Apuntes-Ayudas Didã¡cticas

BENEMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE
PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
LICENCIATURA: QFB
AYUDAS DIDACTICAS
Ana Bertha Escobedo López

María de la Cruz Meneses
Sánchez
Inc Pruebas Bioquimicas para La Identificacion de Bacterias de Importancia Clinica Jean
MacFaddin PDF | PDF (scribd.com)
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AGAR MAC CONKEY
Objetivo:
• Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos gram negativos de fácil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas,
agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae
desarrollan en el mismo.
Fundamento:
• Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia.
Esto produce un viraje del color del indicador de pH, la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares. Este medio es de tipo
selectivo y diferencial.
• Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
incoloras.
Formulación:
Reactivo Función
Peptona de carne Fuente de nutrientes
Peptona de gelatina Fuente de nutrientes
Tripteina Fuente de nitrógeno
Lactosa Carbohidrato fermentable
Mezcla de sales biliares Agente selectivo/inhibidor de GRAM positivos
Cloruro de sodio Regulador osmótico
Rojo neutro Indicador de pH
Cristal violeta Agente selectivo/inhibidor de GRAM positivos
Agar Agente solidificante.
Procedimiento:
• Siembra en superficie, inocular directamente la muestra por estría cruzada.
Interpretación de resultados:
• Microorganismos fermentadores de lactosa: Colonias rosadas-rojizas.
Puede observarse halo de precipitación de sales biliares.
• Microorganismos no fermentadores de lactosa: Colonias del color del
medio, incoloras.
Control de calidad:
Microorganismo Crecimiento Color Precipitación biliar
Escherichia coli Satisfactorio Rosado-rojizo (+)
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio Rosado-rojizo (+)
Salmonella typhimurium Satisfactorio Incoloro (-)
Shigella flexneri Satisfactorio Incoloro (-)
Proteus mirabilis Satisfactorio Incoloro (-)
Enterococcus faecalis Inhibido Na Na
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Control de esterilidad Resultado
Medio sin inocular Sin cambios
E. coli Salmonella
Lactosa + Lactosa -
Sin inoculo
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AGAR CHOCOLATE
Objetivo:
• Este medio permite el crecimiento de microrganismos exigentes en sus
requerimientos nutricionales, por ejemplo especies de Streptococcus,
Haemophilus y Neisserias patógenas.
Fundamento:
• Este agar está compuesto por una base de agar rico en nutrientes y sangre
calentada.
• La hemolisis de los glóbulos rojos proporciona al medio hemoglobina, que
aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: El factor
X(hemina) y factor V(NAD), necesarios para el crecimiento de algunos
microorganismos.
• Este medio de cultivo es enriquecido, no selectivo y no diferencial.
Formulación:
Reactivo Función
Peptona de carne Fuente de nitrógeno
Extracto de levadura Fuente de carbono
Extracto de corazón Fuente de nutrientes
Almidón soluble Fuente de carbono
Agar Agente solidificante
Sangre de carnero Fuente de factor X y V
Procedimiento:
• Observar las características de la morfología colonial.
Control de calidad:
Microorganismo Crecimiento
Streptococcus pyogenes Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae Satisfactorio
Haemophilus influenzae Satisfactorio
Neisseria gonorrhoeae Satisfactorio
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Sin inoculo Neisseria
Stomatococcus mucilaginosus Eikenella corrodens
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AGAR SAL Y MANITOL
Objetivo:
• Es un medio que se utiliza para el aislamiento y diferenciación de
Staphylococcus a partir de diversas muestras.
Fundamento:
• Se trata de un medio altamente selectivo por la alta concentración de salina
y diferencial debido a la capacidad de fermentación del manitol por los
microorganismos.
• Las bacterias que crecen en un medio con altas concentraciones de sal y
fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del
medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
• Los Staphylococcus coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan
como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
• Los Staphylococcus que no fermentan el manitol, se visualizan como
colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o purpura.
• Este medio de cultivo es recomendable para el aislamiento de
Staphylococcus patógeno a partir de muestras clínicas, alimentos,
productos farmacéuticos, cosméticos entre otros.
Formulación:
Reactivo Función
Extracto de carne Fuente de nutrientes
Peptona de carne Fuente de nitrógeno
Manitol Carbohidrato fermentable
Cloruro de sodio Agente inhibidor/alta concentración
Rojo de fenol Indicador de pH
Procedimiento:
• Microorganismos fermentadores de manitol: colonias color amarillo
rodeadas o no de un halo amarillo.
• Microorganismos no fermentadores de manitol: colonias del color del
medio, rojas rodeadas o no de un halo rojizo-purpura.
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Control de calidad:
Microrganismo Crecimiento Color de las colonias
Staphylococcus aureus Satisfactorio Colonias amarillas rodeadas de un halo amarillo
Staphylococcus epidermidis Satisfactorio Colonias amarillas rodeadas de un halo amarillo
Escherichia coli Satisfactorio Colonias rojas sin cambio de color del medio
Klebsiella pneumoniae Inhibido NA
Manitol negativo Manitol positivo

Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus
Sin inoculo
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AGAR CETRIMIDA
Objetivo:
• Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y
de otras especies del género.
Fundamento:
• Se basa en la capacidad que tiene el medio para favorecer el crecimiento
de Pseudomonas aeruginosa, estimula la producción de su pigmento y a su
vez inhibir el crecimiento de otros microorganismos.
• La cetrimida (Bromuro de cetil trimetil amonio) es la sustancia que inhibe el
crecimiento de otras bacterias diferentes a P. aeruginosa, incluyendo otras
especies pertenecientes al mismo género, ya que actúa como detergente
catiónico, logrando desestabilizar la membrana plasmática de la mayoría de
las bacterias, a excepción de las antes mencionadas.
• Por otra parte el cloruro de magnesio y sulfato de potasio, estimulan la
expresión fenotípica relacionada con la capacidad de producir sus diversos
pigmentos: Piocianina, pioverdina, piomelanina, piorrubina y fluoresceína.
Formulación:
Reactivo Función
Peptona de gelatina Fuente de nitrógeno
Sulfato de potasio Estimulante de pigmento
Cetrimida Inhibidor microbiano
Glicerina Fuente de carbono
Cloruro de magnesio Estimulante de pigmento
Procedimiento:
• Observar el crecimiento microbiano, las características de las colonias y la
producción de pigmento.
o La presencia de un color verde-azulado corresponde a producción
de piocianina.
o Un color verde corresponde a la producción de pioverdina
o Un color rosa claro, rojizo o marrón oscuro corresponde a la
producción de piorrubina.
• Examinar las placas bajo luz ultravioleta, ya que la producción de
fluoresceína se observa de color amarillo verdoso brillante que difunde en el
agar a partir del crecimiento microbiano.
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Control de calidad:
Microorganismo Crecimiento Color de la colonia
Pseudomonas aeruginosa Satisfactorio Amarillo verdoso-azulado
Escherichia coli Inhibido NA
Staphylococcus aureus Inhibido NA
Medio sin inocular Sin cambio
Sin inocular Pseudomonas aeruginosa
Luz ultravioleta
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AGAR SANGRE
Objetivo:
• Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos

microorganismos, al suplementarlo con sangre, permite el crecimiento de
microorganismo nutricionalmente exigentes y la clara visualización de
reacciones de hemólisis.
Fundamento:
• Es un medio enriquecido, diferencial y no selectivo, permite distinguir 3

tipos de bacterias:
o Beta-hemolíticos: Son aquellos que tienen capacidad de lisar o
romper completamente los glóbulos rojos, formando un halo claro
alrededor de las colonias.
▪ Ejemplos: Streptococcus pyogenes y Streptococcus
agalactiae.
o Alfa-hemolíticos: Son los que realizan una hemolisis parcial, donde
la hemoglobina es oxidada a metahemoglobina, generándose una
coloración verdosa alrededor de las colonias.
▪ Ejemplos: Strptococcus pneumoniae y Streptococcus del
grupo viridans.
o Gama-hemolíticos: O no hemolíticos, estos crecen sobre el agar sin
generar cambios sobre el mismo.
▪ Ejemplos: Streptococcus del grupo D (Streptococcus bovis y
Enterococcus faecalis).
Formulación:
Reactivo Función
Infusión de musculo de corazón Fuente de nutrientes
Peptona Fuente de nitrógeno
Sangre de carnero Fuente de nutrientes/eritrocitos
Procedimiento:
• Siembra en superficie, inocular directamente la muestra por estría cruzada,

picando el medio para potenciar la hemolisis.
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• Recomendaciones:
o Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 35-37°C hasta 48
horas.
o Bacterias exigentes en sus requisitos nutricionales: En atmosfera con
5% de CO2, a 35-37°C durante 24-48 horas.
• Observar las características de las colonias, y las reacciones de hemolisis:

o Hemolisis Alfa: Lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un
halo color verdoso alrededor de las colonias de estudio. Es debido a
la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de
color verdoso) por el peróxido de hidrogeno generado por los
microorganismos.
o Hemolisis gamma: ausencia de lisis de glóbulos rojos. El medio de
cultivo no presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la
colonia en estudio.
o Hemolisis beta: Lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo
claro, brillante alrededor de la colonia en estudio.
Control de calidad:
Microorganismo Crecimiento Hemolisis

Streptococcus pyogenes Satisfactorio Beta
Streptococcus pneumoniae Satisfactorio Alfa
Beta-Hemolisis
Sin inoculo
Staphylococcus aureus
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Alfa-Hemolisis Gama-Hemolisis
Streptococcus pneumoniae Staphylococcus epidermidis
Gama-Hemolitico Beta-Hemolitico
Streptococcus agalactiae Streptococcus constellatus
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AGAR SALMONELLA SHIGELLA
Objetivo:
• Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de
Salmonella spp. y algunas especies de Shigella spp. a partir de heces,
alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Fundamento:
• Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de
desarrollar, acidifican el medio haciendo virar a rojo el indicador de pH,
obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo, Salmonella,
Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen
adecuadamente en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
• La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
• Para aumentar la selectividad del medio, se recomienda incubar
previamente la muestra en caldo selenito.
Formulación:
REACTIVO FUNCIÓN
Pluripeptona Fuente de nitrógeno
Mezcla de sales biliares Inhibidor microbiano
Citrato de sodio Fuente de carbono
Citrato férrico Sustrato para la producción de ácido H2 S
Tiosulfato de sodio Sustrato para la producción de ácido H2 S
Verde brillante Inhibidor microbiano
Rojo neutro Indicador de pH
Procedimiento:
• Sembrar estriando directamente la superficie del medio de cultivo.
• Microorganismo fermentador de lactosa: colonias rosadas o rojizas.
• Microorganismo no fermentador de lactosa: colonias del color del medio,
incoloras.
• Microorganismo productor de SH2: colonias con centro negro.
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Control de calidad:
MICROORGANISMO CRECIMIENTO COLONIA SH2
Salmonella enteritidis Satisfactorio Incolora (+)
Salmonella typhimurium Satisfactorio Incolora (+)
Shigella flexneri Satisfactorio Incolora (-)
Shigella sonnei Satisfactorio Incolora (-)
Proteus mirabilis Satisfactorio Incolora (+)
Escherichia coli Inhibición parcial o total Rojo-rosada (-)
Enterococcus faecalis Inhibición parcial o total Incolora (-)
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO
Sin inoculo Salmonella typhimurium
Shigella sonnei Salmonella enteritidis
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AGAR E.M.B
Objetivo:
• Este medio se utiliza para el aislamiento selectivo de bacilos GRAM
negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite
el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento:
• El medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de
Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de
enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos.
• Muchas especies de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un
característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen
centro obscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo
hacen son incoloras.
• También, pueden crecer especies de Cándida y se observa como colonias
rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de
clamisosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crecen en este medio
como colonias puntiformes y transparentes, mientas que Acinetobacter
spp. y otras bacterias oxidativas se observan como colonias color azul
lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de
acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de
azul de metileno a sus membranas.
• En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de
Salmonella y Shigella.
Formulación:
Reactivo Función
Sacarosa Carbohidrato fermentable
Fosfato dipotásico Buffer
Eosina Inhibidor m.o
Azul de metileno Inhibidor m.o
Procedimiento:
• En superficie, por estriado directo a partir de la muestra.
• Microorganismos fermentadores de lactosa y/o sacarosa: Colonias de
color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro obscuro y brillo
metálico.
• Microorganismo no fermentador de lactosa y sacarosa: Colonias de
color del medio, incoloras.
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Control de calidad:
Microorganismo Crecimiento Colonias
Escherichia coli Satisfactorio Negro azulado con brillo metálico
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio Mucosas confluentes, centro obscuro
Proteus mirabilis Satisfactorio Incoloras
Salmonella typhimuruim Satisfactorio Incoloras
Shigella flexneri Satisfactorio Incoloras
Pseudomonas aeruginosa Satisfactorio Incoloras
Enterococcus faecalis Escaso Incoloras puntiforme
Candida albicans Escaso Rosada puntiforme
Staphylococcus aureus Inhibido Na
Control de calidad Resultado
Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa
Sin inoculo Candida albicans
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VERDE BRILLANTE
Objetivo:
• Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de
Salmonella spp. excepto Salmonella typhi y Salmonella paratyphi a partir
de muestras clínicas, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento:
• La selectividad sobresaliente de este medio nos da un valor excepcional
cuando se investiga un gran número de muestras de heces o alimentos, por
su alta capacidad de diferenciación de las colonias sospechosas ya que el
verde brillante es una sustancia inhibidora que impide el crecimiento de las
bacterias GRAM positivas y de un gran número de microorganismos GRAM
negativos.
• La sacarosa y la lactosa permite diferenciar la flora acompañante, los
cuales hacen virar el medio al amarillo cuando hay producción de ácidos a
partir de la fermentación de estos que es revelado por el indicador de pH.
Formulación:
REACTIVO FUNCIÓN
Pluripeptona Fuente de nitrógeno
Extracto de levadura Fuente de nutrientes
Verde brillante Inhibidor microbiano
Procedimiento:
• Siembra en superficie por estriado un inoculo denso de la muestra directa o
de una dilución.
• Bacterias que fermentan la lactosa y/o sacarosa: Colonias amarillo-
verdosas, rodeadas por un halo de color amarillo verdoso del medio de
cultivo.
• Bacterias que no fermentan la lactosa y/o sacarosa: Colonias de color
blanco rosadas o transparentes rodeadas por un halo rojizo del medio de
cultivo.
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Control de calidad:
Microorganismo Crecimiento Colonias
Salmonella enteritidis Satisfactorio Blanco rosadas o trasparentes sobre fondo rojo
Salmonella typhimurium Satisfactorio Blanco rosadas o trasparentes sobre fondo rojo
Proteus mirabilis Escaso Blanco rosadas o trasparentes sobre fondo rojo
Klebsiella pneumoniae Escaso Amarillo-verdosas sobre un fondo amarillo
Escherichia coli Escaso Amarillo-verdosas sobre un fondo amarillo
Shigella flexneri Inhibido NA
Staphylococcus aureus Inhibido NA
Sin inoculo Salmonella typhimurium
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T.C.B.S.
Objetivo:
• Medio selectivo para el aislamiento i cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio
parahemolyticus y otras especies de esta a partir de heces, agua y
alimentos. También es conocido con el nombre Agar Tiosulfato Citrato Bilis
Sacarosa, o agar selectivo para Vibrios.
Fundamento:
• La bilis de buey, el citrato de sodio, altas concentraciones de sal y el pH
alcalino inhiben el desarrollo de la flora acompañante, favoreciendo el
crecimiento de Vibrio spp.
• Contiene sacarosa y azul de bromotimol y azul de timol que en un
ambiente alcalino le otorga al medio de cultivo un color verde-azulado y
viran al color amarillo en medio acido (por utilización de la sacarosa),
también contiene tiosulfato de sodio que junto con el citrato férrico permiten
la detección de la producción de ácido sulfhídrico por la formación de
compuestos color negro.
Formulación:
Reactivo Función
Peptona de carne Fuente de nutrientes
Tripteina Fuente de nutrientes
Citrato de sodio Inhibidor m.o
Bilis de buey Inhibidor m.o
Cloruro de sodio Balance osmótico/inhibidor m.o
Citrato férrico Sustrato para la producción de ácido H2 S
Azul de bromotimol Indicador de pH
Azul de timol Indicador de pH
Procedimiento:
• Estriar la superficie del medio de cultivo, según el tipo de muestra a
procesar puede realizarse la inoculación directa en T.C.B.S o puede ser
necesario el enriquecimiento previo en Agua Peptonada Alcalina.
• Se recomienda que las muestras de materia fecal, aguas, y alimentos en
los que se quieran recuperar especies de Vibrio, sean previamente
enriquecidas en Agua Peptonada Alcalina durante 5 a 8 horas a 35-37 °C y
luego subcultivadas en T.C.B.S.
• En caso de muestras clínicas provenientes de infecciones extraintestinales
generalmente no es necesario realizar el preenriquecimiento previo.
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• Microorganismos fermentadores de sacarosa: Colonias amarillas.
• Microorganismos no fermentadores de sacarosa: Colonias del color del
medio, con centro verde.
Control de calidad:
Microorganismo: Crecimiento Colonias
Vibrio cholerae Satisfactorio Amarillas de 2-3 mm de diámetro, borde traslucido.
Vibrio parahaemolyticus Satisfactorio Centro verde, borde traslucido.
Aeromonas hydrophila Inhibido NA
Escherichia coli Inhibido NA
Proteus mirabilis Escaso Centro verde y bordes traslucidos
Sin inoculo Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
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AGAR XLD
Propósito:
• Agar de xilosa, lisina, desoxicolato) es un medio moderadamente selectivo
y de diferenciación para el aislamiento y la diferenciación de patógenos
entéricos GRAM negativos (Salmonella y Shigella) a partir de muestras
clínicas. Es adecuado en especial para el aislamiento de la especie
Shigella.
Fundamento:
• Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente,
inhibe los microorganismos gram positivos, la xilosa se incorpora en el
medio dado que la fermentan prácticamente todos los entéricos, excepto
Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciación de dicha especie.
• La lisina se incluye para permitir la diferenciación del grupo Salmonella de
los organismos no patógenos, dado que, sin lisina, Salmonella fermentaría
rápidamente la xilosa y no se distinguiría de las especies no patógenas,
cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por
la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino
que imita la reacción de Shigella, para evitar el cambio similar en los
organismos coliformes positivos a la lisina, se añaden lactosa y sacarosa
para producir ácido en exceso.
• Para aumentar la capacidad de diferenciación, se incluye un sistema
indicador de H2S, formado por tiosulfato sódico y citrato férrico amónico,
para la visualización del ácido sulfhídrico producido, lo que origina la
formación de colonias con centros de color negro.
• Los organismos no patógenos no productores de H2S no descarboxilan la
lisina; por tanto, la reacción ácida producida por dichos organismos evita el
oscurecimiento de las colonias, lo que sucede sólo con pH alcalino o
neutro.
Formulación:
Reactivo Función
Xilosa Carbohidrato fermentable
L-lisina Sustrato para la enzima de descarboxilada
Cloruro sódico Regulador osmótico
Extracto de levadura Fuente de carbono
Desoxicolato de sodio Inhibidor m.o
Tiosulfato sódico Sustrato para la producción de ácido H2 S
Citrato férrico de amonio Sustrato para la producción de ácido H2 S
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Procedimiento:
de una dilución.
• La degradación de xilosa, lactosa y sacarosa genera productos ácidos,
causando cambio de color en las colonias y en el medio de un color rojo a
color amarillo.
• La producción de Sulfuro de Hidrógeno bajo condiciones alcalinas dan
como resultado las colonias con centros negros. Esta reacción es inhibida
por las condiciones ácidas que acompañan a la fermentación de los
carbohidratos.
• La descarboxilación de lisina, en la ausencia de fermentación de lactosa y
sacarosa, dan como resultado en una reversión a una condición alcalina.
Esta condición alcalina causa que el color del medio cambie nuevamente a
rojo.
Control de calidad:
Microorganismo Crecimiento colonias
Salmonella typhimurium Satisfactorio Colonias rojas con centro de color negro
Salmonella abony Satisfactorio Colonias rojas con centro de color negro
Shigella flexneri Satisfactorio Colonias rojas
Shigella sonnei Satisfactorio Colonias rojas
Enterococcus fecalis Inhibido NA
Escherichia coli Escaso Colonias de amarillo a rojo amarillento
Proteus mirabilis Escaso Colonias rojo carmesí con centros negros
Sin inocular Sin cambio
Sin inoculo Shigella flexneri
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Salmonella spp. Escherichia coli
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AGAR SULFITO DE BISMUTO
Propósito:
• Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Salmonella typhi y
otros bacilos enteritos.
Fundamento:
• El Verde brillante y el bismuto-sulfito inhiben considerablemente los
gérmenes de acompañamiento.
• El sulfato de hierro (III) es un indicador del sulfuro de hidrógeno que
producen las colonias de Salmonella H2S-positivas. Habitualmente, esta
reacción produce una precipitación marrón o negra en el medio de cultivo
así como colonias de color negro o verde con brillo metálico.
Formulación:
Reactivo Función
Digerido pancreático de caseína Peptona
Indicador bismuto sulfitico Inhibidor m.o.
Dextrosa Fuente de carbono
Fosfato disodico Regulador osmótico
Sulfato ferroso Sustrato para la producción de ácido H2 S
Verde brillante Inhibidor m.o.
Procedimiento:
de una dilución.
• Caracteristicas de las colonias:
1. S. Typhi: las colonias de s. Typhi son negras rodeadas por
una zona negra o pardusca, con brillo metálico. En las zonas
donde haya mucho crecimiento pueden aparecer como colonias
verde claras.
2. Otras salmonellas: producen colonias negras con o sin
oscurecimiento del medio alrededor. Shigella spp, así como shigella
flexneri y shigella sonnei no crecen.
3. E. Coli está parcialmente inhibido ocasionalmente crece como
colonias marrones o con brillo verdoso. Las colonias de coliformes
que producen que producen h2s, forman colonias de similar
apariencia a salmonella typhi. Estas bacterias se pueden diferenciar
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fácilmente porque producen gas en medios con lactosa, por ejemplo
TSI agar o Kligler iron agar.
Control de calidad:
Microorganismo Desarrollo Colonia
Escherichia coli Inhibición parcial Marrón-verde
Salmonella enteriditis Bueno Negro con brillo metálico
Salmonella typhi Bueno Negro con brillo metalico
Shigella flexneri Inhibición parcial Marrón
Enterococcus faecalis Nulo -
Placa sin inocular Sin cambio
Salmonella typhi
Shigella flexneri Sin inoculo
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CITRATO DE SIMMONS
Propósito:
• Diferenciar enterobacterias en base a la capacidad de usar citrato como

