MICROBIOLOGÍA I

UNIDAD 3:

Técnicas de
identificación
Bacteriana
 Técnicas de identificación Bacteriana
• La identificación de bacterias es uno
de los instrumentos principales del
diagnóstico de enfermedades
infecciosas
• Permite saber con lo que se enfrenta
el paciente, y qué tratamiento es el
adecuado.
El proceso del diagnóstico microbiológico en general y el
bacteriológico es secuencial:
1. Problema clínico
2. Toma y transporte adecuados de las muestras
3. Recepción en el laboratorio
4. Procesamiento, análisis e interpretación de los
resultados
5. Informe final para tomar decisiones y adecuación de
tratamientos
 OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA DE LOS MICROORGANISMOS

A) Observación en medios de cultivo sólidos B) Observación en medios de cultivo líquidos

Colonias: tamaño, forma,
Pigmentación, consistencia, olor,
hemólisis

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE LOS MICROORGANISMOS

A) Observación al estado vivo (examen en fresco) B) Tinciones
Tinción de Gram
• La observación directa al microscopio de muestras
no teñidas, puede realizarse directamente, o con Tinción de Ziehl-Neelsen
solución salina.
• Util en la observación de estructuras no bacterianas
como levaduras, micelios de hongos filamentosos,
parásitos
Técnicas de identificación bacteriana

1. Pruebas 2. Pruebas de
bioquímicas sensibilidad

CMI
Sistemas Antibiogramas (concentración
Convencionales comerciales mínima inhibitoria)

3. Pruebas 4. Pruebas
inmunológicas Moleculares
1. Pruebas bioquímicas para
la identificación de bacterias
 1. Pruebas bioquímicas para la
identificación de bacterias
Los microorganismos estrechamente relacionados pueden ser diferenciados a través de una serie de
pruebas bioquímicas que identifican varias propiedades metabólicas de diferentes especies
bacterianas.

Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el

microorganismo es capaz de fermentar azúcares, la
presencia de enzimas, la degradación de
compuestos, la producción de compuestos
coloreados, etc.
 1. Prueba de la Catalasa
• La catalasa es una enzima que cataliza la
descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y
oxígeno.
• Los m.o que producen burbujas tras añadirle el H2O2 se
consideran catalasa positivos, los que no producen son
catalasa negativos.

• Se pone en contacto (en un portaobjetos) una cantidad

pequeña de cultivo bacteriano (24-48hs de incubación)
con peróxido de hidrógeno (al 3%
• La liberación de O2 indica la presencia de catalasa

Es utilizada para diferenciar Streptococcus

H2O2 + catalasa H2O + ½ O2 (catalasa -) Staphylococcus (catalasa +).
Se usa para diferenciar Bacillus (catalasa +)
de Clostridium (-).
2. Prueba de la oxidasa
• Esta prueba sirve para determinar la presencia de la
enzima citocromo oxidasa.
• La citocromo oxidasa es una enzimas que forma parte
de la cadena de transporte de electrones en la
respiración aeróbica, transfiriendo electrones al
oxígeno, con la formación de agua.
• Se utiliza el reactivo clorhidrato de tetrametil-p-
fenilendiamina al 1%
• En un portaobjetos o papel filtro se pone en contacto Color violeta: oxidasa +
una colonia bacteriana y se mezcla con el reactivo, Ausencia de color: oxidasa -
esperar 5-10 seg.

• Se usa para identificar todas las especies de Neisseria ( oxidasa +)

• • .
Para diferenciar Pseudomonas (oxidasa+) de las enterobacterias (oxidasa -)
3. Prueba de la coagulasa
• Determina la presencia de la enzima coagulasa que
tiene la propiedad de coagular el plasma
• Se realiza para distinguir cepas de S.auerus (+) con
el resto de estafilococos.
• Se pone en contacto una pequeña cantidad del
cultivo bacteriano con plasma procedente de conejo
con anticoagulante EDTA.
• Incubar 4 hs a 37º C.
4. Prueba del Citrato
• Sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar
citrato como única fuente de carbono.
• Se produce una alcalinización del medio
• Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons
que contiene citrato de sodio, azul de bromotimol (indicador
de pH)
• Las bacterias que metabolizan el citrato generan
alcalinización del medio (cambio de verde a azul)
5. Prueba del Indol
• Se realiza el cultivo en un caldo rico en triptófano, cuyo
producto de degradación es el indol.
• La presencia de la enzima triptofanasa en la bacteria
provoca la hidrólisis del aminoácido y su desaminación,
produciendo indol, ácido pirúvico y amoníaco

Medio de cultivo con peptona, cultivo

bacteriano y reactivo de Kovacs.
Prueba positiva: anillo color rojo en la
superficie del caldo
 6. Prueba de la Lactosa
En agar McConkey las bacterias Gram positivas ven
inhibido su crecimiento debido a la presencia de
sales biliares y cristal violeta, sólo crecerán las
enterobacterias.
Entre ellas las que fermenten la lactosa (coliformes)
liberarán productos ácidos que producirán un
cambio de pH
Las colonias lactosa (+) aparecerán de color rojo, y
un color amarillento las colonias lactosa (-).
Esta prueba se usa para diferenciar entre las
enterobacterias en general y el grupo de los
coliformes (lactosa+)
 7. Manitol-Movilidad-Nitratos
• Se pueden determinar en el Manitol movilidad, que se
prepara en tubo con agar recto y se siembra en picadura,
incubándose a 37 ºC durante 24 horas

a. Prueba del Manitol

Sirve para detectar si los m.o son capaces de
fermentar el manitol liberando productos
ácidos que serán detectados gracias al
indicador rojo de fenol que cambiará a color
amarillo.

Entre las bacterias de importancia clínica, la prueba del manitol sirve para diferenciar Staphylococcus
aureus (+) de Staphylococcus epidermidis (-).
 7. Manitol-Movilidad-Nitratos
b. Prueba de la Movilidad
• Sirve para determinar si un microorganismo es
móvil o inmóvil.
El medio manitol movilidad permite la realización
de esta prueba gracias a ser semisólido.
• En estas condiciones, las bacterias móviles
producirán un enturbiamiento
• Las bacterias inmóviles permanecerán en la
misma línea de la picadura en que se
sembraron.
7. Manitol-Movilidad-Nitratos
c. Prueba de la reducción de nitratos
Sirve para determinar la capacidad de un organismo
de reducir el nitrato a nitritos.
Al medio manitol movilidad se le incorpora nitrato
potásico y los reactivos A y B de Griess-Ilosvay en
cantidades iguales (1ml aprox.).
Un cambio de color (rojo) dentro de los 30 seg indica
prueba completa con resultado positivo.
8. Prueba de la Ureasa • Determina la capacidad de un organismo de
catalizar la descomposición de la urea formando
una molécula de dióxido de carbono y dos
moléculas de amoniaco por acción de la enzima
ureasa.
• La degradación de la urea produce amoniaco
que hará variar el color del indicador de
amarillo a rojo.

Ej. Proteus spp

Ej. E.coli
 9. Prueba del Rojo de Metilo/y Voges-Proskauer
• La prueba consiste en comprobar si el microorganismo en estudio
fermenta la glucosa con producción de ácidos
• Estas dos pruebas forman parte de las pruebas IMViC (indol,RM-
VP,citrato)
• Para la realización de estas dos pruebas se cultiva el microorganismo
en caldo RM-VP, luego se le agrega:
• Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le añade unas gotas (4-5) de
solución indicadora de Rojo de Metilo. Se considera positiva si vira al
rojo y negativa si permanece amarillo.
• Voges-Proskauer: A la otra porción de cultivo se le añade:
Reactivo A de Voges-Proskauer (α-naftol al 5% en alcohol etílico
absoluto). El medio adquiere un aspecto lechoso.
Reactivo B de Voges-Proskauer (KOH 40%). Desaparece el aspecto
lechoso y se agita fuertemente.
• Si la prueba es positiva, transcurridos 10 minutos desde la adición de
los reactivos, aparecerá un color rosado-violáceo.
10. Prueba TSI (hierro triple azúcar)
• El TSI es un medio destinado a la identificación de
Enterobacterias
• Detección de la fermentación de la glucosa, lactosa y
sacarosa
• Producción de sulfuro de hidrogeno.
• A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el
fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Incubar
a 35ºC por 24 horas.
10. Prueba TSI (hierro triple azúcar)
Interpretación:
A) Superficie alcalina/fondo alcalina (superficie
roja/fondo rojo): el m.o es no fermentador de
azúcares.
B) Anaranjado/anaranjado (control, sin inocular).

C) Superficie alcalino/fondo ácido (superficie roja

/fondo amarillo): el m.o solamente fermenta la glucosa.

D) Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el

m.o fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo
indica que el microorganismo produce gas

E) El ennegrecimiento del medio indica que el

m.o produce ácido sulfhídrico (H2S).
11. Prueba LIA Agar Lisina-hierro

Utilizado para la diferenciación de bacilos

Gram negativos entéricos, especialmente
miembros del género Salmonella

Actividad de la enzima Lisina decarboxilasa:

• Desaminación de la lisina (+) : color rojo

(formación de ácido alfa ceto carbónico)
• Descarboxilación de la lisina (+): todo el
medio vira a color violeta
• Descarboxilación de lisina (-): parte del
medio queda amarillo (acidificado)
• Producción de H2S: presipitado negro
• Producción de gas
12. Prueba MIO (Movilidad-Indol-Ornitina)
• Identificación de enterobacterias
• Medio nutritivo: contiene glucosa, extracto de
levadura, peptona, tripteína, clorhidrato de L-
ornitina, púrpura de bromocresol y agar.

• La ornitina determina si la bacteria es capaz

de descarboxilar el aminoácido, es decir, si
cuenta con la enzima orinitina descarboxilasa.

