LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

TÉCNICAS DE COLORACIÓN

Rodríguez Fernanda
Piaguaje Alexandra
Diaz Angela
Paredes Catalina
Facultad de Ingeniería
Ingeniería Ambiental
Universidad Mariana

RESUMEN

Una de las más importantes y utilizadas es la tinción de Gram, que es una coloración compuesta porque se
utilizan 2 colorantes, uno primario: cristal violeta o violeta de genciana y uno de contraste, safranina o
fucsina de Gram. Estos colorantes actúan en la pared celular de las bacterias, diferenciándolas como Gram
(+) o Gram (-), de acuerdo a la coloración final que adquiera. Existen diferencias en la composición y
estructura de las paredes celulares de las bacterias Gram positivas o Gram negativas. Estas diferencias son
importantes porque permiten identificar las bacterias y el tratamiento con antibióticos a seguir.

Palabras Clave: Tinción de Gram, Bacterias, Gram Negativo, Gram Positivo.

1. INTRODUCCIÓN
Bacterias Gram positivas: a aquellas que retienen
La técnica de tinción de Gram se basa en la la tinción azul-violeta, se clasifican por el color
capacidad de las células bacterianas para retener que adquieren después de aplicarles un proceso
un tinte cristal violeta y un colorante de contraste químico denominado tinción de Gram.
como el Lugol, y posteriormente la eliminación
del colorante por medio de alcohol y la aplicación 2. MATERIALES Y MÉTODOS
de un colorante de contraste adicional como la
safranina. Las bacterias gram positivas oscuras MATERIALES Y REACTIVOS.
retienen el tinte cristal violeta y aparecen de  Cultivo de Staphylococcus aureus
color violeta, mientras que las bacterias gram  Cultivo de Escherichia coli.
negativas no lo retienen y aparecen de color rojo  Portaobjetos y cubreobjetos.
o rosa.  Asas microbiológicas.
 Colorantes de Gram.
En este informe se realizaron tinciones de Gram  Azul de metileno.
de diferentes muestras bacterianas, incluyendo  Nigrosina o tinta china.
Escherichia coli, Staphylococcus aureus y  Agua destilada.
Streptococcus pyogenes. Se obtendrán  Microscopio.
preparaciones microscópicas de cada muestra y  Mechero.
se observaron al microscopio con objetivos de  Pinzas.
aumento de 100x.  Pipeta Pasteur.
 Botella lavadora.
La tinción de Gram puede proporcionar  Recipiente con solución desinfectante
información rápida para diagnósticos de (hipoclorito de sodio 1%).
infecciones, puede revelar los agentes causales METODO
incluso con una toma de muestra no adecuada.
También hace posible distinguir entre
contaminación de la muestra y una verdadera
infección.
Se utilizo el método de tinción compuesta el cual
se basa en dos pasos, en primer lugar, se hace
una fijación normal y se aplica colorante.
Procedimiento:
1. Preparar una suspensión bacteriana
diluyendo una pequeña cantidad de
cultivo puro en una solución salina
estéril.
3. Cambiar al objetivo de mayor aumento y
enfocar nuevamente.
4. Identificar las bacterias gram positivas
(que se tiñen de violeta) y gram
negativas (que se tiñen de rojo o rosa).
3. RESULTADOS

2. Con el asa bacteriológica, tomar una 1.Observe todas las bacterias con las diferentes
pequeña cantidad de la suspensión coloraciones, determine su morfología y
bacteriana y extenderla en el determine si son bacterias Gram positivas o
portaobjetos. bacterias Gram negativas.

3. Dejar secar la muestra al aire.  Escherichia Coli: Tiene forma ovalada,

4. Cubrir la muestra con solución de cristal
violeta y dejar actuar durante 1 minuto.
5. Lavar con agua corriente para retirar el
exceso de cristal violeta.
de color rosado, Gram negativas, se
encuentran encerradas en una capsula
protectora tienen membrana externa
que la protege de ciertos antibióticos.

6. Cubrir la muestra con solución de Lugol y

dejar actuar durante 1 minuto.

7. Lavar con agua corriente para retirar el

exceso de Lugol.

8. Sumergir el portaobjetos en la solución

de alcohol-acetona durante unos pocos
segundos, lo suficiente para retirar el
colorante de las bacterias gram
negativas.  Staphylococcus aureus: Es una bacteria
con forma de Coco o redondas y están
9. Lavar con agua corriente para retirar el unidas en parejas y en cadenas, Son
exceso de alcohol-acetona. Gram negativas porque se tiñen de color
morado.
10. Cubrir la muestra con solución de fucsina
básica o safranina y dejar actuar durante
1 minuto.
11. Lavar con agua corriente y dejar secar la
muestra al aire.

Observación en el microscopio:

1. Colocar el portaobjetos bajo el

microscopio y enfocar con el objetivo de
menor aumento.

2. Observar la morfología de las bacterias y

buscar agrupaciones.
2 ¿Cuál es el fundamento de la coloración de Dermatología cosmética, médica y
Gram? quirúrgica, 16(2), 166-167.

R/ Lo tinción de Gram es una técnica de

laboratorio, la cual se la utiliza para identificar y
clasificar una bacteria en función de la tinción de
bacterias en características. Permite clasificar los
2 grupos: Gram positivas y Gram negativas. Las
bacterias Gram positivas le tienen el cristal
violeta y aparecen de color morado en la bacteria
Gram negativos no le tienen el cristal violeta y se
muestran de un color morado o rojo.

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Se pudo concluir que la coloración de Gran es

importante, ya que permite de acuerdo a la
estructura y grosor de la pared bacteriana
agrupar las bacterias en Gram negativas y
Grampositivas. Poder observar diferentes
estructuras celulares.

La tinción de Gram es una técnica fundamental

en microbiología y es ampliamente utilizada en la
identificación y caracterización de bacterias en
diversos campos, incluyendo la medicina, la
industria.

En conclusión, la tinción de Gram es una técnica

importante en microbiología que permite la
identificación y clasificación de bacterias en gram
positivas o gram negativas. Los resultados
obtenidos en este informe de laboratorio
demuestran la utilidad de esta técnica y su
aplicabilidad en la práctica microbiológica.

5. REFERENCIAS

BOTERO OSPINA JOSÉ MARÍA. Et al. Manual

Práctico de Microbiología General.
Universidad de Caldas. Manizales, 2011.

Guevara, B. L. (2017). Aislamiento y

caracterización morfológica de cepas
nativas de actinomicetos y su actividad
antagónica contra Ralstonia
solanacearum, Escherichia coli,
Staphylococcus aureus y Salmonella sp.

Rodríguez, P. A., & Arenas, R. (2018). Hans

Christian Gram y su tinción.