PRACTICA NO.

1
TINCIÓN DE GRAM
BIOLOGÍA
ING. BIOQUÍMICA
1°A
LAURA VALDÉS SANTIAGO
EQUIPO: 6
MESA: 1
INTEGRANTES:

CANALES LOPEZ DANNA VALERIA

RAMOS ARGUELLO CAMILA MONSERRAT

RODRIGUEZ LOPEZ PEDRO SAUL

ROJAS RAMIREZ IVANNA MICHEL

SALAS FUENTES PAULA CAROLINA

VILLAFAÑA RAZO YENNIFER CRISTINA

ZERMEÑO GARCIA CYNTHIA DANIELA

 INTRODUCCIÓN:

Las bacterias son organismos unicelulares procariontes, esto quiere decir

que están formados por una sola célula carente de núcleo. Su ácido
desoxirribonucleico (ADN) se encuentra libre en el citoplasma y no
tienen organelos, como las mitocondrias, cloroplastos o aparato de Golgi. A pesar
de su sencilla organización celular, cuentan con una pared celular (capa de
polisacáridos) que envuelve la célula proporcionándole rigidez y protección. Son
tan pequeñas que es imposible verlas a simple vista, solamente cuando llegan a
agruparse formando colonias es cuando las podemos reconocer. (Gonzales, 2020)
Cuentan con una pared celular, cuando las condiciones ambientales se tornan
hostiles muchas bacterias forman en su interior estructuras de protección llamadas
endosporas, las cuales contienen el material genético y las sustancias necesarias
para poder sobrevivir. Algunas son tan resistentes que permiten a la
bacteria sobrevivir a altas temperaturas e incluso a largos periodos de tiempo. Se
reproducen asexualmente por medio de una forma de división celular
denominada fisión binaria, que produce copias genéticamente idénticas a la célula
original. En condiciones ideales, algunas bacterias se duplican en cuestión de
minutos por lo que podrían en principio, dar origen a una población de millones
de bacterias en poco tiempo. (Bertomeu, E. & Schoon, D. ,2020)
Para poder identificar más fácilmente a las bacterias, se utiliza una
tinción diferencial, llama tinción de Gram, en la que utiliza dos colorantes y
clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y
bacterias Gram positivas. Es una de las tinciones más utilizadas
universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta. Los
principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared
celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada
microorganismo. Gram +: Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular
gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular
externa. Las bacterias G+ retienen el cristal-violeta después de la decoloración y
aparecen de color azul intenso. Gram - : La pared celular de las bacterias Gram
negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano y una membrana
celular externa, cuyo componente estructural único son los lipopolisacáridos. Las
bacterias G- no son capaces de retener el cristal-violeta después de la
decoloración y son teñidas de rojo con safranina. Pueden tomar un color Rojo
- Rosa – Fucsia. (Rodríguez, 2018)
 OBJETIVOS:
• Identificar los diferentes tipos de bacterias.
• Visualizar su morfología y disposición.
• Analizar estructuras de bacterias gram positivas y gram negativas.

Materiales y reactivos

Material biológico:
• E. colí
Instrumentales:
• 4 porta objetos
• 4 cubre objetos
• 1 lámpara de alcohol
• 4 cajas Petri
• 1 vaso de precipitado
• 1 piseta
• Guantes desechables
• 2 pipetas pasteur
• Asa bacteriológica

Reactivos:
• Agua
• Cristal violeta
• Lugol
• Fucsina básica
• Aceite de inmersión
• Alcohol al 90%
• Azul de metileno
 PROCEDIMIENTO:
1. Prepárate para el trabajo de laboratorio. Colócate guantes y amárrate
el cabello si lo tienes largo para evitar contaminar la muestra de
bacteria que vayas a analizar. Desinfecta un espacio de trabajo debajo
de la campana extractora o en otra área bien ventilada. Antes de
comenzar, revisa que la lámpara de alcohol y el microscopio estén en
óptimas condiciones.
2. Esteriliza un portaobjetos de vidrio para microscopio. Si el
portaobjetos está sucio, lávalo con agua jabonosa para eliminar la
fig.2
grasa y la suciedad. Desinféctalo con etanol, limpiador de vidrios o el
método que recomiende tu laboratorio. (fig.2)
3. Coloca la muestra en el portaobjetos. coloca de 1 a 2 gotas de la
muestra en el portaobjetos de vidrio. Extiéndela uniformemente
sobre el portaobjetos para formar una mancha delgada. (fig.3)
4. Fija la muestra por calor. El calor fijará las bacterias al portaobjetos
de forma que no se enjuaguen tan fácilmente durante la tinción. Pasa
rápidamente el portaobjetos dos o tres veces por la llama de la
lámpara de alcohol.
5. Empapa la muestra con cristal violeta. Usa una pipeta para empapar
Fig.3 la muestra de la bacteria con varias gotas de tinte cristal violeta, a
veces llamado violeta de genciana. Espera de 30 a 60 segundos.
(figs.5)
6. Enjuaga suavemente el cristal violeta. Inclina el portaobjetos y usa un
matraz de lavado para rociar un pequeño chorro de agua destilada
sobre la parte superior del portaobjetos. (fig.6)
7. Empapa la mancha con yodo y luego enjuaga. Usa una pipeta para
cubrir la mancha con yodo. Déjala reposar por lo menos por 60
segundos, luego enjuágala cuidadosamente con el mismo método
Figs. 5 (fig.7)
8. Agrega un decolorante y luego enjuaga rápidamente. Para este paso
crítico, se usa normalmente una mezcla de acetona y etanol en una
proporción de 1:1. La realización de este paso debe calcularse
cuidadosamente. (figs.8)
9. Empapa la mancha con un colorante secundario y luego enjuaga. Se
usa un colorante secundario, normalmente safranina o fucsina, para
agregar un contraste adicional entre las bacterias Gram positivas y
Gram negativas, tiñendo las bacterias decoloradas (Gram negativas)
 de rosado o rojo. Deja el colorante en la muestra por lo menos por
45 segundos, luego enjuágalo. (fig. 9)
10. Seca el portaobjetos. Puedes dejar que el portaobjetos se seque con
el aire o manualmente. (fig.10)
11. Una vez seco coloca en la superficie aceite de inmersión. (fig11)
Fig.6 12. Prepara el microscopio óptico. Coloca el portaobjetos bajo el
microscopio óptico. (fig. 12)
13. Identifica las bacterias Gram positivas y Gram negativas. Las
bacterias Gram negativas se verán rosadas o rojas, ya que el violeta se
enjuagó a través de las delgadas paredes celulares y luego ingresó a
ellas el colorante secundario rosado.(fig.13)

Fig.7

Figs. 8 Fig. 9 Fig. 10

Fig. 11

fig.12

fig.13
 Resultados y Discusión

Muestra 1 Muestra 3

Muestra 2

Muestra 4

Fig. 1.3
Fig.1.1 Fig.1.2 Fig.1.4

• Tinción de Gram de Escherichia coli.

• Se tiño de color rosadas o rojas.
• Bacterias gram negativas en forma de bacilos en racimos.

La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica

de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las
bacterias. Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884.
El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible
diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas.
Una tinción es la adherencia de moléculas de un colorante a una superficie.
Esta práctica como ya fue explicado anteriormente, trató específicamente sobre la
tinción de Gram en bacterias de E. Coli.
Este tipo de tinción permite detectar la existencia de bacterias, usado está vez en
un fluido a base de heces fecales. Está tinción tiñe de diferentes colores a las
 bacterias gram negativas y gram positivas, ya que sus paredes celulares son
distintas.
Las bacterias Gram positivas tienen una gruesa capa de murena o peptidoglicano
en su pared, por ello estás mismas se tiñen de color púrpura y las bacterias Gram
negativas tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa más externa de
lipopolisacáridos, lipoproteínas y lípidos siendo esto un factor para que se tiñan
de color rosadas o rojizas.
En nuestros resultados pudimos observar que estás se tiñeron de color rosado y
rojo, por lo que podemos concluir que las bacterias de E. Coli que pudimos
observar en nuestra práctica de laboratorio eran gram negativas por la tinción que
se presentó.
Con esto, nuestros resultados fueron que en las primeras muestras bajo dicha
tinción, observamos bacterias de E. coli teñidas de color rosa (fig. 1.1, 1.2 y 1.4)
lo que quiere decir que son bacterias gram negativas y por lo tanto indica que
tienen una capa de peptidoglicano más fina y capa más externa de
lipoposacaridos, lípidos y proteínas.
En la última muestra (fig.1.3) no observamos ninguna tinción, a lo que
atribuimos a que no se ejecutó de manera adecuada dicha tinción, sin poder
analizar el tipo de bacteria que era.

Conclusión
• Las primeras tres muestras se tiñeron de color rosa/rojo por lo que se trata
de bacterias gram negativas.
• E. coli es gram negativa por lo que los resultados son correctos
• La cuarta muestra no se logra apreciar bacilos, es por eso que no se observó
ninguna tinción. (fig.1.3)
Fichas técnicas
Azul Metileno
Propiedades químicas:
Toxicidad:
• Formula química:
• Nocivo en caso de
C16H18ClN3S
indigestión.
• Peso molecular: 373.9
• Provoca irritación cutánea.
• Soluble en agua
• Provoca irritación ocular Propiedades Físicas:
grave. • pH: 3-4.5
• Puede irritar las vías • Solido • Soluble en alcohol
respiratorias. • Verde negruzco
• • Olor inodoro
• Punto fusión: 100°C-110°C
• Punto ebullición: 190°C
 Agua

Toxicidad: Propiedades químicas:

• No corrosivo para la piel. • Formula química: H2O
• No irritante a los ojos. Propiedades físicas: • Polar
• No es peligroso en caso de • pH neutro
• No tiene color, sabor y olor.
indigestión. • Solvente universal.
• Punto ebullición 100°C
• No es peligroso en caso de • Masa molar: 18
• Estado sólido, liquido,
inhalación. •
gaseoso.
• •
• Densidad: 1g/mol
•
Fucsina
Toxicidad

Puede provocar cáncer

Propiedades físicas:
Propiedades químicas: o Usar guantes.
• Estado liquido
• C20H20N3·HCl o Ropa de protección.
• Color rojo
• Masa molar: 337.86 g/mol o Lentes de seguridad.
• Olor: fenólico
• Soluble en agua o En caso de malestar
• Punto fusión 200°C llamar a un centro de
• • Soluble en alcohol
información
• pH 1-3
toxicológica o a un
médico.
o

Aceite de inmersión

Toxicidad:
Propiedades físicas:
• Nocivo
• Liquido viscoso.
• Evítese el contacto con
• Color trasparente o
Propiedades químicas: la piel.
amarillo claro.
• Nocivo por indigestión.
• Olor raro • Insoluble en agua.
• Punto ebullición 340°C • Inflamación 110°C
• • Densidad 0.92 a 0.99 g/mol
• Temperatura ambiente.
 Alcohol Toxicidad:

Propiedades físicas: • Contacto con ojos:

irritación, dolor,
• Punto ebullición 78.3°C sensación y quemadura.
• Sin color • Es altamente inflamable,
• Liquido mantener alejado de
Propiedades químicas:
• Soluble en agua fuentes de ignición.
• • C2H6O • Inhalación: el vapor
• Masa molar 46.07 g/mol puede causar tos,
• pH neutro somnolencia y dolor de
• Densidad de vapor 1.6 cabeza.

Lugol
Propiedades físicas: Propiedades químicas:

• Color marrón a • Formula química

violeta. KI
• Solución acuosa. • Masa molar
• Punto fusión 953°K 166.0028 g /mol
• Punto ebullición • Soluble en agua
1600°K • pH 7
• Sabor salado • Densidad 3.12
amargo. g/mol
• Inodoro Toxicidad:

• Puede provocar una reacción alérgica en

la piel.
• Puede presentar asma o dificultades
respiratorias en caso de inhalación.

Cristal violeta
Propiedades físicas: Propiedades químicas:

• Color azul verdoso • Formula química:

brillante. C24H28N3Cl
• Olor no tiene. • Peso molecular:
• Sabor no tiene. 407.99 g/mol
• Punto fusión 184- Toxicidad • Soluble en agua.
194°C • Densidad
• Nocivo en caso de indigestión
• Solido 1,19g/cm3
• Provoca lesiones oculares graves.
• Polvo cristalino • pH 2.5-3.5
• Susceptible de provocar cáncer.
• Es sensible a la luz.
• Muy toxico para los organismos
acuáticos, con efectos nocivos
duraderos.
 Evidencias de la organización para realizar el trabajo.

Referencias:
Bertomeu, E. & Schoon, D. (2020, 31 agosto). Cara a Cara con Doug Schoon: Volumen 3.
Independently Published.
Equipo editorial. (2022, 20 julio). Tinción de Gram. Lifeder. Recuperado 23 de octubre de
2022, de https://www.lifeder.com/tincion-de-gram/
González, Cuevas, Cortés, Orduña.(2020). Las tinciones basicas en el laboratorio de
microbiologia: Un enfoque gráfico. Zaragoza, UNAM.
López, Hernández, Colín, Ortega, Cerón, Franco.(2014). Las tinciones basicas en el
laboratorio de microbiologia, Investigación en discapacidad,Vol 3.
Ormaechea, D. E. (2022, 10 junio). ¿En qué consiste la tinción de Gram? canalSALUD.
Recuperado 23 de octubre de 2022, de https://www.salud.mapfre.es:443/pruebas-
diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/tincion-de-gram/
Prieto, P. B. (2020, julio 25). Tinción de Gram: usos, características y tipos.
Medicoplus.com. https://medicoplus.com/ciencia/tincion-gram

Rodríguez, P., Arenas, R.(2018). Hans Christian Gram y su tinción, Ciudad de México.
DCMQ, Vol 16.
Tinción de Gram. (2020, 17 diciembre). EduLabC. Recuperado 23 de octubre de 2022, de
https://edulabc.com.mx/tincion-de-gram/
Tinción de Gram. (s/f). Medlineplus.gov. Recuperado el 23 de octubre de 2022, de
https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-de-gram/