• Negativa: color amarillo en el fondo

• Positiva: color completamente morado

Ornitina
13. Prueba de SIM (sulfuro-indol-motilidad)
• Medio semisólido
• Permite diferenciar enterobacterias
• Reducen sulfato con la producción de H2S
(precipitado negro del tubo)
• Contiene caseina rica en triptona para la
producción de indol (revelado por el reactivo de
Kovacs) anillo rojo en la superficie
• Permite determinar movilidad
14. Prueba de CAMP
Las especies del género Streptococcus del grupo B (β-
hemolíticos) producen un factor CAMP (proteína
termoestable: factor monofosfato de adenina cíclica) que
reacciona con la β-hemolisina incrementando la beta
hemólisis (sinergismo que se evidencia en forma de
punta de flecha)

Procedimiento:
• Agar sangre
• Estría de S.aureus
• Cultivo del Streptococcus en
estudio en forma perpendicular
• Incubar 24hs 35ºC
Pruebas de
sensibilidad
 Pruebas de sensibilidad
Sensibilidad a la
optoquina
• Identificación de S. pneumoniae de otros
S.alfa hemolíticos.
• S. pneumoniae es sensible a la optoquina
(clorhidrato de etilhidrocupremia)
• Cultivo: agar sangre con discos de
optoquina, incubar 24 hs 37 ºC en
atmósfera de CO2
Pruebas de sensibilidad
Sensibilidad a la novobiocina
Se basa en que ciertas bacterias son
sensibles a la novobiocina
Se inocula el m.o en agar Mueller Hinton
según la técnica de Kirby-Bauer,(difusión
en disco) usando discos de novobiocina
 Pruebas de sensibilidad
Sensibilidad a la
bacitracina

• Identificación de S. beta-hemolítico
• del grupo A que son sensibles a
bajas concentraciones del antibiotico.
• Inhibe selectivamente al
Streptococcus pyogenes
• Cultivo: agar sangre con discos de
bacitracina, incubar 24 hs 37ºC en
atmósfera de CO2
2. Sistemas comerciales
de identificación
2. Sistemas comerciales de identificación
• Pequeños tubos que contienen sustratos deseados
• Se inoculan con una suspensión bacteriana y se
incuban
• Los cambios de color en las diferentes pruebas se
interpretan mediante una tabla de lectura y se obtiene
un número de 7 dígitos
• Una base de datos permite identificar al m.o según el
número obtenido.
 Microbiología I
Unidad 3
Cocos gram positivos
Cocos gram negativos
Cocos Gram
positivos
 Cocos Gram
positivos

Catalasa + Catalasa -
Cocos en
cadenas

1. 2.
Staphylococcus Streptococcus

Cocos en 3.
racimos Enterococcus
 1. Género Staphylococcus
Generalidades
• Cocos gram positivos agrupados en
racimos.
• Catalasa +
• No presentan movilidad
• Anaerobios facultativos
• Crecen en medios salados y algunos
fermentan el Manitol
• Resistentes a antibióticos.
• Crecen a temperaturas entre 30 y 37 ºC
 1. Staphylococcus
• La mayoría pertenece a la flora normal
del organismo
• Las infecciones se adquieren cuando
se produce un traumatismo en piel o
mucosas, el m.o aprovecha para
colonizar.
• Pueden transmitirse de persona a
persona, o dispositivos como implantes

Ls infecciones que se adquieren dentro

del ámbito hospitalario: infecciones
nosocomiales
Staphylococcus aureus
Staphylococcus à 32 especies
Se trata de uno de los patógenos no formadores de
esporas más resistentes
Coagulasa +
Es el más importante del género por su virulencia

Ø T = 7- 48°C (35°C), pH= 4,5 – 9 (7-7,5)

Ø Muy resistente: Penicilina, T refrigeración y congelación,
altas concentraciones de sal (10 - 20%), desecación,
desinfectantes comunes.

Ø Actividad de agua (aw) : 0,86 - 0,99

Ø Hábitat: piel y mucosas de humanos y animales.

S. aureus: Enfermedades
Productores de toxinas

• Involucrado en infecciones nosocomiales

• Produce infecciones con supuración, foliculitis,
forúnculos, abscesos subcutáneos.
• Puede localizarse en la piel, diseminarse a la
sangre (septicemia), articulaciones.
• Intoxicación alimentaria (vómito, diarrea) causada
por enterotoxina.
• Síndrome de la piel escaldada ( dermatitis en recién
nacidos)
• Productor de toxina causante del síndrome del
shock tóxico (fiebre, hipotensión,vómitos, puede
ser mortal), poco frecuente.
Diagnóstico de laboratorio:
Identificacion y aislamiento de
Staphylococcus:

1. Tinción de gram: cocos Gram+ en racimos

irregulares
2. Prueba de catalasa: positiva
2. Medios de Cultivo:
• Agar sangre 5%
• Agar chocolate
• Agar manitol salado: selectivo (alta
concentración de NaCl que impide el
crecimiento de otras bacterias), diferencial,
S.aureus forma colonias de color amarillo a
dorado, por fermentación del manitol.
• Incubación en aerobiosis o en CO2 a 35-37ºC
de 18 a 24 hs.
 2. Género
Streptococcus
• Cocos Gram positivos agrupados en cadenas de
longitud variable.
• Agrupados en cadenas
• Flora normal de la piel, tracto respiratorio, digestivo,
genito urinario.
• No forman esporas
• Catalasa –
• Oxidasa –
• NO son móviles
• En algunos casos pueden comportarse como
patógenos oportunistas
 2. Género
Streptococcus
• Menos resistente que el Staphylococcus
• Sensible a la penicilina
• Se eliminan a 60ºC por 30 minutos
• Anaerobios facultativos
Medios de cultivo:
• Se cultivan en agar sangre: producen
hemólisis
• Pruebas bioquímicas: bacitracina, optoquina,
CAMP, NaCl 6,5% (resistentes)
• Se pueden clasificar de acuerdo a su patrón
de hemólisis y según los grupos de Lancefield.
Clasificacion según el patrón de hemólisis:

