Tinción de gram

Alumno dual: Julio César Sobal Cruz

 Introducción
La tinción de gram, es una técnica diferencial, que nos permite la clasificación de
microrganismos en gram positivos y gram negativos (1) esta diferencia se hace
notar en el color que se tornan un color azulado para grampositivas, y un tonalidad
rojiza para los gramnegativos, esto se da ya que las gramnegativas ¨están formadas
por una pared más fina, formada por menos capas de peptidoglicano y una segunda
membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram) (2)¨ por otra parte las gram
positivas ¨ está compuesta por varias capas de peptidoglucano, que conforman una
estructura gruesa y rígida (3)¨ Esta diferencia de colores entre un positivos y
negativos se debe a que el Lugol funciona como fijador del cristal violeta, impendo
que el colorante salga de las membranas, para después añadir el alcohol acetona,
que funciona como decolorante pero esto solo toma efecto en las gram negativas,
ya que al tener menor cantidad de peptidoglucano, es más fácil extraer el colorante,
mientras que con las negativas al tener una mayor cantidad de peptidoglucano el
alcohol no puede pasar, mas bien todo lo contrario sella los poros y el color
azul/purpura queda atrapado en las gram positivas, y a la hora de colocar la
safranina en las gram negativas se tiñen de color rojizo mientras que las gram
positiva no Este trabajo tiene como fin conocer las tinciones gram, identificar y
diferenciar los tipos detenciones gram y su uso.
 Objetivo general
• Realizar la tinción de gram.

Objetivos específicos
• Identificar microorganismos gram positivos.
• Identificar microorganismos gram negativos.
 Materiales y métodos
Material:
1. asa bacteriológica.
2. porta objetos.
3. puentes de tinción.
4. pipetas Pasteur.
5. Mechero bunsen.
6. Piseta

reactivos
1. cristal violeta.
2. Lugol.
3. Alcohol del 96º.
4. Safranina.

Método
1. Preparación de la muestra obtener una muestra de bacterias y colocarla en
un portaobjetos. Puedes obtener la muestra de una colonia bacteriana en
agar o de un cultivo líquido.
2. Realizar fijación, la muestra calentando suavemente el portaobjetos con la
llama del mechero Bunsen. Esto puede hacerse pasando el portaobjetos
varias veces sobre la llama.
3. Aplicación del cristal violeta cubriendo la muestra con cristal violeta durante
aproximadamente 1 minuto. El cristal violeta tiñe todas las células por igual.
4. Lavar el exceso de cristal violeta con agua suavemente.
5. Aplicar la solución de Lugol (solución yodo) sobre la muestra un aproximado
de 1 minuto. Esta solución actúa como un fijador y forma un complejo con el
cristal violeta en las células.
6. Lavar el exceso de solución de Lugol con agua destilada suavemente.
7. Decolorar con alcohol (etanol o acetona) sobre la muestra para decolorar un
aproximado de 15 segundos. Este paso es crítico, ya que las bacterias Gram
positivas retienen el colorante, mientras que las Gram negativas se
decoloran.
8. Lavar con agua para detener la acción del alcohol.
 9. Aplicar safranina sobre la muestra durante aproximadamente 1 minuto. Este
colorante contrarresta la decoloración y tiñe las bacterias Gram negativas.
10. Lavar el exceso de safranina con agua y dejar secar el exceso de agua.

Resultados
Muestra Tinción

Escherichia coli
 Analís de datos y discusiones
La tinción de Gram es una técnica diferencial de microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos, las primeras poseen capas gruesas de peptidoglucano, resultando
en un color azul o púrpura en la tinción, mientras que las segundas muestran una
delgada capa de peptidoglucano, tiñéndose de tonalidades rosadas o rojizas (3)(4).
Siendo el caso de E.coli son Gramnegativas, por esto mismo tiñen de un color
azulado,
Los mayores errores que se suelen cometer a la hora de realizar la practica son:
• Lavados inadecuados: al dejar correr una cantidad demasiada abundante
puede generar que la muestra se barra y no observemos nada en el
microscopio, mientras que si es muy poca puede que no se corren todos los
sedimentos.
• Sobre fijación: a la hora de fijar la muestra con el mechero, si lo realizamos
muy cerca de este mismo o durante poco tiempo, podemos provocar que la
muestra no se fije de la manera correcta o que la muestra se barra con suma
facilidad a la hora de realizar los lavados.

Conclusiones
Los Escherichia coli son gramnegativas, por consiguiente, al tomar la muestra de
una colonia Escherichia coli se sabía que de antemano que la tinción saldría de una
tonalidad rojizas, al observar la muestra debajo del microscopio pudimos observar
Escherichia coli de manera exitosa.
Bibliografías
1. Tinción de Gram. (s/f). Medlineplus.gov. Recuperado el 5 de febrero de
2024, de https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-de-
gram/
2. Inteligente, K. (2020, abril 27). Tinción de Gram. Kapital Inteligente.
https://www.kapitalinteligente.es/tincion-de-gram/
3. Rodríguez, N. Y. M. (s/f). Diferenciando Bacterias Gram Positivo (+) y Gram
Negativo (-) Mediante Tinción de Gram. Unidades de Apoyo para el
Aprendizaje - CUAIEED - UNAM. Recuperado el 5 de febrero de 2024, de
https://uapa.cuaieed.unam.mx/node/1071
4. Tinción de Gram. (s/f). Medlineplus.gov. Recuperado el 5 de febrero de
2024, de https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-de-
gram/
5. INSST. (2021, mayo 25). Staphylococcus aureus. Portal INSST.
https://www.insst.es/agentes-biologicos-basebio/bacterias/staphylococcus-
aureus
6. INSST. (2021, mayo 25). Staphylococcus aureus. Portal INSST.
https://www.insst.es/agentes-biologicos-basebio/bacterias/staphylococcus-
aureus
7. (S/f). Unam.mx. Recuperado el 6 de febrero de 2024, de
https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/publicaciones/libros/cbiologicas/libros/Tinciones.pdf