Instituto Tecnológico De Durango

Ingeniería Bioquímica
Microbiología 6F

Unidad III
Práctica 5
“Tinción de Gram”

Profesor: María Antonia Castillo Marrufo.

Alumnos:
Moreno Ortiz Karen Alexia 19040662
Valdivia Hernandez Edwin Adrian 19040690
Valles Castro Karen Daniela 19040118

Fecha de realización: 05 de Octubre 2022

Fecha de entrega: 03 de Noviembre 2022
Introducción 3

Objetivo 4

Marco teórico 4

Materiales 5

Metodología 5

Resultados 6

Discusión de resultados 6

Conclusión 7

Referencias 7
Introducción
Los microorganismos se tiñen con la finalidad de facilitar la observación de su
morfología. Los colorantes son sales que están formadas por dos grupos, un grupo
auxocromo que forma sales con iones celulares y grupos cromóforos que es el que
confiere el color. Existen dos tipos de colorantes, los básicos en los cuales el color
reside en el ion positivo y los ácidos en los que el color reside en el ion negativo.

Tinciones generales

● Tinción simple
Aquella que emplea un solo colorante; depende el medio ambiente que rodea
al microorganismo y se conocen dos variantes:

○ Tinción directa con colorantes básicos.

Se puede aumentar la reactividad de la célula bacteriana hacia los

colorantes básicos, elevando el pH, lo que ocasiona un aumento en la
carga negativa de la bacteria. Los colorantes básicos por su parte
también tienen diferencias en el grado o proporción con que tiñen las
bacterias y así los menos reactivos requieren más tiempo de contacto
con la célula para teñirla y los más reactivos necesitan menos tiempo.

○ Tinción negativa o indirecta con colorantes ácidos.

En este tipo de tinciones se usan colorantes que no tienen la

capacidad de teñir las células bacterianas, pero si se puede teñir el
resto del campo, en tal forma que al acentuarse el contorno se pone
de manifiesto la forma y el tamaño de la misma, radicando en esto su
utilidad.

● Tinción diferencial

Es la que emplea dos o más colorantes y depende de las diferencias fisicas y

quimicas de los microorganismos; se conocen varias técnicas con diferentes
fines:

○ Tinción de Gram
○ Tinción de bacilos-ácido-alcohol resistentes (BAAR)
○ Tinción de esporas
○ Tinción de cápsulas
○ Tinción de flagelos
Objetivo
● Practicar la tinción de Gram
● Determinar la clasificación de las bacterias en estudio
● Anotar su forma y disposición

Marco teórico
Tinción de Gram

Esta tinción es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios

donde se manejan pruebas microbiológicas. Es definida como una tinción
diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes
grupos. Desarrollada por el científico danes Hans Christian Gram en 1884; hoy en
día, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo
económico, sencillo y eficaz que resulta.

En microbiología clínica resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras clínicas

directas provenientes de sitios estériles se puede saber de manera rápida las
características de la muestra y hacer una diferencia de los potenciales
microorganismos causantes de una infección. Esta técnica tiene una importancia
especial, ya que además de dar información acerca de la morfología de las
bacterias, permite distinguirlas de acuerdo a las diferentes reacciones que están
presentes en el procedimiento de tinción; las cuales atribuyen a la composición
química de las capas superficiales de la bacteria, o de su pared celular.

A partir de aqui se realiza una clasificacion de las bacterias en Gram positivo,

aquellas que resultan capaces de retener el complejo formado por el cristal violeta
(colorante primaria) y el lugol (mordiente) tiñéndose de color violeta; y Gram
negativas, aquellas que se decoloran con el alcohol (agente decolorante) y se tiñen
con safranina (colorante secundario) observandose de color rojo. Los principios de
la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las
bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo.