Clasificación según los grupos de Lancefield:

Se agrupan de acuerdo a los carbohidratos de la pared celular
Grupos A-W
 Principales especies de importancia clínica:
Especies Grupo Hemólisis Pruebas Enfermedades
bioquímicas

S. pyogenes A β Bacitracina Faringitis, celulitis, erisipela, escarlatina

fascitis necrotizante, septicemia, fiebre
reumática
S. agalactiae B β CAMP Infecciones urinaria (embarazadas),
sepsis puerperal, meningitis, septicemia
(recién nacidos)
S. viridans - α Optoquina R Endocarditis y absesos

S. mutans - α Optoquina R Caries dental

S. neumoniae/ - α Optoquina R Neumonía, otitis, sinusitis, meningitis

Neumococo
Diagnóstico de
laboratorio: Identificacion
y aislamiento de
Streptococcus:

1. Tinción de gram: cocos Gram+ en

cadenas
2. Prueba de catalasa: negativa
3. Cultivo:
• Agar sangre 5% permite diferenciar
el tipo de hemólisis
• Agar chocolate
• Incubación en aerobiosis o en
atmósfera de CO2 a 35-37ºC durante
48 hs.
• Consiste en sembrar en agar sangre el m.o problema junto a S.aureus.
• La siembra se realiza con una estría en el centro de la placa con un cultivo
conocido de S.aureus
• Se realiza otra estria con el m.o problema en forma perpendicular.
• Incubación
• La prueba es positiva cuando se forma una zona en forma de punta de flecha
 3. Enterococcus
• Cocos gram positivos (diplococos)
• Catalasa negativos
• Se disponen en parejas y cadenas cortas
• No hemolíticos
• Aerobios y anaerobios
• Crecen en medios salinos (6,5% sal)
• Resistentes a antibióticos, condiciones
adversas: altas temperaturas (65ºC),pH (4,5-
10), congelación, desecación
• Toleran altas concentraciones de bilis
3. Enterococcus Especies de importancia clínica
• Enterococcus faecalis
Se encuentran en el intestino grueso y
• Enterococcus faecium
aparato genitourinario

Enfermedades
• Infecciones hospitalarias (infecciones
urinarias, peritonitis, infecciones en
heridas abiertas)
• Endocarditis, meningitis
• Personas que han recibido tratamientos
prolongados de antibióticos
 Diagnóstico de laboratorio:
Identificacion y aislamiento de
Enterococcus:

1. Tinción de gram: cocos Gram+ pares o cadenas

cortas
2. Prueba de catalasa: negativa Prueba de Bilis Esculina:
3. Cultivo: Enterococcus hidroliza la esculina
Agar bilis esculina que contiene: en presencia de bilis al 40%
agente selectivo: bilis
agente diferencial: esculina

Esculina esculetina+glucosa
Fe+3
Complejo verdoso-negro

Colonias pequeñas, rodeadas de

un halo socuro
Cocos Gram
negativos
 Cocos Gram
Negativos

Género
Neisseria

Neisseria Neisseria
meningitidis gonorrhoerae

Meningogoco Gonococo

Diplococos Moraxella catarrhalis

 Género Neisseria
Generalidades
• Cocos gram negativos aerobios
• Oxidasa positivos
• Se agrupan en parejas (diplococos)
• Pueden aparecer como parte de la flora normal
del organismo excepto las patógenas
Neisseria meningitidis, N. gonorrhoeae

Se transmiten de person a persona por

secreciones respiratorias de personas
contaminadas (N. meningitidis) y por vía
sexual (N. gonorrhoeae)
 1. Neisseria meningitidis
(Meningococo)
• No se considera dentro de la flora normal del
organismo
• Puede colonizar la orofaringe de las
personas sin producir la enfermedad
(portadores)
• Provoca meningitis meningocócica
potencialmente mortal
• Produce septicemia meningocócica: las
bacterias entran en el torrente sanguíneo, se
multiplican y dañan las paredes de los vasos
sanguíneos
Meningitis
Inflamación que afecta las meninges: capa delgada de
tejido que rodea el cerebro y la médula espinal.

Meningitis meningocócica:
• Muy contagiosa
• Común en niños y adolescentes
• Se produce por contacto directo con secreciones
nasales o faringeas de una persona infectada
2. Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
• Diplococo gramnegativo
• No móvil
• Aerobio o anaerobio facultativo,
• Catalasa +, oxidasa +
• Patógeno por excelencia, no pertenece
a la flora normal del ser humano
• Produce la gonorrea, enfermedad
venerea muy contagiosa.
• Es el m.o más exigente nutricionalmente
del grupo de los cocos gramnegativos
Las infecciones se localizan en las
mucosas donde se produce el contacto
con el microorganismo ( cuello uterino,
uretra, faringe, etc)

En el hombre esta enfermedad se

manifiesta como uretritis aguda, y en la
mujer causa complicaciones como
salpingitis aguda que frecuentemente
provoca infertilidad
• En algunos casos la enfermedad puede
diseminarse y provocar bacteriemia
• Las madres infectadas con goncococo
pueden transmitir al recién nacido
durante el parto, provocando oftalmia p
conjuntividtis neonatal: secreción ocular
purulenta.
Moraxella catarrhalis
• Diplocos gramnegativos
• Catalasa +, Oxidasa +
• Agrupados en pares
• Se encuentra en la flora bacteriana de las
vías respiratorias (nasofaringe)
• Patógeno importante en infecciones
respiratorias
• Asociada a otitis media, sinusitis,
bronquitis, neumonías
• Complicaciones: bacteriemina
Identificación de cocos
gramnegativos
• Tinción de gram: diplococos de color rosado
• Medios de cultivo:
Crecen en agar sangre y agar chocolate
• Para N. gonorrheae (más exigente) se utilizan medios de
enriquecimiento selectivo como el Thayer Martin.
• Son capnófilas: requieren atmósfera de CO2 (5-10%)
Agar Thayer Martin
• Medio sólido
• Alto contenido de nutrientes y aditivos: hemoglobina,
antibioticos (vancomicina, polimixina, trimetoprim,
nistatina)
• Para N.gonorrhoeae las muestras son secreciones
vaginales y uretrales
• Para N. meningitidis las muestras son LCR (líquido
cefalo raquídeo, exudados faringeos, y nasofaringeos

Agar Chocolate
• Medio de cultivo sólido, selectivo
• Variante del agar sangre, contiene hemoglobina,
extracto de levadura, especial para bacterias del tracto
respiratorio
• Contiene factores de crecimiento, como el NAD y
hemina, vitaminas.
• El agar se llama así debido a su parecido con el
chocolate, pero no contiene chocolate.
 Microbiología I
Unidad 3
Bacilos gram positivos
Bacilos gram negativos
 Bacilos Gram
positivos

Formadores de No formadores de
endosporas endosporas

Bacillus Corynebacterium Listeria

Bacillus Corynebacterium Listeria

antrhracis diphteriae monocytogenes

Bacillus
cereus
 Formadores de
Bacilos Gram endosporas
positivos
Bacillus

Bacillus
antrhracis

Bacillus
cereus
 Género Bacillus
• Bacilos grampositivos
• Aerobios, anaerobios facultativos
• Ampliamente distribuidos, el hábitat
principal es el suelo
• Formadores de endosporas
• Muy resistentes a condiciones adversas
• Algunas especies son beneficiosas
B.subtilis (productor de enzimas,
antibióticos) , B. thuringensis (control
biológico de plagas).
• Algunas especies son patógenas
(B.antrhacis, B.cereus)
Endosporas o esporas bacterianas
• Células especializadas formadas
dentro de la célula bacteriana muy
resistentes:
Ø Altas temperaturas
Ø Desinfectantes
Ø Radiación de baja energía
Ø Secado

Función: protegen el ADN, permiten a las

bacterias sobrevivir a las condiciones ambientales
adversas.

La endospora puede sobrevivir hasta que una variedad de estímulos ambientales desencadenen la
germinación, permitiendo el crecimiento de una sola bacteria vegetativa
Fases de la esporulación
1. Duplicación del ADN y división celular asimétrica.
Formación de septo
2. Formación del septo de la endospora (se va aislando el ADN
recién replicado).
3. Formación de la pre-espora (el septo de la endospora rodea la
porción aislada).
4.Síntesis del exosporio, formación de una capa de
peptidoglicano
5. Incorporación de calcio y producción de ácido dipicolínico.
6. La espora se recubre de una capa llamada cutícula
7. Maduración de la endospora.
8. Liberación de la endospora y lisis de la célula vegetativa al
medio.
Bacillus anthtracis
• Bacilos grandes, catalasa +
• No móviles
• Habitan el suelo, agua
• Hospedadores: humanos, bovinos, ovinos, equinos, aves
• Produce una toxina muy potente de alta virulencia
• Produce el ántrax o carbunco: se transmite a partir de
animales que contraen la bacteria del suelo
• Forma de contagio: por contacto con la piel, inhalación o
ingestión de esporas procedentes de animales
contaminados (no de persona a persona)
• Ha sido utilizado como arma biológica (bioterrorismo)
 El ántrax o carbunco es una zoonosis que según la vía de contagio puede
presentar tres formas clínicas:

Cutánea Pulmonar Digestivo

Las esporas penetran por
la piel (corte, lesión)
Se produce una herida que
adquiere un color negro.
Es tratable con atibioticos
en la mayoría de los casos.
Es la más grave
Por ihnalación de las esporas
Enfermedad de los
cardadores de lana
Tasa alta de mortalidad
Por ingerir las esporas
Carne contaminada
Grave, es menos común
Causa septicemia y
muerte
Bacillus cereus
• Bacilo gram positivo
• Forma toxinas termoestables (pH 2-11, 121 ºC 30 min)
• Patógeno oportunista
• Es ubicua: se encuentra en el suelo, agua, materia
prima y alimentos
• Responsable de intoxicación alimentaria
(enterotoxina), toxiinfección
 Transmisión:

Alimentos que pueden ser fuente de B. cereus:

Alimentos
preparados listos
para su consumo Leche y derivados lácteos Leche en polvo Especias
 Diagnóstico de laboratorio para bacterias gram positivas

