Microbiología Médica

Universidad del Valle de México

Campus: Chapultepec

Microbiología Médica

Coprocultivo

Integrantes:
Simón Zetune Calderón
Eduardo Pérez Valles
Asael González Martínez
 Microbiología Médica

Practica # 2
Coprocultivo
Objetivo

Marco Teórico

Se denomina coprocultivo a la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de cultivo

apropiados para el desarrollo de bacterias entéricas patógenas. Muestra adecuada es aquella que ha
sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad, cuando es más fácil comprobar presencia
de pus, moco o sangre, y antes de la administración de antimicrobianos.

Para realizar el examen se emplean heces que no tengan más de media hora de obtenidas, o muestras
tomadas directamente del recto con un hisopo de algodón. Cuando las siembras no se pueden efectuar
de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente
1g de heces en 1º ml de un líquido conservador, o bien, depositar en éste el hisopo rectal.

Los coprocultivos se realizan para identificar parásitos, enfermedades entérales y virus en el aparato
gastrointestinal. De las muestras que se pueden estudiar, la que tienen más probabilidades de
contenerel mayor número y variedad de microorganismos es la materia fecal. En el coprocultivo
clásico se examinan las heces fecales para detectar y descartar Salmonella, Shigella, Yersinia, E.
colienteropatogena y cultivos deSthaphy lococcus.

Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se
aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1º ml de un líquido conservador, o bien, depositar en
éste el hisopo rectal.

El líquido o solución conservadora se prepara de la siguiente manera:

 NaCl 4.2 g Glicerol 300 ml
 K2HPO4 3.1 gv H2O 700 ml
 KH2PO4 1.0 g

Este líquido, al que se le añade rojo fenol, se distribuye en tubos, que se esterilizan en autoclave durante 20
minutos a 120° C. Las muestras tomadas mediante hisopado rectal pueden ser portadas en tubos que
contengan medio de Cary-Blair, colocando el hisopo en su interior.

FLORA NORMAL FLORA PATÓGENA

Bacteroides fragilis. Salmonella typhi
Lactobacilus spp.( anaerobios). Salmonella spp.
Clostridium perfringens Shigella spp.
Peptostreptococcus spp. Escherichia coli (enterotoxina).
Proteus spp. Klebsiella spp.
Candida spp. Yersinia enterocolítica.
Pseudomona spp. Vibrio cholerae.
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Para facilitar el aislamiento de bacterias entéricas patógenas se utilizan medios de enriquecimiento y

medios selectivos. Los más empleados son los siguientes:

Agar Sal Manitol

Este medio, es diferencial debido a que se pueden detectar

microorganismos fermentadores de manitol y selectivo por su elevada
concentración de cloruro de sodio, por lo que se utiliza
para microorganismos estafilococos, en este caso la detección va enfocada
a Staphylococcus aureus. Es un medio selectivo utilizado para el
aislamiento de Staphylococcus, basado en la tolerancia que poseen a una
alta concentración de cloruro sódico (7,5%). Sirve también como medio
diferencial de cepas fermentadoras del manitol. Staphylococcus aureus en condiciones anaerobias es
la única especie del género que produce esta fermentación. Este medio utiliza la misma base que el
Ágar Sangre. Antiguamente se añadían los hematies a la base fundida y se elevaba la temperatura para
lisarlos parcialmente y que soltasen al medio su componente. Esto daba al medio su habitual color
pardo chocolate. Composición: extracto de carne, peptona, cloruro sódico, manitol, rojo fenol, agar y
agua destilada.

Agar Salmonella-Shigella:

Este medio selectivo, empleado para

aislar Salmonella y Shigella ejerce una buena inhibición sobre agentes
coliformes, sin limitar el desarrollo de los patógenos gramnegativos.
Se utiliza especialmente junto al agar-sulfito de bismuto, para siembra
de materiales provenientes de medios enriquecedores, como caldo
tetrationato y caldo con selenito. Contiene sales biliares, lactosa,
citrato y tiosulfato sódico, citrato férrico, verde brillante y rojo neutro
como indicador. Shigella y Salmonella, como también otros agentes
que no fermentan la lactosa, aparecen como colonias lisas,
transparentes a opacas; las pocas colonias fermentadoras de la lactosa
que se pueden desarrollar tienen color rojo y un centro negro.
Conviene señalar que la bilis o las sales biliares inhiben el crecimiento de microorganismos
grampositivos y esporulados sin interferir en el crecimiento de los bacilos gramnegativos.

La inhibición de microorganismos Gram positivos se debe a su contenido de sales biliares, verde

brillante y citratos. La diferenciación de los microorganismos entéricos se logra por la incorporación
de lactosa en el medio. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido, el cual al
reaccionar con el indicador rojo neutro, forma colonias de color rojo. Los microorganismos no
fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este último grupo contiene la mayoría de los
microorganismos patógenos intestinales incluyendo Salmonella y Shigella. El tiosulfato de sodio y el
citrato férrico, facilitan la detección de sulfuro de hidrógeno, manifestándose por colonias con centro.
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Composición por Litro:

 Peptona de casina y carne- 5g Citrato de hierro- 1g
 Extracto de carne de buey- 5g Sales Biliares- 8.5g
 Lactosa- 10g Rojo neutro- 0.025g
 Citrato sódico- 8.5g Agar- 15g
 Tiosulfato sódico- 8.5g Verde brillante- 0.3mg

Agar MacConkey.

Es un medio selectivo-diferencial que contiene sales biliares, las

cuales inhiben la flora gram positiva. Los agentes del grupo
coliforme dan colonias de color rojo, debido a que fermentan la
lactosa. En cambio, Salmonella y Shigella sp. forman colonias
incoloras.
Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales
Biliares, que inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram
positivos, es baja en relación con otros medios similares. Se incluye
también cristal violeta para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente
estafilococos y enterococos. La diferenciación de organismos entéricos se lleva a cabo con la
combinación de Lactosa con el indicador Rojo neutro.Se producen colonias rosas a rojas si el
aislado es capaz de fermentar la Lactosa y colonias sin color en caso contario.

LECTURA:
 Colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la
Lactosa). Salmonella, Shigella, Pseudomonas 
 Colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. E.
coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa)

Material Cantidad Sustancias Cantidad

Puente de Tinción 1 Lugol Lo necesario
Asa Bacteriológica 1 Cristal violeta Lo necesario
Mechero 1 Safranina Lo necesario
Porta Objetos 10 Alcohol - Acetona Lo necesario
Aceite de inmersión Lo necesario

Equipo
Microscopio óptico

Material Biológico
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Muestra de SS fecales

Procedimiento

Toma con el asa estéril un poco de materia

fecal y depositarla cerca de la orilla de cada
Proceder al aislamiento por el
una de las placas.
método de estría cruzada.

Incubar a 37oC por 24 a 48 horas

Interpretar el resultado, anotando

las características morfológicas de
cada colonia diferente que haya
Hacer un frotis de cada colonia diferente, y crecido
teñirlo con Gram.

Resultados
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 EMB

Se detectaron 2 tipos de colonias:

Colonia Rosa mexicano: Colonia morada con contorno verde

Forma.- Convexa metalico:
Borde.- Entero Forma.- Convexa
Agrupación.- Circular Borde.- Entero
Agrupación.- Circular

Bacilos Gram - Bacilos Gram -

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 SS (Salmonella – Shigella)

Colonia Amarillas con manchas negras en medio

Forma.- Convexa
Borde.- Entero
Agrupación.- Circular

Bacilos Gram -

 Mac Conkey

Se detectaron dos tipos de colonias:

Colonia Translucida: Colonia Rosa:

Forma.- Convexa Forma.- Convexa
Borde.- Entero Borde.- Entero
Agrupación.- Circular Agrupación.- Puntiforme
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Cocos Gram - Bacilos Gram -

Pruebas bioquímicas

MIO

Color original.- Morado

Positivo al reactivo de Kovac.- Presencia de un anillo rosa, lo cual indica que

es positivo al indol

Tope amarillo.- Negativo a ornitina

Turbio.- Movilidad de la bacteria

TSI

Color original.- Naranja

Cambio de color a amarillo.- Utiliza Sacarosa

Presencia de Gas

CITRATO DE SIMONS

Color original.- Verde

Cambio de color a azul.- Indica que es positivo a la prueba de Citrato

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Análisis de Resultados

Las enterobacterias son las principales bacterias causales de de las infecciones intestinales,
estando entre ellas las mas graves (salmonelosis y shigelosis).
- Su forma de contagio es muy facil y muy comun en paises subdesarrollados.
Ya que es principalmente por contaminacion fecal y, al haber una mala educacion sanitaria,
ausencia de servicios higienicos (letrinas adecuadas, falta de agua potable), hace que estos tipos
de infecciones sean por lo demás frecuentes.
- Una caracteristica comun es el aumento de la incidencia de estas enfermedades el epocas de
verano, por el mismo motivo de la informalidad en la venta de la comida, refrescos, helados, y
otros, preparados con mala higiene o no cuidados correctamente de la contaminacion.
psatogenas.
En esta caso al hace nuestro análisis encontramos dos tipos de colonias en el medio EMB
encontramos dos tipos de colonias y se rebeló que fueron bacilos gran(-) y gran(+), los bacilos gran
negativos es una característica normal del tracto gastro intestinal, en el caso de que hubieran sido
muy delagdos podríamos hablar de una infección por campylobacter; en el caso de los bacilos
gram negativos se puede hablar de clostridium difificile
En el agar SS que medio selectivo empleado para aislar Salmonella y Shigella se encontraron
bacilos gran negativos que como se menciono antes son habituales del el tracto gastro intestinal.
En el agar de Mac Conkey encontramos dos tipos de colonias unas rosas que eran pertenecientes a
bacilos gram negativo y otra colonia tranparente perteneciente a cocos que también son normales
en lael traco gastrointestinal en caso de haber sido positivos se puede hablar de una posible
infección por estafilococo,

Conclusión
El propósito de esta práctica fue identificar las finalidades de un análisis prococultivo de
laboratorio así como saber que agar usar para este análisis y para qué sirve cada uno y los
organismos esperados tener en cada medio ya que son selectivos y de esta manera poder
identificar rápidamente las bacterias patógenas y comunes en las heces por la técnica de la tinción
de gram además observamos algunas pruebas bioquímicas que se le hacen a diferentes medios
para de estar manera interpretar diferentes factores como si la bacteria tiene movilidad si hay
presencia de gas en otras particularidades

Bibliografía
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/maconkeyagar.htm
http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/