Banco de preguntas

1.¿Qué es un frotis y para qué se utiliza?

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con
objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la
preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida

2.¿Qué es un colorante? ¿Cómo está constituido? ¿Cómo es que se combina con los diferentes
componentes celulares?

un colorante es un compuesto orgánico que al aplicarlo a un sustrato (orgánico o inorgánico) le altera

la propiedad física del color atendiendo a la modificación en las zonas de absorción del espectro
visible.

Los colorantes hacen parte de reacciones químicas específicas y de acuerdo con su origen, se pueden
clasificar en naturales, aquellos que son extraídos de plantas o animales, y artificiales, los que se
extraen de minerales y son procesados en el laboratorio. En cuanto a su estructura química los
colorantes están constituidos por un grupo funcional cromóforo y un auxocromo.

En un colorante, el cromóforo es un grupo funcional que cuenta con una alta densidad electrónica y
por lo tanto se pueden clasificar de la siguiente manera:

Dobles y triples enlaces carbono-carbono

• Anillos aromáticos

• Grupos carbonilos, imino, diazo y nitro

• Estructuras que presenten enlaces entre el carbono y átomos con pares de electrones libres.

Por su parte, los auxocromos, son sustituyentes del cromóforo y alteran los valores de las longitudes
de onda en las que se presentan las absorciones de la luz. Generalmente, los auxocromos son grupos
mucho más sencillos que los cromóforos, como es el caso de grupos metilo (-CH3), halógenos (-X),
hidroxilos (-OH), y amino (-NH2).

Al contacto con el colorante ocurre un fenómeno de absorción, similar al que tiene lugar en las
materias porosas, dicho compuesto penetra al interior del sustrato aprovechando los espacios
intersticiales y la cohesión molecular, sin que ocurra enlace químico. Es un proceso que se explica
similar a la solubilidad de una sustancia en otra. Las células microbianas contienen compuestos entre
los cuales se encuentran los ácidos nucleicos. Debido a la presencia de los grupos fosfato en dichos
ácidos, se concentran en las moléculas cargas negativas, las cuales facilitan combinaciones con los
colorantes de tipo básico catiónicos.

De otra parte, los colorantes ácidos, aniónicos, no tiñen la célula y por esto, se emplean como
colorantes de contraste, como, por ejemplo: el azul de metileno o la eosina que no colorean al
microorganismo, pero si el fondo del campo microscópico.

3.¿Qué factores intervienen para que los colorantes se combinen con los componentes celulares?
Teniendo en cuenta las estructuras químicas generales de los colorantes y la densidad electrónica
que en ellos se presenta, la propiedad de teñir depende principalmente del carácter ácido o básico
del grupo funcional.

Colorantes neutros: se obtienen a partir de los precipitados provenientes de soluciones acuosas en

las que se encuentran disueltos cromóforos con características ácidas y básicas. El colorante se
produce disolviendo el precipitado en alcohol, tal es el caso de la Giemsa. En la tinción de Giemsa,
se combinan el carácter básico de los colorantes azul de metileno, Azure A y Azure B y el carácter
ácido de la eosina, lo que ofrece un espectro amplio de colores dependiendo de los ajustes de pH.

Colorantes básicos: la acción colorante está a cargo del catión, mientras que el anión no tiene esa
propiedad. Un ejemplo es el azul de metileno (cloruro de metiltionina). El grupo amino (básico) es el
grupo funcional activo en la molécula.

Colorantes ácidos: la sustancia colorante está a cargo del anión, mientras que el catión no tiene esa
propiedad. Un ejemplo es la Eosina o Eosinato de sodio. El grupo carboxilo (ácido) es el grupo
funcional activo en la molécula-

4.¿Qué es un mordiente? Menciona tres ejemplos.

Los mordientes intensifican la tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el colorante.
También se pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares
externas, como los flagelos, que debido a su delgadez no podrían ser visualizados de otra forma. Un
mordiente se define clásicamente como un ion que se une a un colorante químico y lo mantiene abajo,
de modo que el tinte permanezca adherido al organismo. Sin embargo, cualquier sustancia química
que mantenga un colorante en su lugar también se puede considerar como un mordiente.

Por ejemplo, esta el alcohol, ácido crómico y ácido pícrico.

5.¿Cuál es el objetivo de calentar en la tinción de esporas?

Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores
ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio
óptico como estructuras refringentes y de difícil tinción, por lo que para que el tinte verde malaquita
logre su función, en necesario calentar.

Referencias

Corrales Ramírez, L. C., & Caycedo Lozano, L. (2020). Principios físicoquímicos de los colorantes
utilizados en microbiología Principios físicoquímicos de los colorantes. Nova, 18(33).
https://doi.org/10.22490/24629448.3701

Pascual.(2005). Preparación de un frotis bacteriano. Recuperado de

https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35695/preparacion_de_un_frotis_bacteriano.pdf
untitled. (2022). Usal.es.
http://aulacidta5.usal.es/aulavirtual/Demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap305.htm
#:~:text=Los%20mordientes%20intensifican%20la%20tinci%C3%B3n,ser%20visualizados%20de%
20otra%20forma.

Técnicas de tinción. Fundamentos.(2007). http://www.bio-nica.info/Biblioteca/TincionBacterias.pdf