La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina
de peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias. En el
caso de las Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por
peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; así pues, la
composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las
bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características
tintoriales.
Materiales
● 1 Cultivo de aguas residuales en agar nutritivo
● Un juego de colorantes para tinción de Gram:
○ Cristal violeta
○ Yodo
○ Alcohol-Acetona
○ Safranina
● Agua destilada
● 2 Portaobjetos limpios sin grasa
● Asas bacteriológicas
● Mechero Bunsen
● Microscopio
● Aceite de inmersión

Metodología
1. Se preparó el frotis: en dos portaobjetos limpios y sin grasa se colocó una
gota de agua destilada y posteriormente se colocó una muestra, tomada con
el asa bacteriológica, en la gota de agua para distribuirla en un área de 1cm²
hasta la sequedad total.
2. Se fijó el material biológico pasando 3 veces por la flama del mechero.
3. Con el frotis ya preparado se cubrió el portaobjetos con Cristal violeta por 1
minuto y después se lavó con agua de la llave.
4. Se le aplicó Yodo al portaobjetos por 30 segundos y se lavó con agua de la
llave.
5. Con el portaobjetos inclinado se agregó el diferenciador, en este caso fue
alcohol-acetona, hasta que el colorante se eliminó y luego se lavó con agua
de la llave.
6. Se cubrió el portaobjetos con safranina durante 1 minuto y se lavó hasta
retirar la safranina.
7. Se esperó hasta que el portaobjetos se secó al aire libre.
8. Se procedió a observarlas en el microscopio comenzando con el objetivo 10x
para enfocar las bacterias.
9. Después de enfocarlas se agregó una gota de aceite de inmersión y se
observó en el microscopio con el objetivo 100x.
Resultados

Cultivo 1 Cultivo 2

Reacción de Gram Positiva Positiva

Forma Cocos Cocos

Distribución Estafilococos y Cocos aislados

estreptococos

Vista del microscopio

100x

Microorganismo Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus

Discusión de resultados
Los resultados sobre un estudio de Gram positiva tiñéndose de color morado o
negativa tiñiendose de color rosado es realmente importante para el diagnostico,
segun su forma pueden ser cocos (esfericas), bacilos (cilindros finos) o cocobacilos.
Se pueden organizar en racimo o en cadenas; a veces están dispersas.

En nuestro caso las dos muestras salieron Gram positivas, y debido a su morfología
se denominaron cocos, por su forma circular. Esto corregiría la anterior práctica
donde se afirmó que eran bacillus.

Este microorganismo se observa de color morado ya que en el procedimiento de

tincion en donde se agregaron los diferentes colorantes como el cristal violeta y
fucsina estas quedaron teñidas; esto debido a las características de su pared
celular.

Tomando en cuenta las conclusiones de la práctica antes mencionada podemos

concluir que los resultados obtenidos fueron satisfactorios.
Conclusión
En la realización de esta práctica se pudo identificar y distinguir las diferencias entre
las bacterias. Existen bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas, las
cuales se teñirán de diferente color para observar los distintos factores presentes.
Para poder observar esto es necesario realizar la Tinción de Gram. Las bacterias
Gram positivas se tiñen de color morado o violeta y las bacterias Gram negativas se
tiñen de color rosa.
Una cosa que se debe tomar en cuenta antes de realizar la tinción es que se debe
tomar una muy pequeña cantidad de muestra para realizar correctamente el frotis,
ya que de lo contrario, en el portaobjetos y observando en el microscopio no se ve
claramente las bacterias.

Referencias

● Lansing M. Prescott, John P. Harley, Donald A. Klein. 2004.

"MICROBIOLOGÍA",. 5tª Edición., Ed. Mc Graw Hill.
● PatrickR. Murray, PhD., Ken S. Rosenthal, PhD., George S. Kobayashi, PhD.,
Michael A. Pfaller, MD. 2002. "MICROBIOLOGÍA MÉDICA"., 4tª Edición., Ed.
Mosby.
● Black, J.G. 1999. Microbiology. Principles & Applications (4ª edición) Prentice
Hall, Upper Saddle River, New Jersey.