PRÁCTICA DE LABORATORIO

TINCIÓN DE GRAM

GRUPO 403

PROFESOR

Jonathan Jair Martínez Martínez

MATERIA

Biología II

ALUMNOS

01. Dana Paola Alvarado Segura

08. Mariano Cruz Coronado
18. Luis Daniel Joseph Chacón
28. Diego Muñoz Solórzano
32. César Alberto Rentería Fernández
33. Ximena Rodríguez Martínez
35. Sarahí Rubalcaba Venegas

Marzo 2024

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 RESUMEN
A lo largo de esta práctica, se llevó a cabo el proceso de tinción de Gram, a partir del
cual logramos identificar su tipo de Gram y el tipo de bacteria de acuerdo a su
morfología. Al iniciar la práctica se tomaron dos muestras de exudados faríngeos
diferentes, sobre cada una se siguieron los pasos previos a y del procedimiento de
tinción de Gram: la preparación húmeda, fijación, tinción y finalmente se observó el
resultado de este proceso. De ello conseguimos identificar en una muestra, bacterias
Gram-positivo y en la otra Gram-negativo; así como el tipo de bacteria, teniendo cocos
y bacilos. El resultado del tipo de Gram describió en parte a la bacteria, a cómo
dependiendo de la pared celular que esta tenía, se lograron fijar más o menos los
colorantes de la tinción. Con todo esto pudimos concluir que es importante realizar
correctamente cada uno de los pasos de tinción de Gram para obtener una expresión e
identificación más clara y precisa de la bacteria.

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 INTRODUCCIÓN
La técnica de tinción de Gram fue desarrollada en 1884 por el bacteriólogo danés Hans
Christian Gram. Es una técnica de laboratorio utilizada para identificar y clasificar
bacterias en dos grupos principales: Gram-positivas y Gram-negativas. Se utiliza
comúnmente en microbiología y se basa en la capacidad de la estructura de las células
bacterianas para retener o no una tinción de cristal violeta y yodo durante el proceso;
mismo que permite ver ciertas características fenotípicas que sirven para
diferenciarlas, como la forma bacilos o cocos (Arenas, Rodríguez, 2018).

La tinción de Gram es una técnica valiosa en el diagnóstico de infecciones bacterianas y

en la selección de antibióticos, ya que las bacterias según su Gram, pueden responder
de forma diferente a los diversos antibióticos.

El procedimiento comienza con la preparación de una muestra de la bacteria en un

portaobjetos. Luego se aplica una solución de cristal violeta, seguida de una solución
de yodo, que ayuda a fijar el tinte en las células bacterianas. Después se lava con
alcohol para remover el exceso de tinte, y finalmente se tiñe con una solución de
safranina para contrastar la muestra. Las bacterias que retienen el tinte se conocen
como Gram-positivas, mientras que las que no lo hacen se conocen como Gram-
negativas (Sociedad Española de Medicina de Laboratorio, 2022).

Gram-positivas

Las bacterias Gram-positivas tienen una apariencia púrpura distintiva cuando se

observan al microscopio después de la tinción de Gram. Esto se debe a la retención de
cristal violeta en la capa gruesa de peptidoglicano de la pared celular, una molécula
que confiere rigidez y protección a la célula. Las bacterias Gram-positivas también son
importantes en la producción y fermentación de alimentos y medicamentos en la
producción de antibióticos como la penicilina.

Gram-negativas

Las bacterias Gram-negativas tienen un color rojizo pálido cuando se observan al

microscopio después de la tinción. Esto se debe a que la estructura de su pared celular
no puede retener la tinción de cristal violeta, pues es más delgada y compleja que la de
las bacterias Gram-positivas, por lo que se colorea solo con la tinción de safranina.
Además del peptidoglicano, la pared celular de las bacterias Gram-negativas también
contiene una membrana externa compuesta por lipopolisacáridos, que les proporciona
una mayor resistencia a los antibióticos y otras sustancias químicas, esto las hace
objeto importante de la investigación científica en la búsqueda de nuevos tratamientos
contra infecciones bacterianas. Algunas de estas tienen la capacidad de fijar nitrógeno
atmosférico en las raíces de las plantas y la producción de compuestos útiles en la
industria alimentaria y farmacéutica (Steward, 2019).

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 OBJETIVOS
Aprender a realizar la tinción de Gram para identificar su tipo de Gram, y a partir de la
observación de su morfología, el tipo de bacteria.

Objetivos particulares

 Conocer las características morfológicas de bacterias tales como: cocos,

estreptabacilos, estreptococos, bacilos con endospora, estafilococos y bacilos.
 Llevar acabo de forma adecuada y precisa el procedimiento de la tinción de
Gram.

MATERIALES Y MÉTODO

MATERIALES REACTIVOS

 Microscopio  Agua
 Mechero de bunsen  Cristal violeta (colorante)
 Portaobjetos  Lugol (colorante)
 Gradilla  Safranina (colorante)
 Tubos de ensayo  Alcohol-acetona (decolorante)
 Pipetas  Agua
 Piseta  Cristal violeta (colorante)
 Hisopos  Lugol (colorante)
 Puente de tinción  Safranina (colorante)
 Aceite de inmersión  Alcohol-acetona (decolorante)

MÉTODO

Tinción de Gram

NOTA: Es importante no perder de vista el frente de la laminilla donde estará la muestra, para
obtener buenos resultados.

1. FROTIS O PREPARACIÓN HÚMEDA

1) Tomar una laminilla (portaobjetos) y coloca en ella una gota de agua con su
respectiva pipeta. IMPORTANTE: NO MEZCLAR PIPETAS
2) Exudado faríngeo: Tomar una muestra de la zona faríngea de alguna persona
(garganta, cerca de las amígdalas) con un hisopo, frotando suavemente para
tomar muestra de las bacterias que ahí habitan. Si la persona presenta algún
síntoma de dolor en garganta, habrá mayor posibilidad de encontrar bacterias.
3) La muestra en el hisopo deberá ser dispersada en la gota de agua colocada
previamente en la laminilla. Tener precisión para que el hisopo no absorba
toda el agua, pero lograr pasar la muestra.

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2. FIJACIÓN
1) La laminilla deberá ser pasada por el fuego del mechero de 3-4 veces según las
condiciones, hasta que el agua se evapore por completo. Debe haber un
extremo cuidado en no sobreexponer nuestra muestra al calor porque las
bacterias pueden morir, esto se mide probando la tolerancia de la
temperatura de la laminilla en nuestra piel.
2) Se mostrará en la laminilla una pequeña mancha en el centro, que sería la
fijación de las bacterias, si pasa esto, se puede dar continuidad a la práctica,
sino, probablemente las bacterias murieron y puedes tomar otra prueba.
3. TINCIÓN
Se procede a la coloración de nuestra muestra con 4 sustancias distintas, la laminilla
debe estar colocada en el centro del puente de tinción.
i. La coloración se dará en el siguiente orden:
1. cristal violeta (violeta)
2. Lugol (amarillo-naranja)
3. acetona (transparente, oler, para diferenciar del agua)
4. safranina (rojo)
ii. El proceso para cristal violeta (1), Lugol (2) y safranina (4) se dará de la misma
manera:
1. Se coloca una gota del colorante correspondiente según su orden, hasta
que cubra nuestra muestra bacteriana por completo (1-2 gotas)
2. Tiempo de espera de un minuto para que pueda interactuar
3. Pasado el minuto, la laminilla se inclinará para que el líquido se caiga de
la muestra, y con la ayuda de una piseta quitaremos el exceso de
colorante. Debe ser precisa la cantidad de agua con la que
enjuaguemos para no eliminar la muestra, solo el exceso de colorante
4. Para quitar el exceso de agua, damos unos leves golpecitos a la laminilla
con nuestra mano, cuidando el frente y reverso de la laminilla, y
proseguimos con el siguiente colorante, según corresponda.

iii. El proceso Acetona (tercero en ser colocado):

1. Se coloca de (1-2 gotas) para cubrir la muestra bacteriana por
completo
2. El tiempo de espera debe ser estrictamente de 10 segundos, ya que, si
esto no se cumple, puede dañar los resultados.
3. Transcurrido el tiempo, se inclinará la laminilla y con la piseta se quitará
el exceso, teniendo el mismo cuidado de no sobreexponer nuestra
prueba al agua
4. Quitar el exceso de agua dando unos golpecitos leves a la laminilla con
nuestra mano, cuidando el frente y reverso de la laminilla.

iv. Al terminar la colocación de las 4 sustancias en el orden correspondiente, la

laminilla se deberá secar por debajo con papel
v. La parte de arriba (donde está la muestra) se secará con aire agitando la
laminilla levemente de 1 a 2 minutos, sin perder el frente de la laminilla donde
está nuestro cultivo bacteriano

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4. OBSERVACIÓN
1) Colocar la muestra en el microscopio.
2) Colocar una gota de aceite de inmersión a nuestra prueba.
3) Preparar el objetivo x100 del microscopio.
4) El objetivo debe tocar la gota de aceite, no la prueba.
5) Enfocar en las manchas de color que se encuentren, serán las partes que
lograron teñirse.
6) Identificar los resultados, ya sea si encontramos alguna célula que se vino en la
muestra o la forma de las bacterias que encontramos; ya sean cocos,
estreptococos, estafilococos, bacilos, bacilos con endospora o estreptobacilos.

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RESULTADOS
Objetivo x100

Tipo de Tipo de
Origen Descripción
bacteria Gram
Muestra 1 Exudado En ella se pueden Bacilos Negativo
faríngeo observar distintos
tipos de variaciones
de pequeñas barras
o varas de cuerpo
alargado, las cuales
están alrededor de
toda la muestra,
unas a simple vista
son más grandes, de
un color obscuro y
otras tan delgadas
que apenas se puede
distinguir su color.
Presentan
pigmentación de
colores rosados y
rojos algo claros.

