Examen de líquido

seminal

DC. Violeta Aburto Luna

Laboratorio de Histología
Facultad de Ciencias Químicas
BUAP
Objetivo

Que el alumno aprenda a manejar las variables que

nos pueden dar información acerca de la
“capacidad fecundante” de un líquido seminal.
Semen

Es el producto de secreción de las

glándulas accesorias del aparato
reproductor masculino y los
espermatozoides.
Los órganos sexuales internos masculinos consisten de:
Los testículos que producen hormonas y la espermatogénesis
Un sistema de ductos que transporta y almacena la esperma,
Ciertos órganos accesorios cuyas secreciones se convierten en la parte del semen eyaculado.
Conductos seminíferos

En ellos se desarrolla la espermatogénesis.

Al examinar un corte transversal de conductos seminiferos, se observa, hacia la periferia, una

capa de espermatogonios , al ir progresando hacia el lumen, se ven capas sucesivas de células
diferenciadas, hasta llegar a los espermas
Los tubos seminíferos permanecen sólidos hasta la pubertad, cuando se canalizan, sus
paredes la forman dos tipos de células:

Células de Sertoli, derivadas del epitelio de superficie del testículo.

.
The temporal course of
spermatogenesis
Spermatogonia
population is
maintained División homónima
Epidídimo
Lleva espermatozoides de los
testículos a los vasos deferentes
Mide 3.8 cm de longitud
Dividido en:
 Cabeza
 Cuerpo
 Cola
Secreción:
 Alfa glucosidasa
 Carnitina

Función: Maduración de los

espermatozoides.
Tránsito: 10 – 14 días
Almacenamiento: 1 mes
PRÓSTATA
Debajo de la vejiga urinaria.
Produce una secreción opaca
blanquecina.
Secreción ácida
pH ácido (pH: 6.2-6.8)
30% del volumen total.
Secreciones:
 Espermina
 Zinc (estabilidad de la
cromatina)
 Acido cítrico
 Fosfatasa Acida
Función:
 Licuefacción o mucolisis
 Movilidad espermática
 VESICULAS SEMINALES
Vejiga y recto, detrás de la
próstata.
Secreción opalescente viscosa
ligeramente amarillenta
60% del volumen total
Textura del plasma seminal.
Grado de viscosidad.
ph alcalino
Secreciones
 Fructosa
 Prostaglandinas
 Bicarbonato

Función
 Producción de ATP
 Motilidad y viabilidad
Glándulas de Cowper (glándulas bulbouretrales)

Dos órganos debajo de la

próstata
• Secreción alcalina
• Función:
- Limpia y lubrica la uretra,
preparándola para
la eyaculación.
- Lubrica la mucosa uretral
Glándulas sexuales accesorias

Vesículas seminales (60%)

Próstata (30%)

Glándulas bulbouretrales (Cowper) (10%)

 EYACULACIÓN

Ocurre de manera secuencial y sincronizada.

La forma prostática predomina en las primeras gotas

La secreción de vesícula seminales en las restantes.

El semen al momento del eyaculado coagula

¿Que es Liquido Seminal ?

Espermatozoides
 Suspendidos en secreciones:
 Testículo
 y el epidídimo

Se junta con secreciones:

 Próstata,
 vesículas seminal
 y las glándulas bulbouretrales

Dando lugar a un líquido viscoso

Gran variabilidad biológica:
 2 muestras de semen que difieran entre 1 y 3 semanas.
 Si los resultados discrepan seria necesario una 3º muestra

Por ser un fluido biológico (sangre, LCR), debe

ser tratado con precaución en el laboratorio,
para evitar posibles contaminaciones (VIH,
Hepatitis..)
Los parámetros analizados en el semen reflejan :

 La función exocrina de las glándulas sexuales masculinas

 Nos orientan sobre patologías del sistema genital.

Al sufrir una transformación desde el momento de

la eyaculación, para su estudio correcto:

 Debemos tratar la muestra con unas condiciones adecuadas

 Y estandarizadas para evitar sesgos artificiales.
Obtención de la muestra
Por masturbación el mismo día del examen
Frasco de vidrio o de plástico atemperado 20- 40 ºC, de boca amplia
Sólo una eyaculación
Se recomienda: abstinencia de 3-7 días.
 Maximizar la calidad de la muestra.
 Y reducir la variabilidad
Lo ideal: recoger la muestra en un cuarto cerca del laboratorio.
 Evitar choque térmico (20 - 40 ºC).
 Entregarlo lo antes posible (1h).
Hacer hincapié:
 Evitar la perdida.
 Lavarse bien las manos y genitales antes.
 No utilizar preservativo ni el coitus interruptus.
 Usar frascos estériles
Formulario para el paciente
Nombre y edad.

Periodo de abstinencia.

Fecha y hora de recolección.

Si toma medicamentos:
 Deberá hacerse hincapié en que informen de si toman fármacos, enfermedades
concomitantes (fiebre), ejercicio físico intenso y situaciones de estrés.
 Si fuma o si tiene hábitos tóxicos y tiempo de abstinencia
 Espermiograma , Espermatobioscopia
La OMS divide el estudio del semen

Examen básico

Examen macroscópico: Examen microscópico:

Concentración de
Licuefacción espermas y otras células
Aspecto Motilidad

Volumen Vitalidad
Morfología espermática.
Viscosidad
Presencia de
pH. aglutinaciones
Detección de anticuerpos
antiespermatozoide
unidos a la superficie del
esperma
Opcional
Avanzados
Opcional Avanzados
Índice de teratospermia Test de función espermática
(aumento de espermas
anormales)
Test de la zona pelúcida
Test hipoosmótico. (integridad
de la membrana)
Evaluación de la reacción
acrosómica
Cultivos seminales.

Análisis automático de la
Análisis bioquímico de Líquido
Seminal. morfología espermática

Análisis automático de la
movilidad espermática.
 Descripción macroscópica
Características físicas
Licuefacción:
Se licua a temperatura ambiente (15-60 min)

Al recibirla: incubar a 37ºC durante 20-25 min.(1h)

Y agitar (no vortex)

Determinamos si esta licuado

 Descripción macroscópica
Características físicas
Aspecto

Observaremos después de la licuefacción.

Relacionado con la motilidad

 Liquido o grumoso.

Relacionado con la concentración.

 Perlado
 Cremoso
 Blanquecino
 Translucido
 Amarillento
 Marrón.

Olor: presencia de ac. Cítrico y ac. Ascórbico

hipoclorito de sodio
 Descripción macroscópica
Características físicas
Volumen:
Para medirlo:
Tubo graduado de 15 ml, cónico,
tipo Falcon, con tapa
hermética
Volumen referencia: > 2ml
V < 2ml: hipospermia u
oligospermia.
Cuando existe orgasmo y no
eyaculación tras la masturbación
nos encontramos ante una
aspermia (ausencia de
eyaculado)
Aspermia sospecharemos de una
eyaculación retrógrada.
Viscosidad
Diferenciarlo de licuefacción
Tomaremos una pipeta Pasteur
con semen y dejaremos
caer su contenido
Valor de referencia: gotas,
o se forme un filamento <
2cm.
Si fuera mayor, anotaremos
viscosidad anormal.
Y lo trataremos: añadiendo
medio tampón
 Características físicas

Turbidez pH
Utilizando tiras reactivas de
Tiene poco significado rango 6.4-8.0
Leucocitosis en procesos
inflamatorios 1 gota de semen en la tira y 30
segundos
Comparamos color con la escala
de colores
Valor de referencia: pH
 pH: ác. Infección
 pH: <7.2 + azoospermia,
 sugiere obstrucción de conductos
 eyaculadores o agenesia bilateral de
deferentes.
Análisis microscópico
Motilidad:

La motilidad de los espermatozoides se valora depositando una gota de la

muestra seminal sobre un porta-objetos atemperado en una placa térmica

Sobre la gota se sitúa un cubreobjetos y se visualiza la muestra en un

microscopio con el diafragma muy cerrado
 Análisis microscópico

Motilidad:

El porcentaje de motilidad del

espermatozoide y la calidad del
movimiento (adelante y en forma
progresiva)

Observando varios campos con el

objetivo seco, 200 espermatozoides

Grado a: Móviles rápidos con movilidad

rectilínea o lentos o perezosos y muy
no rectilíneo.
Grado b: no hay desplazamiento, si
hay movilidad flagelar
Grado c: Espermatozoide esta inmóvil
Valor de referencia (60 minutos):
50% de los espermatozoides con
movimiento tipo a + b.
Ó >25 % con movilidad tipo a.
< 50% Astenozoospermia
Motilidad espermática

En el momento de la valoración,
pueden surgir inconvenientes:

Las colas sueltas no se cuentan.

De todos modos, lo conveniente es que
los miembros del equipo que se van a
dedicar al montaje, se entrenen a
Puede a ver aglutinaciones.
través de videos para poder realizar
un control de calidad.
La muestra este muy concentrada.

En muestras muy viscosas pueden

producirse falsas
astenozoospermias…
Aglutinación
Aglutinaciones de los
espermatozoides.
Cabezas, colas cabeza - cola
Adherencia de los espermatozoides
inmóviles o móviles
Filamentos de moco
Células o detritos
Fibras mucosas No aglutinación (-), pequeñas aglutinaciones pueden ser
normales (< 10%)
Agregación inespecífica
Totalidad (+++)
Se valora a la vez que la movilidad La presencia de aglutinaciones:

Se anota en el seminogramas con una  Sugiere presencia de anticuerpos

escala semicuantitativa:  Causa inmunológica de infertilidad, infección,

 Aparece con más frecuencia en eyaculados hiperconcentrados.
Vitalidad espermática
Nos permite evaluar los espermatozoides vivos.
Según la OMS se estudiaría cuando la < 50% movilidad

Normal > 70 %

Eosina-nigrosina

Permeabilidad de la membrana

Función a los espermatozoides no

motiles

Tinción eosina

Espermatozoide coloreado vs. no coloreados.

Dañados Coloreados presentan una membrana

alterada Tinción de eosina-negrosina
Vivos ( blancos) Membrana intacta
 Recuento de espermatozoides

Normal:20 – 250 millones / ml

La concentración espermática o
número de espermatozoides por
unidad de volumen se determina
en una cámara de recuento celular
(Thoma, Burker, Neubauer, etc.) a
partir de una muestra de semen
que se diluye en una solución
salina formolada

http://www.ansci.wisc.edu/jjp1/ansci_repro/lab/procedures/hemacytometer/Hemocytometer%20use.html
http://www.ansci.wisc.edu/jjp1/ansci_repro/lab/procedures/
hemacytometer/Hemocytometer%20use.html
Morfología espermática

Técnica de tinción
recomienda: Papanicolau,
Shorr, Diff-Quick.
 Cabeza: azul
 Pieza intermedia: rojiza
 Cola: azul o rojiza
Deben de evaluarse 200
espermatozoides.
2 extendidos.
Observar con objetivo de
inmersión.
Sólo se cuentan los
espermatozoides completos.
Criterios de la OMS 1999
Criterios de la OMS 1999

Cabeza Foma Ovalada

Bien definido, ocupa 40-70% de
Acrosoma la cabeza
Longitud 4-5 micras
Anchura 2.5 - 3.5 micras
Pieza intermedia Longitud 1.5 L cabeza
Anchura < 1/2 micra
Forma Delgada unida axialmente a la
cabeza
Flagelo Recto, uniforme, + delgado P intermedia.
Desenrrollada. 45 micras
Restos citoplasmáticos <1/2 cabeza
en la pieza intermedia
Valores limitantes Se consideran anormales
% de anormalidad > 15 % para FIV
Morfología espermática
↑ leucos, son indicativos de infección (cultivo), y mala calidad espermática.
 No debería exceder 1 millón/ ml.
 Las técnicas para la detección esta basada en la presencia:
• de la peroxidasa intracelular
• de antígenos específicos de leucocitos
↑ células inmaduras, desordenes de la espermatogénesis:
• Hipoespermatogénesis, varicocele, alteración de las células
• de Sertoli.
• Para diferenciarlas de los leucos tinción Bryan-Leishman,
• diferente morfología, y ausencia de peroxidasa.
• Asocia ↓éxito FIV.
 Morfología

Normal: Espermatozoides
maduros + inmaduros

> 50% maduros e inmaduros

< del 10 %.
- Normal
- Inmaduro
- Anomalía de cabeza
- Anomalía de segmento
intermedio
- Anomalía de la cola
Morfología del
espermatozoide
 Categorías de Defectos.

Cabeza

Cuello y pieza media

Cola
Defectos de la cabeza.

Grande
Pequeña
Acintada
Piriforme
Amorfa
Vacuolada
Área acrosomal pequeña
Doble
Combinaciones posibles.
 Cabeza de alfiler.

 Es causa del desprendimiento de la cabeza y la cola

(falla de adherencia acrosoma – núcleo) por lo que no se
consideran como defectos de la cabeza.
Representación Esquemática de Espermatozoides
Normales y Anormales.
 Clasificación
morfológica de los
espermatozoides.
 Anormalidades de la cabeza.

Normal

Decapitado

Macrocefalico

Microcefalico
y cola cortada
 Anormalidades de la cabeza.

Piriforme
Piriforme

Cabeza redonda y doble cola

Normal

Acintado
Acintado, ahusado ahusado
 Defectos de cuello y pieza
media.

a) Cuello doblado
b) Inserción asimétrica de la pieza media a la cabeza
c) Pieza media gruesa e irregular
d) Pieza media delgada.
e) Combinaciones posibles.

A acrosoma en forma de botón
 B acrosoma fruncido
 C acrosoma incompleto
 D asimétrico y priforme
 E piriforme
 F acintado
 G y H con cráteres
 I cabeza pequeña con implantación fuera del eje
 Cabeza con cráteres
(visible con papanicolaou)
Defectos de la cola.

a) Corta
b) Doblada
c) Enrollada
d) Horquilla
e) Múltiple
f) Rota
g) Espesor irregular.
A. Gota citoplásmica proximal y dista.
B. Translocación de la gota citoplasmática.
C. Cola abierta debido a translocación de gota
citoplásmica
Gota citoplásmica distal
 Doble cabeza, cuello y
cola, pieza media única
 E.Filamentosa
Anormalidades de la cola F.Doble cola
A.Cola enrollada con gota G.Pieza media en espiral con gota
B.Doble cola enrollada H.Pieza media en espiral
C.Defecto "DAG"
D.Cola plegada
 
 Defectos de la cola

Cola doblada

Cola enrollada

Cola doble
 Tinción de Papanicolaou.

1. Anormal, cabeza grande,

demasiado ancha (>3,5nm)
2. Anormal, área acrosomal
pequeña, vacuolas.
3. Anormal, cabeza amorfa.
4. Normal
5. Anormal, área acrosomal
pequeña.
6. Anormal, cabeza amorfa y
gota citoplasmática.
7. Normal
8. Anormal, área acrosomal
pequeña y vacuolas.
Tinción de Papanicolaou.

1) Anormal, pieza media gruesa.

2) Anormal, cabeza amorfa y
asimétrica.
3) Anormal, cabeza asimétrica.
4) Anormal, cabeza redonda y amorfa
con región postacrosomal
asimétrica.
5) Anormal, gota citoplásmica.
6) ) Anormal, cabeza redonda.
7) Normal (a pesar de una leve
asimetría de cabeza)
8) Anormal, cabeza pequeña con
pequeña área acrosomal.
 Tinción de Papanicolaou.

1) Normal
2) Anormal, cabeza piriforme.
3) Normal ( a pesar de una cabeza
ligeramente acintada).
4) Anormal (cabeza amorfa)
5) Anormal, área acrosomal
pequeña, pieza media gruesa,
inserción asimétrica.
6) Anormal, cabeza amorfa con
pieza media gruesa.
Tinción de Papanicolaou.

1) Anormal, área acrosomal

pequeña, demasiado
ancha (cociente largo-
ancho < 1,5) y redonda.
2) Anormal, cabeza redonda
y pequeña, sin acrosoma.
3) Anormal, cabeza pequeña
y pieza media gruesa.
4) Anormal, cabeza redonda
y pieza media gruesa.
 Tinción de Papanicolaou.

1) Anormal, cabeza
acintada
2) Anormal, cabeza
piriforme.
3) Anormal, cabeza
amorfa no
ovalada con
cuello quebrado.
4) Normal.
Tinción de Papanicolaou.

1) Normal.
2) Normal.
3) Anormal, cabeza amorfa y
vacuolada con región
postacrosomal asimétrica.
4) Anormal, cabeza piriforme
y área acrosomal
vacuolada.
5) Anormal, cabeza amorfa y
pequeña.
6) Anormal, cabeza amorfa y
gota citoplásmica grande.
7) Anormal
8) Normal.
 Tinción de
Shorr.
1) Anormal, cuello grueso.
2) Normal.
3) Anormal, cuello grueso.
4) Anormal, área acrosomal
pequeña, amorfo, cuello
grueso.
5) Anormal, cabeza pequeña y
redonda, ausencia de
acrosoma.
 Tinción de
Shorr.

6) Anormal, cabeza piriforme,

cola ausente.
7) Anormal, cabeza pequeña y
amorfa, área acrosomal
pequeña, cola enrollada.
8) Anormal, cabeza piriforme,
cola ausente
9) Anormal, amorfo.
10) Anormal, cabeza piriforme.
Espermatozoide normal, la cabeza
debe de tener una longitud
aproximada entre 4 y 5 µm y un
ancho entre 2.5 y 3.5 µm.
Coloración de GRAM
Espermatozoide normal, la la cola
debe ser derecha y uniforme, debe
de estar desenrollada y medir
aproximadamente 45 µm de largo.
Coloración Papanicolaou
Muestra de semen en la cual se observan células Muestra de semen en la cual se observan células
epiteliales vaginales, que indican que la muestra epiteliales vaginales, que indican que la muestra
fue tomada por coitus interruptus fue tomada por coitus interruptus Coloración
Papanicolaou.
Gota citoplasmática ( anormal flecha). Gota citoplasmática anormal(flecha).
Coloración de GRAM Coloración de Papanicolaou
 1 Espermatozoide con defecto de cabeza
1 Espermatozoide con defecto de cabeza
2 Cabeza y segmento intermedio
2 Cabeza y segmento intermedio
3 Cabeza y cola
3 Cola
4 Espermatozoides normales
4 Espermatozoides normales
Coloración de Papanicolaou
Coloración de GRAM
Leucocito. Coloración de Gram Leucocito. Coloración de Papanicolaou
Diferentes células encontradas
en el semen

Células epiteliales
escamosas.

Dos neutrófilos y un
monocito.
Bacterias. Coloración de GRAM Célula germinal inmadura. Coloración de
Papanicolaou
Diferentes células encontradas en
el semen

Espermátides redondas.

Espermátides
Diferentes células encontradas en
el semen

Macrófago.
 Resultados

 Informar el porcentaje de formas anormales según la categoría; la

descripción de anormalidades es a criterio de cada Laboratorio.
Valores normales del espermograma de acuerdo con la Organización Mundial de la Salud
positivo