• Tinción de Gram: bacilos grampositivos rectos y largos

• Las esporas no adquieren coloración con la tinción de
Gram, aparece como una zona clara dentro del bacilo.
• La tinción para eporas es verde de malaquita, las
esporas aparecen de color verde dentro de la célula
rosa

Cultivo: crecen en agar sangre, chocolate y hemocultivos

La mayoría crecen en 24hs en aerobiosis, en atmósfera de
CO2
Bacilos Gram positivos

No formadores de
endosporas

Corynebacterium Listeria
Corynebacterium
Bacterias Gram positivas
No móviles
No esporuladas
aerobias o anaerobias facultativas,
Se encuentran aisladas, en parejas o agrupadas
formando una especie de V, de letras chinas o de
empalizada.
Se encuentran en el suelo, agua, mucosas y piel
del hombre y animales

Especie patógena: C. diphtheriae

Las especies no patógenas son usadas en aplicaciones
industrial: producción de aminoácidos, ezimas,
nucleótidos, ácido glutámico
Corynebacterium diphtheriae
• Bacilos Gram positivos que aparecen en forma de letras
chinas y en empalizada
• No forma parte de la flora normal del ser humano
• Causa la difteria

Diferia respiratoria Diferia cutánea: úlceras

• La virulencia de esta bacteria se debe a la

producción de la toxina diftérica.
• Se produce la formación de una membrana en la
faringe que puede producir obstrucción respiratoria
• Se transmite por fluidos de la nasofaringe de
personas contagiadas a través de gotas.
• Por contacto directo con lesiones en la piel (difteria
cutánea) o a través de objetos contaminados.
 Listeria monocytogenes
• Bacilo gram positivo, anaerobio facultativo.
• No forman esporas, son ubicuas
• Se encuentran en el intestino de animales y
hombre
• Hasta el momento se conocen 10 tipos de
esta especies, de los cuales la Listeria
monocytogenes y la L.ivanovii, son los más
frecuentes en producir acción patógena en los
seres humanos.

• L. monocytogenes es la más
virulenta por su gran resistencia en
condiciones poco favorables
• Forman biofilms (estructuras de
protección dificiles de erradicar)
Listeriosis
INVASIVA:
Grave, afecta a las mujeres embarazadas, lactantes, niños
de corta edad, las personas mayores, pacientes
inmunodeprimidos
Síntomas: fiebre, dolores musculares, septicemia, meningitis,
endocarditis o neumonía.
Transmisión de la madre al feto, provoca graves lesiones en
el feto, abortos o nacimiento de niños con septicemia.

NO INVASIVA:
Gastroenteritis leve, que afecta a personas sanas.
Los síntomas son diarrea, fiebre, dolor de cabeza y
dolores musculares.
 Transmisión:

• La mayoría de los casos de listeriosis humana son de transmisión alimentaria (99%),

• Transmisión de animales a personas a través del consumo de alimentos de origen
animal (carne, pescado, leche, etc.) contaminados con patógenos.
• Las principales causas son la falta de higiene, a la inadecuada manipulación y a la
contaminación cruzada a lo largo de la cadena alimentaria, especialmente en el hogar
 Diagnóstico de laboratorio para Corynebacterium y
Listeria Cultivo: Corynebacterium y Listeria crecen
bien en caldos nutritivos, en agar sangre,
Tinción de Gram: chocolate y hemocultivos
• Listeria monocytogenes aparece como
bacilos grampositivos cortos aislados C.diphtheriae: las muestras se siembran en
• C.diphtheriae aparece como letras agar sangre con cisteína-telurito (CTBA), las
chinas o empalizada colonias aparecen de color negro, o agar
colistina-nalixídico (CNA), agar Tinsdale.
Bacilos Gram
negativos
 Bacilos Gram Negativos

Bacilos con
Fermentadores de No fermentadores requerimientos
glucosa de glucosa especiales para su
crecimiento

Enterobacterias Pseudomona
aeruginosa

Enteron= intestino
 Bacilos Gram Negativos

Fermentadores de
glucosa

Enterobacterias
Enterobacterias
• Bacilos cortos, G-
• Pertenecen a la flora intestinal humana
• Anaerobios facultativos
• Catalasa +
• No forman esporas
• Fermentan la glucosa con producción
de ácido y gas a 35-37ºC
• Oxidasa -
Principales géneros de importancia clínica:
 Aislamiento:
1) Etapa presuntiva:
• Agar ABRV-G
Bilis rojo violeta glucosa
Agentes selectivos: sales biliares y cristal violeta
Agentes diferenciales: glucosa/rojo neutro

2) Confirmación
Colonias típicas: rojas,
• Tinción de Gram: bacilos Gram- grandes con halo rojizo
• Prueba de la oxidasa: -
• Siembra en caldo glucosa 35-37ºC por 24 hs: positivos: Se realiza la siembra con
producción de gas sobrecapa
Eschierichia coli
• Bacilos cortos, Gram negativos
• Móvil (flagelos)
• Fermentan lactosa con producción de ácido y gas
• No forma esporas
• Catalasa positivo
• Oxidasa negativo
• Pertenece a la flora normal del intestino humano y de
animales de sangre caliente
 Eschierichia coli
• Algunas cepas son patógenas:
a) Enterotoxigénica
b) Enterohemorrágica
c) Enteroinvasiva
• Puede provocar infecciones intestinales (diarrea),
infecciones urinarias, bacteriemia, infeccciones
nosocomiales, meningitis en recién nacidos
• Indicadores de contaminación fecal

