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Estudio de Tinción de Gram en Bacterias

Este documento describe un estudio morfológico de bacterias utilizando la tinción de Gram. El objetivo es diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas mediante la aplicación de la técnica de tinción de Gram, la cual involucra una tinción primaria, decoloración y tinción de contraste. Se explican los materiales, metodología y fundamentos de la tinción, incluyendo las distintas soluciones y etapas utilizadas.

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Ivan Antonio Ovalle Barajas
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Estudio de Tinción de Gram en Bacterias

Este documento describe un estudio morfológico de bacterias utilizando la tinción de Gram. El objetivo es diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas mediante la aplicación de la técnica de tinción de Gram, la cual involucra una tinción primaria, decoloración y tinción de contraste. Se explican los materiales, metodología y fundamentos de la tinción, incluyendo las distintas soluciones y etapas utilizadas.

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SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA, TURISMO Y ALIMENTOS

LABORATORIO

ESTUDIO MORFOLOGICO DE BACTERIAS

Juan Guillermo Cubillos Hinojosa


Microbiólogo Agroindustrial (c) MSc.

INTRODUCCIÓN

El estudio de la morfología bacteriana es fundamental para su identificación y aplicación en


cualquier campo de la microbiología. La identificación microscópica de los
microorganismos presentes en una muestra nos permite realizar su detección.

Las bacterias generalmente son transparentes lo que dificulta su estudio cuando se ralizan
exámenes en fresco. Por tanto, se requiere conocer su morfología utilizando tinciones. La
tinción de Gram fue elaborada por Hans Christian Gram en 1884, es la técnica más
utilizada en microbiología. Es considerada una tinción diferencial debido a que nos permite
diferencias las bacterias en cuanto a forma y tamaño. La técnica incluye tinción primaria,
decoloración y tinción de contraste.

OBJETIVOS

- Realizar un frotis bacteriano para su posterior tinción.


- Diferenciar bacterias Gram positivas y Gram negativas.
- Adquirir destreza en la técnica de tinción de Gram.
- Contribuir con la estudio morfológico mediante el manejo del microscopio.

MATERIALES

Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona ó Etanol 95%
Fucsina o Safranina
Agua destilada
Solución salina
Asas microbiológicas
Laminas portaobjetos

METODOLOGIA
- Colocar una gota de agua destilada en un portaobjeto limpio.
- Con el asa de siembra previamente flameado transferir una pequeña cantidad de
cultivo bacteriano a la gota de agua.
- Mezclar y extenderla en toda la lamina.
- Esperar que se evapore o utilizar un ventilador o secador para acelerar el proceso.
(No utilice el mechero para secar, puesto que las células pueden deformarse o
romperse).
- Fijar las bacterias al portaobjeto por calor; pasar tres veces el portaobjeto por la
llama durante 2 segundos, dejando enfriar el portaobjeto entre cada pase.
- Aplicar las etapas de tinción de Gram, teniendo en cuenta los tiempos de aplicación
de los reactivos.
- Observe al microscopio.

Etapas Tinción de Gram

Resultados
Paso Reactivo
Gram (+) Gram (-)
Colorante básico Cristal violeta Coloración violeta Coloración violeta
Mordiente Lugol Permanece violeta Permanece violeta
Decolaracion Alcohol acetona ó Permanece violeta Se decolora
etanol 95%
Contraste Fucsina o safranina Permanece violeta Se tiñe de rojo
FUNDAMENTO

Para realizar la tinción de Gram se requiere de cuatro soluciones:

Colorante básico: este colorante penetra la pared celular de las bacterias coloreándolas. El
más utilizado es el cristal violeta.

Mordiente: Fija la tinción y aumenta la afinidad entre el colorante y las células. Los
mordientes empleados suelen ser sales metálicas, ácidos o bases, como la solución de yodo.

Decolorante: Es un disolvente organico, por ejemplo: alcohol-acetona.


Colorante contraste: Es un colorante básico de distinto color al primer colorante.
Ejemplo: safranina.

BIBLIOGRAFIA

- Valencia H. 2004. Manual de prácticas de microbiología básica. Universidad


Nacional de Colombia. pp.21-29.
- Departamento de Microbiología. 1999. Universidad de Navarra. Manual práctico de
microbiología. 2da Edición. Masson. España. pp. 31-38.

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