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Informe de Práctica

N° 09 UROCULTIVO: COLORACION GRAM,


PRUEBAS BIOQUIMICAS, ANTIBIOGRAMA

INTERPRETACIÓN DE ANALISIS
CLÍNICOS
…………………………
AUTORES

 Arriola, Gustavo
 Domínguez, José
 Martínez, Lizeth
 Rodriguez, Rudi
 Rosales, Yesami
 Sullca, Robinho

Docente: Mg. Neuman Mario Pineda Pérez

Carrera de Farmacia y Bioquímica


Lima – Perú
2023
PRÁCTICA N° 9

UROCULTIVO: COLORACION GRAM, PRUEBAS


BIOQUIMICAS, ANTIBIOGRAMA

1. Introducción

Es una prueba de laboratorio o examen que permite identificar la presencia de una


infección orinaría con la finalidad detectar la presencia de microorganismos
infecciosos, fundamentalmente bacterias y hongos a partir de una muestra de orina.

La coloración de Gram en las muestras de orina para Urocultivo permite evaluar el


tipo de bacteria, la presencia de píuria y determinar si hubo una adecuada
recolección de la muestra, El uso de este método deberá constituirse en
herramienta rutinaria como parámetro de orientación clínica, permitiendo una
ventaja costo-beneficio, al servir de tamizaje de muestras que cumplen la calidad
requerida para el estudio bacteriológico consecuente.

Las pruebas bioquímicas determinan las características metabólicas de las


bacterias, algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la
presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta
unas pocas horas, en algunas otras se precisa para su lectura el crecimiento del
microorganismo con una incubación previa de 18 a 48h; a este grupo pertenecen la
mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos de un
microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que
contienen el sustrato a metabolizar, cabe destacar que algunas de estas pruebas
pueden realizarse de forma rápida tras incubación de unas 2-6h

El antibiograma es el complemento ideal en la evaluación de la orina por medio de


cultivo, dado que permite conocer Tratamiento de la infección de orina según los
datos de sensibilidad antimicrobiana de un germen ante la exposición con un
antibiótico, haciendo uso de cajas de Petri, las cuales tienen impregnado un tipo de
antibiótico, se colocan unidades formadoras de colonias para evaluar cómo
reaccionan ante este, se deberá cultivar al menos por 18 horas para poder dar un
resultado confirmatorio, puesto que resultados preliminares entre 6-8 horas no
deben ser tomado en cuenta para elegir tratamiento.
2. Materiales y Reactivos:

 Materiales
Tubos de ensayo
Asa de Kole
Placas Petri
 Reactivos
1. Colorante Gram
Cristal violeta alcalino:
Sol. A: cristal violeta 1g. Agua destilada csp. 100 mL.
Sol. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 100mL.
Sol. De yodo 1g. Ioduro de potasio 2g. Agua destilada csp 200mL.
Sol. Decolorante: eter 1 vol. Acetona 3 vol.
Colorante de contraste: safranina 0.5g agua destilada csp 100 mL.
2. Medios de cultivo:
Agar Mac Conkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
3. Coloración de Ziehl-Nelsen (bacilos ácido-resistente)
4. Sol. A: fucsina básica 0.3g alcohol de 95º. 10ml.
5. Sol. B: fenol 5ml. Agua destilada csp. 95ml.
6. Mezclar las soluciones a y b
7. Sol. Alcohólica de ácido clorhídrico
8. Sol. De azul de metileno
3. Procedimientos.

A. TINCIÓN GRAM

1. Se coloca 1 gota de orina en el portaobjeto


2. Flamear hasta secar
3. Totalmente seco, se coloca cristal de violeta por
1 minuto, luego lavar
4. Se hecho iodo por 1 minuto y de igual manera se lava
5. Se coloca Alcohol-Acetona por 1 minuto y se lava
6. Por último, se hecha la Safranina, se lava y se deja secar