Muestra 2 Exudado La muestra tomada Cocos Positivo

faríngeo se tiñó de violeta. En
ella se logra observar
a primera vista una
célula eucariota, en
la que se hace visible
de un color violeta
más intenso su
material genético,
pero dentro de esta
se hacen ver en el
mismo tono,
pequeños puntos,
los cuales son las
bacterias.

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 DISCUSIÓN
En los resultados del trabajo, a través el método de tinción de Gram creado por el
bacteriólogo Christian Gram (1884), de acuerdo a lo visto en clase y la bibliografía
revisada antes, sabemos que mediante el uso de una serie de reactivos (cristal violeta,
lugol, alcohol y safranina) y siguiendo un estricto procedimiento, se tiñen de color
purpura las bacterias Gram positivas y rosa/rojo las Gram negativas. Esta clasificación
se basa en las diferencias en la estructura de la pared celular de las bacterias, en
nuestro caso, en la muestra 1 identificamos bacterias del tipo “bacilo” que mostraron
una tinción rosa/rojo, siendo entonces tipo Gram-negativo debido a que tienen una
pared celular más delgada y compleja compuesta de peptidoglicano, lípidos y otros
componentes que no puede retener la tinción violeta. Y por otro lado en la muestra 2,
identificamos bacterias del tipo “cocos” que se tiñeron de purpura, siendo del tipo
Gram-positivo porque tienen una pared celular gruesa y uniforme compuesta
principalmente de peptidoglicano que sí retiene el cristal violeta.

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CONCLUSIONES DEL EQUIPO
Dana Paola Alvarado Segura

Puedo concluir que el sobrellevo adecuado del procedimiento de la tinción de Gram es

importante para obtener mejores resultados de tinción y con ello una mejor y más
detallada observación de las características de las bacterias. Además de poder
comprender de una mejor manera por qué y cómo la estructura de la pared celular de
las diferentes bacterias, afecta este proceso de tinción.

Mariano Cruz Coronado

En lo personal pude notar que en la práctica el equipo puede llevar a cabo todos los
pasos correctamente ya que pudimos realizar exitosamente todas las indicaciones
dadas. Se lograron los objetivos deseados además de que fuimos muy eficientes y
efectivos a la hora de realizarlos.

Luis Daniel Joseph Chacón

La práctica fue completamente de mi agrado, puesto que estuve involucrado en varias

ocasiones y puedo concluir que es la mejor practica que he realizado y la que más me
ha sorprendido su resultado, puesto que al ser observadas no me imagine ver eso y
agregando que nuestro equipo tuvo la oportunidad de observar una muestra desde
una garganta infectada. Y una vez más el experimento se puede concluir como exitoso.

Diego Muñoz Solórzano

Tal y como hemos podido comprobar, se cumple con lo propuesto por el bacteriólogo
C. Gram y podemos observar estos tipos de bacterias, lo cual me deja con una
perspectiva más consciente de que hay procesos no tan complicados como yo solía
creer que nos pueden ayudar a saber con exactitud qué tipos de bacterias tenemos, y
en caso de ser perjudicial para nuestra salud probar con que antibióticos
contrarrestarla.

César Alberto Rentería Fernández

Ximena Rodríguez Martínez

Sarahí Rubalcaba Venegas

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CONCLUSIÓN GENERAL
En las muestras realizadas se lograron identificar correctamente el tipo de Gram y de
bacteria, debido a que se aprendió a lo largo de la práctica el cómo realizar una
tinción de Gram. A partir de esto podemos decir que se cumplió el objetivo general
en base al cumplimiento de los particulares, pues al ver los resultados arrojados en
cada muestra, siendo de diferente tipo bacteriano, ubicamos las características
morfológicas de estas. También sobrellevamos cada uno de los pasos del proceso de
tinción de manera precisa y correcta. Ahora sabemos cómo hacer este tipo de tinción
y además comprender que la estructura de la pared celular de la bacteria es lo que la
hace reaccionar y mostrarse de una u otra manera ante la tinción. Por últimos, darnos
cuenta de la importancia y utilidad que la identificación bacteriana puede tener para
prevenir y hacer frente a las diferentes enfermedades que ponen en riesgo a la salud.
En conclusión, se cumplieron debidamente los objetivos de esta práctica.

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 REFERENCIAS
Arenas, R. & Rodríguez, PA. (2018). Hans Christian Gram y su tinción. Dermatología
Cosmética, Médica y Quirúrgica. 16(2):166-167.
https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2018/dcm182n.pdf
Sociedad Española de Medicina de Laboratorio. (2022). Tinción de Gram. LabTest
Online. https://www.labtestsonline.es/tests/tincion-de-gram
Steward, K. (2019). Gram positivos frente a Gram negativos. Technology Networks
Limited. https://www.news-courier.com/immunology/articles/gram-positive-vs-
gram-negative-323007

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