oraciones Coloca Las oraciones No hay una
ortografía cortas y claras oraciones cortas son muy largas buena
(20%) con un buen uso y claras, pero no y no se usa estructura de
de los signos de hace un buen signos de las oraciones y
puntuación. uso de los puntuación. se omite el uso
No presenta signos de Presenta hasta 5 de los signos de

7
 faltas de puntuación. faltas de puntuación.
ortografía. Presenta hasta 3 ortografía. Presenta más
(2 puntos) faltas de (0.0 puntos) de 5 faltas de
ortografía. ortografía.
(1.4 puntos) (0 puntos)
100% (10 puntos) (7 puntos) (4 puntos) (0 puntos)