Practica #2

TINCIÓN DE GRAM
OBJETIVO: Desarrollar la técnica de la tinción de Gram para observar detalles de una tinción
diferencial y distinguir las bacterias Gram positivas de las bacterias Gram negativas.

TEORÍA
Explicar que es una tinción diferencial, describir como se lleva a cabo una tinción diferencial y
explicar el fundamento de la tinción al Gram.

Una tinción diferencial son aquellas tinciones que se usan para diferenciar de una manera más
explícita y exacta los microorganismos, partiendo de la pared celular. Los colorantes más
utilizados: azul de metileno, cristal violeta, safranina, son catiónicos y se combinan fuertemente
con componentes celulares cargados negativamente, como los ácidos nucleicos y los polisacaridos
ácidos.

Dependiendo de que método uses, vas a seguir una serie de pasos, pero la básica o la que
nosotros conocemos se lleva a cabo tiñendo el frotis, ya fijado con calor, con el colorante “cristal
violeta” y se deja reposar 1 min, despues se lava con agua destilada, seguido del lavado, se vuelve
a pintar la muestra, pero esta vez con “yodo de Gram” y se dja reposar de 1 a 2 minutos, despues
se lava con alcohol-cetona y para terminar, se vuelve a pintar la muestra, pero esta vez con
“safronina” durante 1 a 2 minutos y lavar y secar.

La Tinción al Gram, es un método de tinción diferencial que se basa en los distintos niveles de
lípidos en las celulas, permitiendo así la coloración roja o violeta de la célula según sus niveles de
grasas y la composición de su pared celular. Se usa el colorante “cristal violeta”, “yodo de Gram” y
safronina.

MATERIAL REACTIVOS
3 portaobjetos Cristal violeta
1 asa de cultivo Yodo de gran
1 mechero bunsen Safranina de gran

Alcohol. Cetona.

MUESTRAS
APARATOS
Suero de panela
Microscopio
compuesto Yakult
PROCEDIMIENTO

• Desinfectar las mesetas y encender mecheros

• Preparar en forma aséptica 3 frotis uno de cada muestra y fijarlos.
• Colocar las preparaciones en un puente de tinción. Colocar el frotis en la tarja encima del
puente para tinción, colocar suficiente cristal violeta y dejarlo actuar por 1 min., tener
cuidado de respetar los tiempos de cada colorante.
• Enjuagar al chorro del agua cuidando de que este no le pegue directamente a la
preparación.
• Agregar el segundo colorante, yodo de Gram., dejarlo actuar durante 1 minuto. Una vez
pasado el tiempo requerido enjuagar el frotis al chorro del agua.
• Agregar el decolorante alcohol-acetona y dejarlo actuar por 30 segundos pasado el tiempo
enjuagar con abundante agua.
• Por último, cubrir el frotis con el colorante de safranina y dejarlo por 1 minuto. Enjuagar
con abundante agua.
• Una vez seco el frotis observar la preparación al microscopio con el objetivo seco débil, ya
que se enfocó la imagen bajar la platina, colocar una gota de inmersión sobre la
preparación y observar la preparación el objetivo de inmersión (100X).

Resultados
Muestra 1

Muestra: Muestra de Yakult

Observacion: En esta muestra vista a travez del

microscopio se puede observar ciertas bacterias en
forma de bastón, por lo que podemos decir que hay
agrupaciones de bacilos en la cual podemos ver
diplobacilos y estreptobacilos.

Su coloración rojiza nos indica que esta muestra es

considerada una Gram negativa, y dado queel
elaborar esta muestra fue algo dificil, es
reconfortable el resultado.
 Muestra 2
Muestra: Suero de Panela

Observación: las células de esta muestra estan teñidas de

color rojo al igual que la muestra anterior por lo que esta
celula es una prueba de las celulas Gram negativas.

Cabe recalcar que esta segunda muestra es con la que más

me tardé y con la que más batalle, ya que al limpiar el
portaobjetos y la muestra con el alcohol-cetona la muestra
se me caia del portaobjetos y tenía que volver a comenzar
desde cero, era algo frustrante.

Conclusión

Según el objetivo de esta practica, se tenía que ver una diferencia de colores entre ambas
muestras para poder apreciar las bacterias Gram positivas (Gram+) y las bacterias Gram negativas
(Gram-), no obstante, esta diferencia de colores no tuvo lugar en mis muestras por lo que
podriamos decir que hubo un erro en alguna de las muestra, y yo considero que fue en la muestra
numero 2 (suero de queso panela) al no remover por completo el colorante de la safronina,
quedandose pigmentados las bacterias y dejandolas de color rojo.

CUESTIONARIO:
Describa como se ven en el microscopio las bacterias gram positivas y las bacterias gram
negativas.

Gram positivas: Las bacterias se pintan de color violeta

Gram negativas: Las bacterias se pintan de color rojo

Describa las diferencias morfológicas de las bacterias gran positivas y de las bacterias gran
negativas.

La pared celular es distinta entre ambas bacterias, mientras que la Gram + son más guresas que las
Gram -, las Gram – contienen un porcentaje más alto de lípidos, ademas de contener una
membrana lipídica externa.

Explique que diferencia existe entre las tinciones simples y las tinciones diferenciales.

Las tinciones simples son aquellas que por medio de un colorante podemos ver los
microorganismos en una sustancia o muestra, pero no simepre es tan exacta, es por esto que se
diferencia las tinciones simples de las tinciones diferenciales, ya que uno es más exacta al teñir
solo los microorganismos que tienen un par de ciertas caracteristicas.