Aislamiento:
Agar EMB (Eosina-Azul de metileno) o Levine
Agentes selectivos: eosina y azul de metileno
Agente diferencial: eosina, azul de metileno lactosa
Colonias: centro oscuro, con o sin brillo metálico
 Salmonella
• Familia Enterobacteriaceae
• Bacilo Gram -, no forman esporas
• Anaerobio facultativo, móvil (algunas
especies)
• Fermentador de glucosa con producción
de ácido y gas
• Lactosa (-), Sacarosa (-)

heces à alimentos y agua

Condiciones de crecimiento de Salmonella
 Salmonella
Viven en el tracto intestinal de animales sanos,
principalmente, aves de corral, ganado vacuno y porcino.

Sobrevive varios meses en agua y ↓ aw (en ambientes secos)

Velocidad de multiplicación es elevada ( duplica cada 15 a

20 min) si la T es > 20 °C (T op. 35-43ºC)à carne, leche y
huevos.
Salmonelosis
Enfermedad leve, a veces puede ser
Salmonella enteritidis y typhimurium
grave (inmunosuprimidos)
Shigella
• Patógenas
• No móvil
• Fermenta glucosa sin producción de gas
• No fermentan lactosa
• Resisten a pH ácidos
Es muy sensible a condiciones
• El humano es el único reservorio de medioambientales y se destruye
Shigella en la naturaleza fácilmente, no sobrevive a
tratamientos térmicos y no se
multiplica a temperaturas de
refrigeración (<7ºC)
Shigella
Especies de importancia:
Shigella sonnei (Shigelosis: infección leve)
Shigella flexneri
Shigella boydii
Shigella dysenteriae (productora de toxina Shiga)
Causando enteritis invasora caracterizada por producir dolor
abdominal cólico, diarrea y fiebre: desintería bacilar
Yersinia Ampliamente distribuidas en la naturaleza, aguas
contaminadas
Tiene 12 especies y 3 son patógenas:

Y. enerocolítica Y. pseudotuberculosis Y. pestis

Zoonosis alimentarias

Principal reservorio animal para Y. enterocolítica:

cerdo
Se encuentra en amígdalas, ganglios, intestino,
heces
 Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella,
Morganella, Proteus, Serratia
• Enfermedades nosocomianles
• Infeccciones respiratorias, urinarias, bacteriemia

Enterobacter Klebsiella
Citrobacter

Proteus
Serratia Morganella
Bacilos Gram Negativos

No fermentadores
de glucosa

Pseudomona
aeruginosa
Bacilos gram negativos no fermentadores
• Usan los glúcidos por vía oxidativa
Géneros de importancia clínica:
• Pseudomonas
• Acinetobacter
• Flavobacterium
Acinetobacter baumanni
• Burkholderia

Pseudomona aeruginosa
• No se encuentra formando la flora normal del intestino
• Habita en ambientes domésticos, hospitalarios (ambientes
húmedos), agua, suelo
• Se caracteriza por producir una variedad de pigmentos,
como la piocianina (de color azul verdoso), la pioverdina
(pigmento fluorescente de color verde amarillento)
• Olor característico a uva (aminoacetofenona)
P. aeruginosa
 Pseudomona aeruginosa
• Forma de bastón, presentan flagelos
• Patógeno oportunista
• Pueden crecer en altas temperaturas, condiciones
adversas
• Una de las principales causantes de infecciones a
nivel mundial, segunda causante de neumonía
nosocomial P. aeruginosa
• Causante de infecciones urinarias, en heridas,
septicemia.

Aislamiento:
Agar cetrimida (selectivo y diferencial)
Colonias pigmentadas de color azul o azul verdoso
Muestran fluorescencia
Halo verde brillante bajo la luz UV.

Agar cetrimide
Bacilos Gram Negativos

Bacilos con
requerimientos
especiales para su
crecimiento

Vibrio cholerae
 Bacilos gram negativos con requerimientos especiales
Género Enfemedad
• Son exigentes
nutricionalmente Haemophilus Enfermedades respiratorias(oído, sinusitis,
H. Inluenzae bronquitis), a los huesos, sistema nervioso,
• Crecimiento lento H. parainfluenzae meningitis, neumonía en niños
Campylobacter Gastroenteritis (consumo de alimentos
C. jejuni contaminados: aves, carne, leche cruda)

Helicobacter Gastritis, ulcera péptica, cancer de estómago

H. pylori
Brucella Brucelosis: dolor de cabeza, fatiga, anorexia.
Transmitida por alimentos (lácteos sin pasteurizar),
contacto con animales infectados (bovinos)
Vibrio Vibriosis: cólicos, nauseas, vómito, fiebre.
V.cholerae Cólera (infección diarreica), gastroenteritis
V.Parahemolyticus bacteriana, causada por consumo de agua o
Crecen en medios salinos productos de pesca contaminados.
Microbiología I

Unidad 4
Otras bacterias de
importancia clínica
 Otras bacterias de importancia clínica

1. Bacterias 2. Micobacterias
anaerobias

Formadoras de No formadoras
esporas de esporas
Tinción de Ziehl-
Neelsen

3. Micoplasmas 4. Chlamydias y
Rickettsias
 1. Bacterias
anaerobias

Formadoras de No formadoras
esporas de esporas

Bacilos grampositivos • Actynomyces

Clostridium • Bifidobacterium
• Lactobacillus
• Propionibacterium
 Bacterias anaerobias
• Crecen en ausencia de oxígeno
• La mayoría froma parte de la flora normal del organismo humano, algunas viven en el suelo

Crecen en presencia de
Anaerobias oxígeno de forma muy
aerotolerantes lenta

No pueden crecer en
atmósferas de O2
Anaerobias estrictas porque les resulta
tóxico
Anaerobios: Bacilos grampositivos
formadores de esporas:
Clostridium
 Clostridium botulinum
- Bacilos Gram +
- Esporulado
- Temperatura óptima de crecimiento: 30 a 37°C
- pH: 4,5 a 8,0
- Productor de toxina botulínica

Poco frecuente à Grave: dificultad para tragar o

hablar, debilidad facial y parálisis.
ENFERMEDAD: Botulismo Ingestión de alimentos contaminados (conservas
en mal estado)

La toxina botulínica bloquea la liberación de

acetilcolina (neurotransmisor) responsable de
la transmisión de señales nerviosas a los
músculos, lo que produce parálisis muscular
Clostridium botulinum

La toxina botulínica es de las toxinas biológicas más potentes que existen ya que
cantidades muy pequeñas pueden causar la enfermedad.
Clostridium perfringens
• Bacilos Gram +
• Catalasa (–)
• Esporulados: espora oval, subterminal, no
deformante.
• Reductor de sulfito a sulfuro.
• Productor de toxina (enerotoxina)

Enfermedades:
Gangrena gaseosa: producida por infección de heridas
Se produce destrucción de músculos y tejidos

Gastroenteritis: Enfermedad leve y de corta duración,

causando principalmente diarrea y dolores abdominales (< a
24h).
 Clostridium tetani
• Bacilos Gram +
• Se encuentra en el suelo, tracto gastrointestinal
de humanos, equinos, perros bovinos, aguas
residuales
• Formadores de esporas resistentes

Produce el tétanos:
• Enfermedad grave del sistema nervioso:
contracciones musculares (mandíbula, cuello)
• Puede interferir en la respiración y causar la muerte
• Se transmite por inoculación de esporas con
elementos cortantes, mordeduras de animales,
contacto con heridas con elementos contaminados
• No se transmite de persona a persona
Clostridium difficile
• Provoca diarrea en pacientes hospitalizados, con
la flora intestinal disminuida (tratamiento con
antibióticos).
• Afecciones intestinales serias (colitis: inflamación
del colon)
 Anaerobios:
Bacilos grampositivos no
formadores de esporas:

• Actynomyces
• Bifidobacterium
• Lactobacillus
• Propionibacterium
Actinomyces
• Las bacterias individuales son esfericas
• Las colonias forman estructuras
semejantes a las hifas de los hongos
• Son comensales presentes en humanos
en la orofaringe, tracto gastrointestinal y
urogenital.
• Se alojan en la cavidad bucal
A. Israelii:
Puede causar actinomicosis: formación
de absesos en la boca, cara, cuello
pulmones, tracto gastrointestinal
Ocurre cuando la bacteria entra en los
tejidos después de un traumatismo,
cirugía o infección
 Bifidobacterium
• No móviles, ramificadas.
• Bacterias ácido lácticas
• Las bífidobacterias son uno de los mayores géneros
de bacterias saprófitas de la flora intestinal, las
bacterias que residen en el colon.
• Ayudan en la digestión
• Participan en la fermentación de carbohidratos no
digeribles
• Previene la proliferación de bacterias dañinas
• Se usan como suplementos probióticos
Lactobacillus
ü Se encuentran en el tracto intestinal, genital
femenino, algunos alimentos.
ü Benéfica para el ser humano
ü Pueden ayudar a la absorción de nutrientes
ü Inhibición de m.o dañinos
ü Buen funcionamiento del sistema inmune, en la
prevención de la diarrea
Propionibacterium
• Se encuentran comúnmente en el suelo, los productos lácteos y
la piel humana.

• Propionibacterium acnes es una especie de este género que

se asocia con la piel humana y está involucrada en el desarrollo
del acné.

• Algunas otras especies de Propionibacterium también se utilizan

en aplicaciones industriales, como en la producción de vitamina
B12 y queso suizo.
• Estas bacterias pueden fermentar azúcares para producir ácido
propiónico, que se utiliza como conservante de alimentos y en la
producción de plásticos.
Anaerobios: Bacilos gramnegativos

Bacteroides fragilis
• Forman parte de la flora intestinal humana,
es comensal pero pueden provocar
infecciones en casi cualquier parte del
cuerpo si se desplaza al torrente sanguíneo
o al tejido luego de una cirugía o trauma
 Diagnóstico de laboratorio
• Para el cultivo de anaerobios se utiliza: (BBE), caldo tioglicolato

Agar sangre para anaerobios Agar Schaedler Agar Bilis esculina para Caldo tioglicolato
Bacteroides (BBE)

• Deben cultivarse en atmósfera anaerobia a 35-37ºC por 48hs

Se utilizan contenedores en los que se
introducen sobres generadores de anaerobiosis