única fuente de carbono y energía.
Fundamento:
• El medio de cultivo es diferencial con base en que los microorganismos

capaces de utilizar el citrato como única fuente de carbono usan sales de
amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de
alcalinidad.
• El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de
citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxilico. El
desdoblamiento del citrato genera progresivamente, oxalacetato y piruvato.
Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos
orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono, producen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto
es indicativo de la producción de citrato permeasa.
Formulación:
Reactivo Función
Citrato de sodio Fuente de carbono
Cloruro de sodio Balance osmótico
Fosfato monoamónico Fuente de nitrógeno
Sulfato de magnesio Mg cofactor enzimático
Procedimiento:
• Estriar en la superficie del medio de cultivo.
• Positivo: Crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de

flauta.
• Negativo: Ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del
medio de cultivo.
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CITRATO CITRATO CITRATO
CITRATO
NEGATIVO POSITIVO POSITIVO
TRIPLE SUGAR IRON

Propósito:
• Diferenciar enterobacterias, con base en la fermentación de los hidratos de

carbono glucosa, lactosa y sacarosa, la producción de ácido sulfhídrico y
gas.
Fundamento:
• Por fermentación de azúcares, se produce ácidos, que se detectan por

medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio
ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno que reacciona
luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de
color negro. El gas es el resultado de la fermentación de los azúcares.
Formulación:
Reactivo Función
Pluripeptona Fuente de nutrientes
Lactosa Hidrato de carbono fermentable
Sacarosa Hidrato de carbono fermentable
Glucosa Hidrato de carbono fermentable
Sulfato de hierro y amonio Fuente de iones Fe3+
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Procedimiento:
• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con asa recta

inocular el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la
superficie del mismo (cola de ratón).
Interpretación de los resultados:
Observando el color del medio de cultivo y la producción de gas.
1. Superficie alcalina/profundidad acida (pico rojo/fondo amarillo): El

microorganismos solamente fermenta la glucosa.
2. Superficie ácida/profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): El
microorganismos fermenta glucosa, lactosa, y/o sacarosa.
3. Superficie alcalina/profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): El
microorganismos es no fermentador de azúcares.
4. La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que
el microorganismo produce gas.
5. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce
ácido sulfhídrico.
K/K A/A A/A K/A K/A

TSI
H2S(-)GAS(-) H2S(-)GAS(-) H2S(+)GAS(+) H2S(-)GAS(-) H2S(+)GAS(+)
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UREA
Propósito:
• Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad

ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como
Proteus spp. Otras enterobacterias y estafilococos.
Fundamento:
• Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberan

amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio de
cultivo haciendo virar el indicador rojo de fenol del color amarillo a un rosa
mexicano.
• Es recomendado especialmente para la detección de la actividad ureásica
en bacterias que hidrolizan lentamente la urea ya que la fermentación de la
glucosa presente activa la enzima ureasa microbiana. Este es el caso de
Klebsiella spp., Enterobacter spp y Citrobacter spp.
Formulación:
Reactivo Función
Tipteina Fuente de nitrógeno
Glucosa Fuente de carbono
Fosfato monopotásico Buffer
Urea Fuente de nitrógeno
Procedimiento:
• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, estriar la

superficie del medio en el pico de flauta. Se recomienda no punzar la capa
profunda para controlar el color.
1. Microorganismo que hidrolizan la urea: El medio de cultivo es de color

rosado-rojizo.
2. Microorganismo que no hidrolizan la urea: El medio de cultivo
permanece el color amarillo.
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UREA/UREASA
UREA/UREASA UREA/UREASA
UREA POSITIVA
NEGATIVA POSITIVA (TARDÍA)
MOVILIDAD INDOL ORNITINA

Propósito:
• Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia

Enterobacteriaceae en base a la movilidad, producción de indol y actividad
enzimática ornitina decarboxilasa.
Fundamento:
• La tripteína aporta gran cantidad de triptófano, sustrato de la enzima

triptófanos a partir del cual se forma indol que puede ser revelado con el
reactivo de Enrlich o de Kovac’s por la formación de un compuesto de color
rojo. Así se determina la capacidad de un microorganismo de degradar el
triptófano para formar el indol.
• Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de
cultivo y producen viraje del color púrpura al amarillo. Las condiciones de
acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina descarboxilasa,
que actúa sobre la ornitina generando putrescina, con la consecuente
alcalinización del medio de cultivo y viraje al color púrpura.
• El agar en baja concentración le otorga al medio la propiedad de ser
semisólido, condición necesaria para la detección de la movilidad, que se
evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde
más allá de la línea de inoculación del microorganismo en estudio.
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Formulación:
Reactivo Función
Glucosa Carbohidrato fermentable
Tripteína Fuente de triptófano
Clorhidrato del L-ornitina Fuente de ornitina
Púrpura de bromocresol Indicador de pH
Procedimiento:
• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar por

punción profunda utilizando un asa recta para inocular.
Observar la movilidad y el color del medio de cultivo. Luego realizar la prueba de

indol.
Movilidad:
o Resultado positivo: Presencia de turbidez o crecimiento más allá

de la línea de siembra.
o Resultado negativo: Crecimiento solamente en la línea de siembra.
Ornitina descarboxilasa:
o Resultado positivo: Color púrpura

o Resultado negativo: Color amarillo. A veces se puede desarrollar
un color violáceo en la superficie del medio.
Prueba del indol:
Agregar al medio de cultivo 2 gotas de reactivo Enrlich o de Kovac’s.
o Resultado positivo: Anillo de color rojo.

o Resultado negativo: El color del reactivo revelador permanece
incoloro-amarillento.
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MIO M(+) I(-) O(+) M(+) I(+) O(+) M(-) I(+) O(+)
M(-) I(+) O(-) M(-) I(-) O(-) M(+) I(-) O(-) M(+) I(+) O(-)
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MEDIO BASAL OF
Propósito:
• Se utiliza para la determinación del metabolismo oxidativo y fermentativo de

carbohidratos de los bacilos GRAM negativos sobre la base de la reacción
ácida en el sistema abierto o el cerrado.
Fundamento:
• En la vía oxidativa, el aceptor final de electrones debe ser el oxígeno y por

consiguiente el proceso es aeróbico y produce poca acidez; mientras que
en la vía fermentativa, el aceptor final de electrones es un compuesto
orgánico y el proceso es anaerobio, originando mucha acidez.
• La acidez se detecta por la presencia de un indicador de pH (azul de
bromotimol), que hace virar el medio de verde a amarillo. Los
microorganismos oxidativos producen ácido en la zona de contacto con el
aire, pero no lo hacen en profundidad. Los microorganismos fermentativos
producen mucho ácido en todo el tubo.
Formulación:
Reactivo Función
Digerido pancreático de caseína Peptonas
Dextrosa Carbohidrato
Procedimiento:
• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar por

punción profunda utilizando un asa recta para inocular. Se utilizan 2 por
cada bacteria y uno de ellos se cubre con vaselina o aceite de parafina
estéril.
• Si la vía es oxidativa, solamente el tubo sin cubrir con parafina (tubo

abierto) vira ligeramente en la parte superior a amarillo (A), más tarde se
extenderá por todo el tubo, y nunca con producción de gas.
• Si la vía es fermentativa hay un viraje intenso a amarillo que comienza en la
parte inferior de los dos tubos con o sin producción de gas. Se acidifica todo
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el medio. Solo en la vía fermentativa puede producirse gas, viéndose el
medio con grietas, burbujas o despegado del fondo.
• Un resultado negativo se muestra como color verde o color azul inerte.
Reacción Tubo de reacción Tubo abierto Tubo cubierto
Oxidación (O) Amarillo Verde
Abierto
Fermentación Amarillo Amarillo
Cubierto
Inerte Azul o verde Verde
Ninguno
Facultativo Amarillo Amarillo
Ambos
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LISINA HIERRO AGAR
Propósito:
• Utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp.,

basado en la descarboxilasa y desaminación de la lisina y en la producción
de ácido sulfhídrico.
Fundamento:
• Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y

provocan el viraje del color púrpura al amarillo. El ambiente ácido favorece
la actividad enzimática descarboxilasa y se metaboliza la lisina a
cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tornándolo al color
púrpura o violeta.
• Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad de
lisina descarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo
al color amarillo. A las 24 horas de incubación se observa el fondo del tubo
color amarillo y la superficie de color violeta debido al consumo de las
peptonas que producen alcalinidad.
• La generación de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento
del medio debido a la formación de sulfuro de hidrógeno provocado por la
unión a citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio.
• Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas de Morganella,
desaminan la lisina. Estos producen un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual
con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forman un color rojizo en
la superficie del medio.
Formulación:
Reactivo Función
Peptona de gelatina Fuente de nitrógeno
Glucosa Carbohidrato fermentable
Sustrato para la enzima de
Lisina
descarboxilada/desaminasa.
Citrato de hierro y
amonio Sustrato para la producción de ácido H2 S
Púrpura de bromocresol Indicador de pH
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Procedimiento:
• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio y mediante el uso

de un asa de inoculación, inocular el medio de cultivo, picando el fondo (2
veces) y extendiendo sobre la superficie del mimo.
Descarboxilación de la lisina:
o Resultado positivo: Superficie alcalina/profundidad alcalina (pico

violeta/fondo violeta).
o Resultado negativo: Superficie alcalina/profundidad ácida (pico
violeta/fondo amarillo).
Desaminación de la lisina:
o Resultado positivo: Superficie rojiza/profundidad ácida. Esto

sucede con cepas del género Proteus, Providencia y algunas de
Morganella spp.
Producción de H2S:
o Resultado positivo: Ennegrecimiento del medio de cultivo

(especialmente en el límite entre la superficie y profundidad).
o Resultado negativo: El medio de cultivo permanece sin cambio de
color.
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PRUEBA DE OXIDASA
Objetivo:
• Prueba utilizada para determinar si un microorganismo produce la enzima
citocromooxidasa. La prueba se utiliza en la caracterización inicial de
bacterias GRAM negativas.
Fundamento:
• En presencia de oxígeno atmosférico la enzima intracelular
citocromooxidasa oxida el reactivo fenilendiamina y forma un compuesto
color púrpura(indofenol).
Reactivos y materiales:
• Se requiere colonias bacterianas crecidas en un medio de cultivo sólido.
• Tira reactiva para determinar oxidasa.
Procedimiento:
• Depositar una colonia en la zona reactiva de la tira y frotar el asa.
Control de calidad:
• Prueba positiva: Pseudomonas aeruginosa.
• Prueba negativa: Escherichia coli.
Anotaciones y limitaciones del procedimiento:

• Es preferible utilizar un cultivo fresco (18-24
horas), aunque algunas bacterias requieren de
subcultivos para producir una reacción positiva.
• Utilizar cultivos que no provengan de medios
con azúcares y con pH ácido o con colorantes.
Obtención y expresión de resultados:

• Positivo: se colorea de color azul a violeta
azulado (no leer después de 60’’). Puede
producirse una reacción positiva lenta a los 30-
60” y es característica de Pasteurella spp.
• Negativo: Color rosado o sin cambio de color.
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PRUEBA DE CATALASA
Objetivo:
• Se utiliza en la caracterización inicial de la mayoría de las bacterias. La
enzima catalasa está presente en la mayoría de las bacterias aeróbicas y
anaerobias facultativas que contiene citocromo. Son excepciones
Streptococcus spp. Y Enterococcus spp.
Fundamento:
• Las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el peroxido de hidrógeno
en agua y oxígeno gaseoso, y como resultado se liberan burbujas de gas.
• Se requiere colonias bacterianas crecidas en un medio de cultivo sólido.
• Solución de peróxido de hidrógeno
Procedimiento:
• Depositar una colonia en un porta, preferiblemente de un medio sin sangre
(si el medio es agar sangre no debe tocar el agar).
• Añadir una gota del reactivo
• Lectura en 10-20 segundos.
• Las colonias procedentes de cultivos de agar sangre pueden dar falsos
positivos. Tampoco se recomienda realizar esta prueba a partir de colonias
crecidas en agar Mueller-Hilton.
• Realizar la prueba con cultivos de 24 horas. La enzima está presente en
sólo en cultivos viables. Los cultivos viejos pueden dar resultados falsos
negativos. No invertir el orden de adición del reactivo sobre la colonia pues
se pueden producir falsos negativos.
• No mezclar reactivo y colonia.
• Algunas cepas de Aerococcus spp. y Enterococcus spp. pueden producir
una reacción catalasa lenta o pseudocatalasa. Algunas cepas de
Staphylococcus aureus pueden dar la prueba de catalasa negativa por este
método.
Control de calidad:
• Prueba positiva: Staphylococcus aureus.
• Prueba negativa: Streptococcus pyogenes.
• Negativo: Sin formación de burbujas.
• Positivo: Formación de burbujas.
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PRUEBA DE COAGULASA
Objetivo:
• Se utiliza para la diferenciación de especies del género Staphylococcus
debido a la capacidad de coagular el plasma por la acción de la enzima
Coagulasa.
Fundamento:
• La coagulasa es una enzima que convierte el fibrinogeno en fibrina. Existe
en dos formas: Clumping factor o coagulasa unida a la pared celular y
coagulasa libre o enzima extra celular que solo se produce cuando la
bacteria se cultiva en caldo. La primera se detecta mediante la prueba de la
coagulasa en porta y ambas mediante la prueba de la coagulasa en tubo.
• Colonias de cocos grampositivos en racimos catalasa positivos crecidas en
medio de cultivo sólido.
• Prueba de coagulasa en porta: Plasma-coagulasa en porta con EDTA.
• Prueba de coagulasa en tubo: Plasma-coagulasa en tubo con EDTA.
Procedimiento:
• Prueba en porta: Colocar una gota de agua destilada cobre un porta.
Emulsionar suavemente la colonia en estudio en la gota de agua hasta
obtener una suspensión cargada homogénea. Agregar una gota de plasma
a la gota de suspensión bacteriana. Mezclar bien con el asa e inclinar el
portaobjetos hacia uno y otro lado, observando la formación inmediata de
un precipitado.
• Prueba en tubo: Colocar asépticamente 0.5 ml de plasma en el fondo de
un tubo estéril. Añadir 0.5 ml de cultivo de 24 horas (o suspensión en agua
destilada de un cultivo en placa.) Mezclar por rotación el tubo, evitando
agitar el contenido. Incubar a 35+/-2ºC y observar cada hora hasta 4 horasy
luego a las 24 horas, la formación de un coágulo visible.
Control de calidad:
• Control positivo: Staphylococcus aureus.
• Control negativo: Staphylococcus epidermidis
Anotaciones y limitaciones:
• Es necesario realizar la prueba en cultivos puros
• Puede ocurrir autoaglutinacion con la prueba en porta.
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• Es necesario utilizar agua destilada y no solución salina ya que algunas
cepas de Staphylococcus son sensibles a la sal. No se deben hacer la
prueba con colonias crecidas en agar-Chapman.
• No utilizar plasma citratado ya que puede aglutinar cualquier bacteria que
utilice citrato.
• La incubación prolongada de 35+/-2ºC puede dar falsos negativos debido a
la producción de estafiloquinasa.
• La cepa de Staphylococcus aureus resiste a la meticilina (SARM) pueden
ser deficientes en “Clumping factor” y pueden dar falso negativos.
Obtención y expresión de los resultados:

• Coagulasa en porta:
o Positivo: Aglutinación visible en 10”.
o Negativo: No aglutinación visible en 10”.
• Coagulación en tubo:
o Positivo: Cualquier formación de coágulo. Observar los tubos en
incubación a 35+/-2ºC cada hora durante 4 horas (si no es posible
incubar 24 horas a 22-25ºC).
o Negativo: No formación de coágulo. Si es negativo a las 4 horas
reincubar a 22-25ºC hasta 24 horas.
Nota: No dejar a 35ºC más de 4 horas ya que la fibrinolisis de S. aureus puede
lisar el cuagulo.
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PRUEBA DE LA ADNASA
Objetivo:
• Se utiliza para diferenciar microorganismos en base a la actividad de
desoxirribonucleasa (ADNasa). Esta prueba se utiliza principalmente en la
diferenciación de Staphylococcus que producen gran cantidades de
ADNasa extracelular. La mayoría de las cepas de Staphylococcus aureus
dan reacciones positivas con esta prueba, pero hay algunas cepas de
SARM que dan la prueba negativa. Subespecies de S. scheiferi son
ADNasa positiva y también algunas cepas de S. intermedius. Otras
bacterias como Serratia spp. también producen desoxirribonucleasa.
Fundamento:
• La ADNasa es una enzima que hidroliza el ácido desoxirribonucleico (ADN)
y libera oligonucleótidos y fosfato. Hay muchos medios de cultivo con y sin
indicadores para detectar esta encima.
• En el medio de cultivo, la tripteína es la fuente de nitrógeno, aminoácidos y
aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.
• El ácido desoxirribonucleico, se encuentra en grado altamente
polimerizado, y es el sustrato de la enzima desoxirribonucleasa, la cual lo
hidroliza. La presencia de la enzima, se puede detectar mediante el
agregado de ácido clorhídrico a una concentración 1N.
• El ácido desoxirribonucleico hidrolizado presenta una transparencia,
mientras que el ácido desoxirribonucleico polimerizado, precipita y produce
una opacidad en el medio de cultivo.
• Colonias bacterianas crecidas en medio de cultivo sólido.
• Placa de medio de agar ADNasa
• Ácido clorhídrico 1N (3.6%)
Procedimiento:
• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, inocular una zona
del medio de cultivo en la placa. Se pueden inocular hasta cuatro botones
por placa.
• Incubar en aerobiosis, durante 24-48 horas.
o A 35+/-2ºC para Staphylococcus spp. y Moraxella spp.
o A 25+/-2ºC para Enterobacteriaceae y Vibrionaceae.
o A 25+/-2ºC para bacilos gram negativos no fermentadores.
• Inundar la placa con ácido clorhídrico 1N. Dejar que el ácido penetre en
toda la superficie del medio durante 2 minutos y leer el resultado.
Control de calidad:
• Positivo: Staphylococcus aureus.
• Negativo: Escherichia coli.
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• Se requieren pruebas adicionales para identificar estos microorganismos.

• Positivo: los organismos inoculados estarán rodeados de zonas
transparentes de ADN despolimerizado, mientras que el medio más alejado
del botón de inoculación tendrá un aspecto opaco y blancuzco debido al
ADN polimerizado.
• Negativo: el medio se observa opaco.
ADNasa (+) (-) (-)
ADNasa (+)
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PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA
Objetivo:
• Diferenciación presuntiva de Streptococcus pneumoniae de otras especies
de Streptococcus alfa-hemoliticas en función de la sensibilidad a la
optoquina.
Fundamento:
• Se utilizan discos de papel absorbente impregnados con 5 microgramos de
etilhidroxicupreína (optoquina) para demostrar la sensibilidad de S.
pneumoniae con fines de identificación. Esta especie es sensible a la
optoquina mientras que otras especies de Streptococcus alfa-hemoliticas
son resistentes a este compuesto.
• Colonias de Streptococcus alfa-hemoliticas crecidas en medio de agar
sangre o en medio CNA en cultivo reciente (18-24 h), y con morfología
sugestiva de Streptococcus pneumoniae.
• Muestras de hemocultivo en el que se observan cocos gram positivos en
cadenas y en diplos.
• Discos de optoquina de 5 microgramos
• Placa de agar sangre
Procesamiento:
• Sembrar en agar sangre de carnero y colocar el disco de optoquina en el
centro con pinzas estériles presionando para que el disco quede adherido al
agar.
• Incubar a 35+/-2ºC, 5% CO2 18-24h.
• Medir el halo de inhibición.
Control de calidad:
• Cepa de control positivo: Streptococcus pneumoniae.
• Cepa de control negativo: Streptococcus mitis.

