Equipo 1

Integrantes:
• Martínez Zambrano Miriam
¿SE PUEDE DETERMINAR LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA POR LA CANTIDAD DE OXÍGENO
• Mitznahuatl Cuautle Jocelyn
• Rivera Mota Alejandra
Sección: Miércoles 12:00 – 14:00 NRC: 14499
LIBERADO?
Docente: M. C. García Albarrán Leticia Georgina

INTRODUCCIÓN DISCUSIÓN DE RESULTADOS

ENZIMA
• En el tubo número uno se puedo observar que el tejido al interaccionar con el peróxido de hidrogeno, se produce un burbujeo, esto se debe a que el
Las reacciones químicas que se producen en las células tendrían lugar a velocidades extremadamente lentas en ausencia de ayuda. Sin embargo, las enzimas, aceleran estas reacciones
millones de veces. Estas enzimas son catalizadores biológicos. Sin ellas, los humanos y otros organismos vivos no podrían sobrevivir. La función de una enzima, básicamente, es peróxido toma la posición de sustrato, al interaccionar con la enzima, la reacción se da de manera natural. La enzima catalasa interactúa con la molécula
incrementar la velocidad de una reacción. de peróxido de hidrogeno, un átomo de oxígeno del peróxido de hidrogeno se une a un átomo de hierro de la porfirina en la catalasa, oxidando el hierro en
COMPETENCIA. (Fe IV) produciendo así una molécula de agua. En el segundo paso el compuesto se reduce a través de reacciones redox mediante una transferencia de
• Las enzimas son proteínas globulares Evalúa la actividad de la enzima catalasa de diferentes fuentes
• Presentan residuos estructurales dos electrones desde el que dona electrones, en este caso la segunda molécula de peróxido de hidrogeno, para así producir la enzima libre, oxígeno y
• Tienen un lugar donde interaccionan con el sustrato (reactivo) denominado sitio activo. biológicas, comparando el efecto de la temperatura y de algunos
CARACTERÍSTICAS DE LAS ENZIMAS: agua que representaría al producto formado.
• En el sitio activo se encuentran los residuos catalíticos. inhibidores como el Pb y el 𝐶𝑁 −.
1ª.-Son proteínas.
• Para el tubo número dos, en la manzana tanto como la papa se puede observar cómo no existe un burbujeo esto se debe a que el tejido fue expuesto a
una temperatura mayor a 60 ℃, lo que provoco la desnaturalización de la proteína los puentes de hidrogeno se debilitan, por ende, la enzima pierde su
2ª.-Son los catalizadores más eficientes que se conocen. La mayor parte de las reacciones celulares ocurren a una velocidad alrededor de un millón de veces más alta de lo que serían en MATERIALES Y REACTIVOS estructura terciaria, su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no existe una función al estar en contacto con el sustrato. En el caso del tejido de hígado
ausencia de enzimas. Material se presentó un pequeño burbujeo casi inexistente, esto se debe a que al calentarlo no toda la enzima catalasa fue desnaturaliza, por ello la pequeña
3ª.-La mayoría de las enzimas se distinguen por su especificidad, lo que significa que cada conversión de un reactivo (llamado sustrato) en un producto es catalizada por una enzima • 12 tubos de ensaye cantidad de la enzima que aún quedaba al interaccionar con el sustrato la reacción se dio de manera directa, produciendo un burbujeó.
determinada. • 1 gradilla • Para el caso de los tubos 3, 4 al agregar 𝑃𝑏(𝑁𝑂3 )2 Y, NaCN, estos reactivos sirven como inhibidores irreversibles. El nitrato de plomo se une con la
4ª.-Las acciones de muchas enzimas están reguladas de modo que pueden cambiar de un estado de baja actividad a uno de alta actividad, dependiendo de las condiciones celulares en • Baño maría 100°C enzima catalasa a través de los grupos sulfhídrico-libres de las cisteínas. El cianuro se une mediante enlaces covalentes con los Fe (III) de las porfirinas
las que se encuentren • 1 piseta de la enzima, lo que indica que, al agregar los reactivos estos en función de inhibidores, uniéndose al sitio activo, por ello cuando el sustrato (peróxido)
• 1 pipeta de 5mL entra en interacción con el tejido no existe reacción. En el caso de nuestras muestras, se presentó un burbujeo muy leve, esto es debido a que al agregar
CLASIFICACIÓN GENERAL DE LAS ENZIMAS: SITIO ACTIVO: • 2 pinzas para tubos de ensaye el inhibidor la cantidad es parcial, lo que indica que la concentración del inhibidor es menor que la enzima, por ello es por lo que la pequeña cantidad que
La clasificación internacional de las enzimas ha clasificado a las Es la agrupación ordenada espacialmente pero estructuralmente asimétrica de un pequeño número de • 1 pinzas pequeñas se encuentra de enzima aun interacciona con el sustrato, generando burbujas.
