ELEMENTOS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y MICROSCOPÍA

ÓPTICA.

L. Rivera Trujillo1, A. Hernández Sierra 2

1,2,
Estudiante de Lic. en Ciencias Naturales, Universidad Surcolombiana, Facultad de Educación, Neiva-Colombia

RESUMEN

En este informe de la práctica experimental, titulado: Elementos del laboratorio de microbiología y

microscópica óptica, se exponen las herramientas de laboratorio para llevar a cabo la visualización
microscópica de los grupos y estructuras facultativas de las bacterias, mediante el desarrollo de un frotis
adecuado con la complementación del proceso de tinción de Gram, arrojando como resultado la
revelación de las bacterias Gram positivas y Gram negativas; Es de resaltar que en el desarrollo de la
tinción se debe tener en cuenta el orden y el tiempo de las sustancias, para conseguir un buen resultado;
ya que es uno de los objetivo de esta práctica .

Palabras claves: Bacterias, Tinción, Frotis, Gram positivas, Gran negativas.

ABSTRACT

In this report of the experimental practice, entitled: Elements of the microbiology and optical microscopic
laboratory, the laboratory tools are exposed to carry out the microscopic visualization of the groups and
facultative structures of the bacteria, through the development of an adequate smear with the
complementation of the Gram staining process, resulting in the revelation of Gram positive and Gram
negative bacteria; It is noteworthy that in the development of the staining, the order and time of the
substances must be taken into account, in order to achieve a good result; since it is one of the objectives
of this practice.

Keywords: Bacteria, Staining, Smear, Gram positive, Gram negative

1. MARCO TEORICO de la tinción, decoloración de tinción, y

contratación, se realizan de la siguiente manera:
La coloración de Gram cuenta con cuatro pasos
fundamentales cada uno de ellos con tiempos
diferentes dependiendo de la marca de los
reactivos (Cristal violeta, Lugol, alcohol,
safranina), Se deben seguir los pasos de la
tinción debido que si se altera el orden el
resultado no será el adecuado, dado que cada
colorante depende del otro para reaccionar
correctamente; los pasos son la tinción, fijación
 Tinción: Añadir cristal violeta al frotis
de las bacterias en este caso tanto Gram
positivas como Gram negativas van a
teñir generalmente se deja actuar por 30-
40 segundos y enjuagar con agua
destilada o norma.
 Fijación: se le añada Lugol que actúa
 como mordiente o fijador del cristal
violeta aumentando su fijación creando
un complejo insoluble en agua las Gram
positivas tienen mayor afinidad con el
lugol, lo que permite que se fije bien el
cristal violeta a su pared generalmente
se espera 30-40 segundos para realizar el
enjuague con agua natural o destilada.
 Decoloración: se añade alcohol a las
bacterias en este caso se bacterias Gram
negativas se ven afectadas ya que su
pared es más delgada permitiendo que el
alcohol ingrese a su pared para
decolorarla, mientras que las Gram
positivas usa su pared como barrera y no
permite la salida del cristal violeta,
generalmente se deja actuar por 15
segundos.
 Contra tinción: se añade safranina a las
bacterias donde se tiñen las paredes
decoloradas en este caso las paredes de
las bacterias Gram negativas de color
rosa, ya que las Gram positivas se
encuentran saturadas de cristal violeta.
Fernando, (2020)
A juzgar por Lab Tests Online, (2017) comentan
que la tinción de Gram y el cultivo del material
obtenido de un foco infeccioso son las pruebas
microbiológicas más utilizadas para identificar
la causa de una infección. A menudo, el simple
hecho de saber si el microorganismo causante de
la infección es Gram positivo o Gram negativo.
Y De acuerdo con Rodríguez & Arenas, (2018)
enuncian que se llama bacterias Gram positivas
a aquellas que retienen la tinción azul-violeta, y
se denomina bacterias Gram negativas a las que
se decoloran y después se tiñen con safranina.
Esta diferencia de tinciones se debe a la
estructura de las paredes celulares de ambos
tipos de bacterias. El autor Rodríguez & Arenas,
(2018) también informa Las bacterias Gram
positivas tienen una pared gruesa compuesta de
peptidoglucanos y polímeros, e impermeable,
que hace que resista la decoloración. En cambio,
las bacterias Gram negativas tienen una capa
delgada de peptidoglucanos más una bicapa de
lipoproteínas que se puede deshacer con la
decoloración.
Conforme a J, S, & L,(2019) nos expresan que
la Staphylococcus aureus es un microorganismo
descubierto en 1880 por el cirujano escocés
Alexander Ogston (1844-1929), quien encontró
que el pus producido en las heridas quirúrgicas
era generado por esta bacteria, al observar un
absceso de uno de sus pacientes al microscopio.
Esta bacteria está clasificada como un coco
Gram positivo que se agrupa en racimos, β
hemolítico, catalasa y coagulasa positivo. Se
describe que este microorganismo hace parte de
la flora normal de los seres humanos
encontrándose principalmente en la piel, en la
zona nasofaríngea, pliegues inguinales y axilas.
Conforme a Staphylococcus aureus, (2012)
pronuncia que Staphylococcus aureus pertenece
a la familia Staphylococcaceae. Es Gram
positivo, aunque las cepas viejas o los
microorganismos fagocitados se tiñen como
Gram negativo. Tiene forma de coco y puede
aparecer en parejas, en cadenas o en racimos. Su
tamaño oscila entre 0,8 a 1,5 micras de diámetro,
es inmóvil y algunas cepas producen una cápsula
externa mucoide que aumenta su capacidad para
producir infección. En relación con su
metabolismo, es anaerobio facultativo,
coagulasa positivo, catalasa positiva y oxidasa
negativa.
2. MATERIALES
.
 Material de bioseguridad
 Guantes
 Tapa bocas
 Bata
 Gorro
 Material de laboratorio
 Portaobjetos
 Asa redonda
 Mechero
 Microscopio
 Toallas
 Marcador
 Solución salina 0,90%
 Cristal violeta
 Lugol
 Acetona
 Safranina
 Alcohol
  Agua destilada
 Toallas de cocina
 Marcador

3. METODOLOGIA
4. RESULTADOS Y
DISCUSION
Para la práctica de laboratorio se empleó las
siguientes pautas:
En la práctica de laboratorio obtuvimos los
siguientes resultados:
 Lo primordial es tener todo lo de
bioseguridad con las manos previamente
Demostrado en la Figura No.1 y No.2 de la
levadas.
muestra Staphylococcus aureus con tinción de
 Realizar el frotis adecuadamente con los
Gram, se pude observar acumulación de puntos
siguientes pasos:
color violeta encerrada con un aro rojo, que para
nosotros es la bacteria Gram positiva
 Colocar una gota de solución salina
estafilococos de color violeta, como se en la
0,90% en el portaobjetos en el centro.
figura No 1 y No 2 por otro lado, el fondo en su
 Flamear el asa redonda, para luego
mayoría con Gram negativas de color fucsia, es
tomar con el asa una cantidad pequeña
de resaltar que la concentración de muestra del
del cultivo, trasferir al portaobjetos y
cultivo en esta parte del portaobjetos, está menos
mezclar hasta obtener una consistencia
saturada a comparación de la figura No.2
homogénea.

 Dejar secar sin acelerar el proceso para

luego hacer una fijación de las bacterias al
portaobjetos.
 Fijar las bacterias al portaobjetos, llevando
este al calor 3 veces suavemente durante
unos segundos y dejar enfriar
 Luego de haber hecho el frotis, se continua
con la tinción; para este, se debe llevar los
siguientes pasos:

 Colocar el frotis en la rejilla, cubrir este

con las diferentes sustancias llevando el
orden y el tiempo, recordando que
después de cada sustancia se lava con
agua destilada en forma diagonal.
Orden y tiempo:
1. Cristal violeta…1min
2. Lugol………….1min
3. Acetona ………seg
4. Safranina ……….seg
 Dejar secar y llevar al microscopio al
objetivo de 100.
Figura No 1 muestra de Staphylococcus aureus
señalando con un aro rojo el estafilococo
En la ilustración No.2 se pude observar otro lado
de la porta objetos; esta sección del portaobjetos
está saturada, debido a que cuando se hizo la
aspersión del traslado de la muestra no se
distribuyó de forma homogénea, también se
destacan puntos de color fucsia que son los
Gram negativos en la mayoría de la muestra.
 experiencia visual.

5. CONCLUSIONES

Para concluir, la tinción de Gram, esta nos

Figura 2 muestra de Staphylococcus aureus con muestra
saturada
facilita diferenciar entre bacterias Gram
positivas y Gram negativas, donde las Gram
positivas se tiñen de un color morado ya que el
colorante se queda atrapado en la capa gruesa de
los peptidoglucanos en cambio las Gram
negativas se tiñen de un color rojo o rosa, ya que
su capa de peptidoglucano es más delgada.
además, Lo que pudimos observar en el
microscopio nos permitio la identificación de
sus estructuras y sus formas.

por otro lado, en nuestros resultados podemos

Para analizar nuestros resultados mediante Este evidenciar como el manejo de la colocación de
cultivo según winn, (2006) obtenido de un la muestra, el orden y tiempo de las diferentes
microorganismo causante de la infección es sustancias interfieren, ya que, se obtuvo
Gram positivo y Gram negativo esta bacteria complicaciones al determinar que bacteria es con
está clasificada como un coco Gram positivo precisión.
estafilococos que se agrupa en racimos como se
evidencia en la Figura No.3 mediante esta
definición, podemos analizar que nuestros 6. REFERENCIAS
resultados comparar con la teoría concuerdan
realzando la forma y color de nuestros
resultados.

Figura No 3 estructura de un estafilococos tomada de winn

(2006)

Por otro lado, Aquiahuatl & Perez, (2004).La

función de cada uno de los colorantes varía. al
utilizar el cristal violeta, el Lugol (contiene
yodo) y la combinación que usamos de acetona-
alcohol, las bacterias Gram positivas van a
quedar de coloración azul o violeta, al analizar
nuestra muestra pude que la tinción o tiempo
que se realizó interfiriera para tener una mejor
 Fernando, J. (09 de Septiembre de 2020). MDM Cientifica. Obtenido de MDM
Cientifica:https://mdmcientifica.com/nunca-olvidemos-el-fundamento-de-la-coloracion-de-gram/
 J, P. G., S, R. M., & L, M. M. (2019). Staphylococcus aureus: generalidades, mecanismos de
patogenicidad y colonización celular. Staphylococcus aureus: generalities, mechanisms of
pathogenicity and cell colonization,http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v17n32/1794-2470-nova-
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 Lab Tests Online. (12 de 12 de 2017). Obtenido de https://labtestsonline.es/tests/tincion-de-gram
 Rodríguez, P. A., & Arenas, R. (04 de 2018). Obtenido de
https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2018/dcm182n.pdf
 Staphylococcus aureus. (23 de 09 de 2012). Obtenido de:
https://www.insst.es/documents/94886/353495/Staphylococcus+aureus.pdf/
0f7074f1f1d4441eb808edd4523c9fae#:~:text=Staphylococcus%20aureus%20pertenece%20a
%20la,en%20cadenas%20o%20en%20racimos.

 winn, w. (2006). diagnostico microbiologico. En w. winn, texto y altlas en color . sexta edicion .

 Aquiahuatl, M., & Perez, M. (2004). Manual de practicas. Obtenido de Universidad autonoma
metropolitana :
https://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_MA
RIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf