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MÓDULO:
“TÉCNICAS EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA"

Expositor:
Mblgo. Arturo Alvarado Aldana; Mg
• Idea de que las enfermedades eran causadas por un organismo

• El microscopio
– Anton van Leeuwenhoek

• uis Pasteur
– Teoría vitalista, pasteurización

HISTORIA Robert Koch

M. tuberculosis
• Joseph Lister

• Paul Ehrlich

• A. Fleming

• Watson y Crick

HISTORIA
 Microbiología clínica
• Microbiología, estudio de los organismos microscópicos, morfología, metabolismo,
su utilidad, y daño que causan a la salud, tanto del ser humano, animales y
vegetales. Asimismo su uso en la industria: Alimentaria, farmacéutica.

• Organismos microscópicos, como causantes de infecciones en el hombre.

• Quienes son los microrganismos??

– Bacterias: Bacteriología
– Virus: Virología
– Hongos: Micología

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 Microbiología Clínica
• Bacterias: Bacteriología
– Organismos microscópicos, procariotas, con diversas morfologías: Cocos, bacilos,
espirilos. Poseen pared celular formada por peptidoglicano.

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 Microbiología Clínica
• Hongos: Micología
– Organismos eucariotas, pueden ser filamentosos y pluricelulares; o pueden ser
levaduriformes y unicelulares. Poseen pared celular formada en su mayoría por
polisacáridos complejos. Conjunto de hifas forma el micelio.

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 Microbiología Clínica
• Virus: Virología
– Complejos moleculares, microscópicos, formados por proteínas y ácidos
nucleicos, parásitos obligados.

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Estudio de los microorganismos

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 ETAPAS DEL ANÁLISIS
• Pre analítica
– Indicaciones al paciente
– Toma de antibióticos
– Toma, conservación, transporte de muestra

• Analítica
– Procesamiento adecuado, protocolizado.

• Post analítica
– Resultados: Congruentes, oportunos.
24/08/2022 22:23 AAA 10
 RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA

1. Indicar al paciente que realice un aseo previo de la zona genital externa.

2. Luego del chorro inicial de la micción indicar al paciente que deposite cierta cantidad de orina en el frasco recolector.
3. El paciente debe cerrar inmediatamente el frasco y limpiar la zona externa del mismo.
4. Llevar el frasco de inmediato al laboratorio con previo rotulado de los datos del paciente.
ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS
DX MICROBIOLÓGICO
Secreciones
Esputo, hisopados
MUESTRA
Orina, Heces*, otros
Ex. Directo:
Coloración Gram
Medio de cultivo para Gram positivos y/o
AISLAMIENTO Gram negativos: Agar Sangre, Agar Mac
Colnkey, SS, Agar Chocolate,…..

Pruebas bioquímicas: TSI, LIA, SIM,

IDENTIFICACIÓN
Citrato Simmons, Catalasa,
Coagulasa, Hemólisis, Morfología de
la colonia,……

Antibiograma (Kirby - Bauer, CMI,

PRUEBA DE Pruebas Automatizadas, etc
SUSCEPTIBILIDAD
 Estudio de los microorganismos

• Exámenes directos
– En fresco • Pruebas de sensibilidad
– Coloraciones – Manuales: Mét. Kirby Bauer (Disco
de difusión)
• Cultivos – Automatizadas: Dilución (CMI)
– Cultivos de Gram positivos
– Cultivos de Gram negativos
– Hemocultivos
– Investigación de hongos: KOH y
cultivos
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 Estudio de los microorganismos
• Exámenes directos
– En fresco
• Con SSF: Entre lámina y laminilla, secreción vaginal,
sed. Urinario.

• Con KOH 20%: Secreciones, raspados

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 Estudio de los microorganismos
– Coloraciones
• Coloraciones simples: Utiliza un solo colorante: Azul de
metileno, safranina, otro.
. Permite observar morfología y disposición de los microorganismos.

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 Estudio de los microorganismos
• Coloraciones simples:

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 Estudio de los microorganismos
– Coloraciones
• Coloraciones complejas: Utiliza más de un colorante.
• Permiten observar morfología, disposición de los microorganismos,
estructuras internas y diferenciación según sus propiedades y/o
características.

• Pasos:
– Extendido
– Fijación
– Coloración
– Secado y observación

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 Estudio de los microorganismos
– Coloración Gram:
» Cristal violeta
» Lugol
» Alcohol acetona
(alcohol 90%)
» Safranina

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 GRAM POSITIVA GRAM NEGATIVA

• Pared simple; alta cantidad de peptidoglucano • Pared compleja; bajos niveles de peptidoglucano
• Color violeta • Coloración roja
• La pared celular está entre dos capas de membrana.
ESTRUCTURA DE GRAM + Y GRAM -
 FIJACIÓN

MORDIENTE:
LUGOL

ALCOHOL
ACETONA
 Estudio de los microorganismos

Col. Ziehl Neelsen

- Fucsina fenicada
- Alcohol ácido
- Azul de metileno

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Col. Ziehl Neelsen

https://www.youtube.com/watch?v=H3APlERaTtg
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 REPORTE DE RESULTADOS
BACILOSCOPIAS

Paucibacilar

MANUAL PARA EL DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO DE LA TUBERCULOSIS. PARTE 1: MANUAL DE ACTUALIZACIÓN DE LA BACILOSCOPÍA/

Programa “Fortalecimiento de la Red de Laboratorios de Tuberculosis en la Región de las Américas” -- Lima: ORAS - CONHU; 2018.
• Un medio de cultivo es
una solución equilibrada de
todos los nutrientes y
factores de crecimiento
necesarios para el
desarrollo y la
multiplicación de los
microorganismos en el
laboratorio.
Condiciones que debe reunir un
medio de cultivo
• Contener nutrientes adecuados
• Poseer humedad suficiente (agua)
• Tener un pH ajustado
• Estar estéril inicialmente
 Constituyentes habituales de un medio de cultivo

• Agua
• Sistemas
• Extractos
amortiguadores
• Peptona (Proteínas,
• Indicadores de pH
aminoácidos)
• Agentes reductores
• Carbohidratos
• Agentes selectivos
• Cloruro de sodio
• Agar agar
• Líquidos corporales
 Clasificación de los medios de
cultivo
• POR SU ESTADO FÍSICO:
– Líquidos= Caldos, Broth
– Sólidos = Agares (1.2 – 2.0 %)
– Semisólidos = (0.3 – 0.5%)
• POR SU ORIGEN:
– Medios naturales
– Medios sintéticos o artificiales
– Medios semisintéticos o complejos
 Clasificación de los medios de
cultivo
• POR SU UTILIDAD:
– Medios generales o comunes: Agar nutritivo, TSA, …
– Medios enriquecidos: Agar sangre; Agar chocolate
– Medios selectivos: Agar Mac Conkey, Agar Manitol salado
– Medios diferenciales: (Rojo de fenol) Acidez = Amarillo / Alcalinidad = rojo
/ TSI
– Medios de transporte: Cary Blair / VMT
– Especiales: Animales de experimentación, huevos embrionados, cultivos
 PREPARACIÓN
DE UN MEDIO DE CULTIVO:

50 g para 1 litro

200 mL
MEDIO DE AISLAMIENTO DE
SELECTIVIDAD MEDIA

AGAR MAC CONKEY

Selectivo, diferencial
INH: cristal violeta, sales biliares
IND pH: Rojo neutro CHO: Lactosa Peptonas
LAC (+)

LAC (-)
 Investigación en Microbiología
• Cultivos
– Cultivos de Gram positivos
– Cultivos de Gram negativos
– Hemocultivos

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 COCOS GRAM POSITIVOS
GÉNEROS DE IMPORTANCIA CLÍNICA

GÉNERO GÉNERO GÉNERO

STAPHYLOCOCCUS STREPTOCOCCUS ENTEROCOCCUS

Clasificación de Lancefield:
Grupo A
Grupo B
Grupo C
1984
Grupo D
Estudios
ADN

No tipificables
ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS
DX MICROBIOLÓGICO
Secreciones
Esputo, hisopados
MUESTRA
Orina, Heces*, otros
Ex. Directo:
Coloración Gram
Medio de cultivo para Gram positivos:
AISLAMIENTO Agar Sangre, Agar Manitol Salado, Agar
Mac Colnkey.

Pruebas de identificación: Catalasa,

IDENTIFICACIÓN
Coagulasa, Hemólisis, Morfología de
la colonia,……

Antibiograma (Kirby - Bauer, CMI,

PRUEBA DE Pruebas Automatizadas, etc
SUSCEPTIBILIDAD
 PROCEDIMIENTO: PRUEBA DE
1. Separar plasma PATOGENICIDAD
sanguíneo (COAGULASA)
2. Diluir 1:5
3. Verter en tubos de
ensayo 0.5 mL
4. Suspender colonia de
germen a investigar.
5. Incubar
6. Observar a la hora, 4
horas y 24 horas,
positivo formación de
coagulo

Plasma: sobrenadante luego

centrifugar sangre extraída
con anticoagulante
El plasma permanece completamente líquido luego de
la incubación, PRUEBA DE LA COAGULASA
NEGATIVA.
El plasma se coaguló luego de la incubación,
PRUEBA DE LA COAGULASA POSITIVA.
 PRUEBAS BIOQUÍMICA PARA COCOS GRAM POSITIVOS:
COCOS GRAM POSITIVOS

CATALASA REDUCCIÓN DE NITRATOS

POSITIVAS
NEGATIVAS

• S. aureus
Streptococcus
• S. epidermidis
?
• S. saprophyticus

COAGULASA
SENSIBILIDAD A LA
POSITIVA NEGATIVA NOVOBIOCINA

Staphylococcus S. epidermidis
aureus ?
S. saprophyticus SENSIBLE RESISTENTE

> 16 mm < 16 mm

S. epidermidis S. saprophyticus
CARACTERISTICAS DEL GÉNERO
• Cocos Gram positivos dispuestos en
cadenas o en pares

• Catalasa negativo

• No poseen cápsula : Excepto los Streptococcus

pneumoniae
• No son esporulados
• Producen diferentes patrones de
hemólisis:
ALFA
• Aerobios facultativos BETA

GAMM
• Muy exigentes en cuanto a requerimientos A
nutritivos

• Fermentan azucares sin producir

gas

- +
CLASIFICACIÓN SEGÚN EL TIPO DE HEMÓLISIS

Enterococcus sp
( algunas cepas) Enterococcus sp
( algunas cepas)
Streptococcus
pneumoniae

Streptococcus
viridans

Streptococcus
Grupo D no Enterococcus agalactiae
(Streptococcus bovis)
Streptococcus
pyogenes
Enterococcus sp.
DISTINTOS TIPOS DE HEMÓLIS, generados por
especies distintas de Streptococcus
Colonia de Streptococcus b Hemolítico

Halo de
hemólisis

Nótese la colonia traslúcida

a Hemólisis
Streptococcus agalactie
COCOS GRAM POSITIVOS EN
CADENA
CULTIVO EN AGAR SANGRE:
Agar sangre en 10% Co2:

Streptococcus

ALFA GAMMA BETA

Enterococcus sp S. pyogenes
S. pneumoniae (Grupo-D)
Sensible a Optoquina (Grupo-A)
Crece en NaCl 6,5% Sensible a Bacitracina
Grupo Viridans Grupo-D S. agalactiae
Reacciones bioquímicas No Enterococcus (Grupo-B)
No crece en NaCl 6,5% Prueba Camp positiva
Enterococcus sp Enterococcus sp
(Grupo-D) Grupo Viridans (Grupo-D)
Crece en NaCl 6,5% Reacciones bioquímicas Crece en NaCl 6,5%
MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN

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