enzimas en 6 clases que son: residuos aminoacídicos responsables de la actividad catalítica de la enzima. El sitio activo recibe también el • Papel absorbente
nombre de Sitio Catalítico o Centro Activo. • Cuchillo
Reactivos
CONCLUSIÓN
• Es una porción relativamente pequeña en el volumen total de la enzima. Una vez terminada la practica podemos confirmar que sí se puede determinar la actividad de la enzima catalasa a través de la observación de oxígeno
• Es una hendidura u “hoyo” que se forman al plegarse la proteína. • Cianuro de sodio al 5%
liberado, el cual se logró observar en cómo actúa la enzima catalasa en presencia del peróxido, además también como actúa en presencia de los inhibidores
• Loa aminoácidos que lo forman están alejados en la secuencia lineal. • Nitrato de plomo al 5%
Plomo y Cianuro.
• Los aminoácidos que lo forman son polares con y sin carga. El alumno deberá traer:
𝐻2 𝑂2
COENZIMA:
Uniones no covalentes a la enzima. Papa
Son cofactores orgánicos no proteicos, termoestables, que unidos a una apoenzima constituyen la Hígado de pollo PROCEDIMIENTO
holoenzima o forma catalíticamente activa de la enzima. Manzana
Tienen en general baja masa molecular (al menos comparada con la apoenzima) y son claves en el
mecanismo de catálisis, por ejemplo, aceptando o donando electrones o grupos funcionales, que transportan
COFACTOR:
de un enzima a otro.
Los iones metálicos reciben el nombre de cofactores. Sus características es que son enzimas específicas. Son componentes no proteicos, termoestables y de bajo peso molecular. Se une
a una estructura proteica denominada apoenzima y a este complejo se la denomina holoenzima. HOJAS DE SEGURIDAD
• Estabilizan la conformación activa de la enzima.
• Sirven como puentes de unión entre el sitio activo y el sustrato,
• Son los responsables directos de la catálisis.
• Entre los cofactores se encuentran (Fe +2, Cu+2, Zn2+, K+, Mn+2, Mg+2).
FACTORES QUE AFECTAN A LAS PROTEÍNAS:
• Temperatura: La mayoría de las proteínas a temperaturas mayores de 45 ℃–60 ℃ sufren desnaturalización debido a la ruptura de puentes de hidrógeno y fuerzas de Van Der Waals.
Algunas proteínas recobran su conformación al bajar lentamente la temperatura, a esto se le llama renaturalización.
• pH: La mayoría de las proteínas sufren desnaturalización a valores de pH menores de 6 y mayores a 8 debido al cambio de carga en los radicales de los residuos aminoacídicos, lo que
ocasiona la ruptura de puentes de hidrógeno debida a radicales y enlaces iónicos.
• b-Mercaptoetanol: Agente que reduce los puentes disulfuro lo que ocasiona que se rompan y por lo tanto se desnaturaliza la proteína.
• Detergentes: Por tratarse de agentes tensoactivos disminuyen el efecto hidrofóbico lo que ocasiona la desnaturalización de la proteína.
• Agitación vigorosa: La agitación conlleva el aumento de la energía cinética de la molécula lo que ocasiona la ruptura de Fuerzas de Van Der Waals y puentes de hidrógeno.
• Cloruro de Guanidina (4 ó 6 M) o Urea (6 u 8 M) Son agentes que rompen puentes de hidrógeno propios de la molécula, intercalándose entre ellos.
DESNATURALIZACÓN:
La pérdida de la conformación nativa implica cambios en los niveles estructurales caracterizados por la presencia de enlaces no covalentes, es decir, el secundario, terciario y cuaternario.
DESNATURALIZACIÓN PROTEICA:
Proceso o serie de procesos en el que se altera la disposición la espacial de las cadenas polipeptídicas dentro de la molécula, transformándose la estructura típica de la proteína nativa en
otra más desordenada.
INHIBICIÓN ENZIÁTICA:
Es el efecto que hace disminuir o perder la actividad enzimática a través de interacciones con el centro activo u otros centros específicos. RESULTADOS
TIPOS DE INHIBICIÓN Y SUS CARACTERISTICAS • Hígado de pollo
• La inhibición enzimática se clasifica en reversible e irreversible:
• IRREVERSIBLES: Modifican químicamente a la enzima, ya que forman enlaces covalentes con un grupo funcional del sitio activo, como consecuencia pierde la actividad catalítica.
• REVERSIBLES: Establece un equilibrio con la enzima libre, con el complejo enzima-sustrato, estos inhibidores se unen en forma no covalente. De este concepto se clasifica en:

• Papa
Imagen 1. Tubos que contienen Imagen 2. Tubos que contienen
hígado de pollo. papa.

• Manzana

• El efecto de un inhibidor competitivo sobre la actividad puede invertirse aumentando la concentración del sustrato. A [S] elevadas, Imagen 3. Tubos que contienen
todos los sitios activos están llenos de sustrato y la velocidad de reacción alcanza el valor que se observa sin inhibidor.
manzana.
• La adición de más sustrato a la reacción da lugar a un aumento del grado de inhibición. A [S] elevadas, todos los sitios activos están
llenos de sustrato y consecuentemente el inhibidor tiene más complejos a los que puede unirse.
• La adición de más sustrato a la reacción da lugar a un aumento de la velocidad de reacción, pero no hasta el grado que se observa
en las reacciones sin inhibir. La inhibición acompetitiva suele observarse en las reacciones en las que las enzimas unen más de un
sustrato o en las que requiere un cofactor ya que el inhibidor suele unirse a él CUESTIONARIO
• ¿Qué tipo de inhibidores son el plomo y el cianuro?
Características y su estructura química de la enzima catalasa
Pertenece a las oxidorreductasas, que son enzimas capaces de transferir átomos de El plomo es inhibidor irreversible, ya que la unión del plomo 1. ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?
hidrogeno, oxigeno o electrones entre dos moléculas a la catalasa se da en los grupos sulfhídrico-libres de las A bajas temperaturas la actividad enzimática es muy poca, por lo tanto, al aumentar la temperatura la actividad enzimática aumenta. Pero a temperaturas
Su estructura está conformada por cuatro dominios compuestos por estructuras cisteínas que contiene la enzima, de forma covalente, por lo mayores de 60 ℃ las enzimas presentan una desnaturalización, la estructura terciaria se pierde junto con sus enlaces y por consecuencia no existe una
secundarias formadas por hélices alfa y láminas β-plegadas, y estudios realizados en la que su inhibición sobre la enzima es irreversible. Cuando se actividad enzimática.
enzima del hígado de humanos y bovinos han demostrado que estas proteínas están logra la sustitución, la enzima queda desactivada, pues el La elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reacción catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reacción aumenta cuando la
unidas a cuatro moléculas de NADPH. En esas 4 subunidades que poseen, el grupo plomo (ahora en la enzima) no tiene la cantidad de orbitales temperatura se eleva debido al incremento de la energía cinética de la energía de las moléculas reactantes.
hemo contiene un átomo de hierro y un anillo de porfirina (tetrapirrol) que forman el sitio
vacíos para cumplir con la misma función del hierro.
activo de la enzima. Las cuatro subunidades, se encargan de la formación de un largo 2. ¿Qué es el factor Q-10?
canal cuyo tamaño es crítico para el mecanismo de reconocimiento del peróxido de El cianuro es un inhibidor irreversible que se une mediante Describe el efecto de la temperatura sobre las reacciones enzimáticas y es el factor por el cual la velocidad de la reacción se incrementa al elevar la
hidrógeno por parte de la enzima (que emplea aminoácidos como histidina, asparagina, enlaces covalentes con los Fe (III) de las porfirinas de la temperatura 10°C. Se relaciona con la ecuación:
glutamina y ácido aspártico para ello). enzima, y por ende inactiva a la enzima. 10
𝑅2 𝑇2 −𝑇1
𝑄10 =
FUNDAMENTOS REFERENCIAS 𝑅1
1. Reacción que cataliza a la enzima catalasa. Donde:
Varela. (2021). ¿Por qué paran las reacciones? Diseñar experimentos
La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno (𝐻2 𝑂2 ) hacia oxígeno y agua. Esta enzima utiliza o R es la tasa de reacción al incrementar la temperatura
como cofactor un grupo porfirínico de hierro. En la reacción de la catalasa ocurre la transferencia de dos electrones entre dos moléculas de peróxido de hidrógeno en la cual una funciona para indagar la interacción enzima-sustrato. Educación
como donador y otra como aceptor de electrones. Aunque esta reacción ocurre espontáneamente, las enzimas incrementan la velocidad de reacción de forma considerable. La catalasa Química, 32(2), 74–87. o T es la temperatura
descompone dos moléculas de peróxido de hidrogeno en una molécula de oxígeno y dos moléculas de agua, esto sucede en dos pasos. El primer paso implica que la enzima interactúe con http://www.revistas.unam.mx/index.php/req/article/view/75875/698 El valor del coeficiente de temperatura Q10, para reacciones enzimáticas por lo general fluctúa entre 1 y 2.
la molécula de peróxido de hidrogeno, un átomo de oxígeno del peróxido de hidrogeno se une a un átomo de hierro de la porfirina en la catalasa, oxidando el hierro en (Fe IV) produciendo 87
así una molécula de agua.
3. Escribir el complejo que se forma con el Fe y el 𝑪𝑵− .
En el segundo paso el compuesto se reduce a través de reacciones redox mediante una transferencia de dos electrones desde el que dona electrones, en este caso la segunda molécula Experimento 3 Ciencias con lo mejor de Vernier Acción Enzimática: El ion férrico Fe 3+ también forma
de peróxido de hidrogeno, para así producir la enzima libre, oxígeno y agua que representaría al producto formado. Actividad de la Catalasa. (n.d.). un complejo con seis iones cianuro,
2. Efecto de la temperatura sobre la enzima catalasa con rasgos de temperatura. https://www.vernier.com/files/sample_labs/CMV-03-enigma.pdf el complejo octaédrico formado se
El ion ferroso 2+ forma un complejo con
Todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalización frente al calor. La desnaturalización de la proteína se realiza cuando es expuesta a llama ferrocianuro, la única
seis iones cianuro (CN) y es un complejo
temperaturas mayores que 60° C. Esto quiere decir que cuando la temperatura es muy elevada, hacia el punto óptimo, los puentes de hidrogeno se debilitan. La enzima pierde su Rondón, E, Pacheco Delahaye, E, & Ortega, F. (2004). Estimación diferencia es que el complejo de
octaédrico que se llama ferrocianuro.
estructura terciaria, por lo tanto, su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no puede cumplir su función. de la vida útil de un análogo comercial de mayonesa utilizando el hierro II posee un electrón más que
3. ¿Qué tipo de inhibidores son el cianuro y el plomo y a que parte de la enzima catalasa se unen?
factor de aceleración Q10. Revista de la Facultad de el complejo de hierro III
Agronomía, 21(1), 68-83. Recuperado en 12 de octubre de 2022, de
El plomo y el cianuro sí actúan como inhibidores de la catalasa, reducen su actividad enzimática relacionándose con el grupo HEMO en el caso del cianuro y con los SH en el caso del http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0378-
plomo. a) CN Ya que el cianuro se une por enlaces covalentes al grupo funcional de la enzima, se considera un inhibidor irreversible. El plomo es inhibidor irreversible, ya que la unión del 78182004000100007&lng=es&tlng=es.
plomo a la catalasa se da en los grupos sulfhídrico-libres de las cisteínas que contiene la enzima, de forma covalente, por lo que su inhibición sobre la enzima es irreversible. Cuando se
logra la sustitución, la enzima queda desactivada, pues el plomo (ahora en la enzima) no tiene la cantidad de orbitales vacíos para cumplir con la misma función del hierro. El cianuro es un
inhibidor irreversible que se une mediante enlaces covalentes con los Fe (III) de las porfirinas de la enzima, y por ende inactiva a la enzima.