B. UROCULTIVO

1. Se preparará la muestra de orina del pacient e


y alistará el mechero.
2. El asa de siembra esterilizada, se mojará con la muestra de orina y se frotará e
n los 4 agares (EMB, MANITOL, AGAR SANGRE y MK)
3. La frotación deverá dejar un rastro estriado en la fase gelatinosa del agar.
4. Se procederá a envolver en papel craft para que la luz no afecte el resultado.
5. Se incubó x24hrs y se realiza la primera lectura; la segunda lectura será a las 4
8hrs. Reportamos los resultados.
4. Resultados
Para el Algar de Muller hinton, no se observó respuesta (resistencia,
ni presencia bacteriana), es decir, que el resultado fue limpio.
Para el Agar de sangre, si se observó en la primera incubación
ligera reacción, ya pasada las 48 horas, ya era notoria las estrías de
la orina, indicando así presencia de microorganismos gran positivos,
debido a su rápido crecimiento.
Siguiendo con el Agar EMB, no hubo presencia de los grandes
negativos, ni las estrías pronunciadas.
Por último, el Agar de manitol, tampoco se vio resultado alguno,
descartado presencia de Staphylococcus.
5. Conclusión

Se determinó en el laboratorio, la presencia de microorganismos gran


positivos, con el agar de sangre, indica presencia de algún hongo
(moho y levaduras).

Esta práctica nos sirvió para saber reconocer las bacterias o


microorganismos que pueden habitar o estar presentes en nuestra
orina.

6. Cuestionario.
1) ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la identificación de mi
croorganismos gram negativos?
Selectivos:
 Agar EMB: Aislamiento de bacilos gramnegativos,
principalmente de la familia Enterobacteriaceae, y otros
bacilos gramnegativos no exigentes.
 Agar MacConkey: Aislamiento exclusivo de bacilos
gramnegativos Pseudomonas sp. Escherichia coli,
Klebsiella sp y Enterobacter sp.

No selectivos:
 Agar tripticasa soya: Aislamiento de bacterias anearobias y aerobias, tales
como Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aerugiosa y
Enterococcus faecalis
 Agar sangre: Recuperación y crecimiento de una gran variedad de
microorganismos Gram positivas o Gram negativas, bacterias tanto de
rápido como de lento crecimiento.
 Agar mueller hinton: Identificación de bacterias aerobias de rápido
crecimiento o anaerobias facultativas, así como estafilococos, enterococos,
enterobacterias, pseudomonas, etc.
2) Desarrolle un mapa conceptual de un coprocultivo.

3) ¿Cómo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo?


 Se procede a extarer la sangre venosa y almacenarla en el frasco de hemoc
ultivo (el cambio de aguja no es necesario).
 Luego la muestra es llevada al laboratorio de análisis. Se coloca la muestra
en el medio de cultivo y se observa la proliferación bacteriana y de otros micr
oorganismos patógenos.
 En algunos casos es necesario la tinción Gram para diferenciar algunas esp
ecies bacterianas por medio de la coloración.

4) ¿Qué importancia tiene el antibiograma?


 El antibiograma es una prueba de sensibilidad microbiana antes algunos anti
bioticos y su imprtancia se centra en la determinación ideal del antibiotico a e
mplear en el tratamiento contra la infección.

5) ¿Qué importancia tienen los medios de enriquecimiento en un coproc


ultivo?
 Los medios enriquecidoss en un coprocultivo son medios de cultivos con nutr
ientes que facilitan los medios del crecimiento de microoorganismos y bacteri
as.
 Su importancia radica en el acceso a poder estudiar la flora bacteriana en pa
cientes asintomáticos.
7. Bibliografía.

1. Instrucciones de uso – medios en placa listos para usar. [Internet]. Becton


Dickinson [Consultado el 6 de noviembre de 2023]. Disponible en: https://
www.bd.com/resource.aspx?IDX=8774

2. Arrese S. El futuro de los antibiogramas [Internet]. Observatorio de Enfer


medades Infecciosas. 2019 [cited 2023 Nov 7]. Available from: https://obs
ervatorio.medicina.uc.cl/el-futuro-de-los-antibiogramas/

3. Vila J, Álvarez-Martínez MJ, Buesa J, Castillo J. Diagnóstico microbiológi


co de las infecciones gastrointestinales. Enferm Infecc Microbiol Clin [Inte
rnet]. 2009 [cited 2023 Nov 7];27(7):406–11. Available from: https://www.e
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rticulo-diagnostico-microbiologico-infecciones-gastrointestinales-S021300
5X09001621
8. Anexos. (CAMBIAR)

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