• La incubación en CO2 disminuye el halo de inhibición pero es requisito
indispensable la incubación en esta atmósfera para no obtener falsos
sensibles con especies de Streptococcus diferentes a Streptococcus
pneumoniae.
• Existen cepas de S. pneumoniae resistentes a la optoquina.
• Los halos de inhibición generalmente son mayores en cepas capsuladas.
Un porcentaje elevado de cepas no capsuladas tienen sensibilidad
intermedia.
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• Positivo: >13 mm con disco de 6 mm y >15 mm con discos de 10 mm.
• Negativo: Sin halo de inhibición
• Intermedio o dudosa: 7-14 mm con discos de 6 mm y de 10-16 mm con
discos de 10 mm. En estos casos de debe realizar una prueba
complementaria de identificación, como la prueba de la solubilidad en bilis.
Sensible
Resistente
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PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA
Objetivo:
• Diferenciación presuntiva de Streptococcus pyogenes (estreptococos beta-
hemolíticos del grupo A de Lancefield) de otras especies de Streptococcus
beta-hemolÌticas en función de la sensibilidad a la bacitracina.
Fundamento:
• Se utilizan discos de papel absorbente impregnados con 0,04 U de
bacitracina para demostrar la sensibilidad de S. pyogenes con fines de
identificación. S. pyogenes se muestra sensible a la bacitracina mientras
que otros estreptococos beta-hemolítico son generalmente resistentes a la
bacitracina.
• Colonias de estreptococos beta-hemolíricas crecidas en medio de agar
sangre o en medio CNA en cultivo reciente (18-24 h).
• Muestra de hemocultivo en el que se observan cocos grampositivos en
cadenas.
• Disco de 0,04 U de bacitracina.
• Placas de agar con 5% de sangre de carnero.
Procedimiento:
• Sembrar en agar con 5% de sangre de carnero y colocar el disco en el
centro con pinzas estériles presionando para que el disco quede adherido al
agar.
• Incubar a 35 ± 2oC, 5% CO2 18-24h.
Control de calidad:
• Cepas control positivo: S. pyogenes
• Cepa control negativo: S. aureus

• Hay un pequeño porcentaje de cepas de S. pyogenes resistentes a la
bacitracina.

• Cualquier zona de inhibición del crecimiento alrededor del disco, aunque
sea pequeño, indicará sensibilidad a la optoquina y, por tanto, la especie es
S. pyogenes.
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Resistente
Sensible
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PRUEBA DEL CAMP
Objetivo:
• Determinar la capacidad de un microorganismo para producir una proteína
que produce un efecto sinérgico con la beta-hemolisina de S. aureus.
Fundamento:
• Algunos microorganismos sintetizan una proteína que produce un efecto
sinérgico con la beta-hemolisina de S. aureus sobre eritrocitos ovinos y
bovinos. Si ambos microorganismos se siembran próximos en un medio de
agar sangre, se producir· un fenómeno lítico en el punto de intersección de
los dos microorganismos.
• La proteína se denominó factor CAMP por las iniciales de los nombres de
los autores que descubrieron este fenómeno con la proteína B de
Streptococcus agalactiae, y esta prueba permite identificar presuntivamente
este microorganismo.
• Colonias bacterianas crecidas en medio de cultivo sólido.
• Agar sangre de carnero (5%) S. aureus.
Procedimiento:
• Sembrar la cepa S. aureus en línea recta sobre un medio de agar sangre
• Inocular la bacteria a estudiar perpendicularmente a la línea del estafilococo
pero sin tocarla
• Rotular la placa
• Incubar a 35 ± 2oC, 5% CO2 24-48 h
Control de calidad:
• Positivo: Streptococcus agalactiae.
• Negativo: Streptococcus pyogenes.

• La prueba del CAMP es una prueba de identificación presuntiva que debe
acompañares de otras pruebas para la identificación definitiva de los
microorganismos a los que se aplica.
• Se debe utilizar sangre de carnero. La utilización de otro tipo de sangre
puede dar resultados falsos negativos
• Listeria ivanovii solo da una reacción positiva si se utiliza Rhodococcus equi
en vez de S. aureus.
• Algunas cepas de S. pyogenes pueden dar una reacción positiva.
• Resultado positivo: formación de una punta de flecha de beta-hemólisis
en la intersección de las dos bacterias.
• Resultado negativo: ausencia de formación de una punta de flecha.
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BENEMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

Ana Bertha Escobedo López

Stomatococcus mucilaginosus Eikenella corrodens

Manitol negativo Manitol positivo

Sin inocular Pseudomonas aeruginosa

• Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos

• Es un medio enriquecido, diferencial y no selectivo, permite distinguir 3

• Siembra en superficie, inocular directamente la muestra por estría cruzada,

• Observar las características de las colonias, y las reacciones de hemolisis:

Microorganismo Crecimiento Hemolisis

Sin inoculo Salmonella typhimurium

Shigella sonnei Salmonella enteritidis

Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa

Sin inoculo Candida albicans

Sin inoculo Salmonella typhimurium

Sin inoculo Vibrio cholerae

Sin inoculo Shigella flexneri

Shigella flexneri Sin inoculo

• Diferenciar enterobacterias en base a la capacidad de usar citrato como

• El medio de cultivo es diferencial con base en que los microorganismos

• Estriar en la superficie del medio de cultivo.

• Positivo: Crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de

TRIPLE SUGAR IRON

• Diferenciar enterobacterias, con base en la fermentación de los hidratos de

• Por fermentación de azúcares, se produce ácidos, que se detectan por

• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con asa recta

Interpretación de los resultados:

Observando el color del medio de cultivo y la producción de gas.

1. Superficie alcalina/profundidad acida (pico rojo/fondo amarillo): El

K/K A/A A/A K/A K/A

• Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad

• Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberan

• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, estriar la

1. Microorganismo que hidrolizan la urea: El medio de cultivo es de color

MOVILIDAD INDOL ORNITINA

• Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia

• La tripteína aporta gran cantidad de triptófano, sustrato de la enzima

• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar por

Observar la movilidad y el color del medio de cultivo. Luego realizar la prueba de

o Resultado positivo: Presencia de turbidez o crecimiento más allá

o Resultado positivo: Color púrpura

Prueba del indol:

Agregar al medio de cultivo 2 gotas de reactivo Enrlich o de Kovac’s.

o Resultado positivo: Anillo de color rojo.

• Se utiliza para la determinación del metabolismo oxidativo y fermentativo de

• En la vía oxidativa, el aceptor final de electrones debe ser el oxígeno y por

• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar por

• Si la vía es oxidativa, solamente el tubo sin cubrir con parafina (tubo

Reacción Tubo de reacción Tubo abierto Tubo cubierto

Oxidación (O) Amarillo Verde

Fermentación Amarillo Amarillo

Inerte Azul o verde Verde

Facultativo Amarillo Amarillo

• Utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp.,

• Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y

• A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio y mediante el uso

o Resultado positivo: Superficie alcalina/profundidad alcalina (pico

o Resultado positivo: Superficie rojiza/profundidad ácida. Esto

o Resultado positivo: Ennegrecimiento del medio de cultivo

Anotaciones y limitaciones del procedimiento:

Obtención y expresión de resultados:

Obtención y expresión de los resultados: