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Para establecer el diagnstico y el tratamiento en los pacientes con enfermedades infecciosas, el mdico requiere del apoyo del Laboratorio

de Microbiologa. La estrecha colaboracin entre los mdicos tratantes y el Laboratorio es imprescindible para obtener el mximo beneficio para los pacientes. El diagnstico etiolgico de la enfermedad infecciosa se establece desde el momento en que se aisla e identifica el agente causante. En algunas oportunidades no es posible este aislamiento, por lo que el diagnstico debe establecerse mediante otros parmetros, como son aumento del ttulo de anticuerpos, o bien el hallazgo de antgenos, componentes celulares o un producto metablico especfico del microorganismo. El aislamiento y la identificacin de bacterias y virus necesitan de la cooperacin del mdico tratante, quien debe familiarizarse con los conceptos generales para la obtencin y transporte de las muestras clnicas. Recoleccin transporte de muestras Los resultados que se obtienen en el Laboratorio de Microbiologa dependen en gran medida de la calidad y condiciones de transporte de la muestra obtenida; es por esto que las recomendaciones ms a bajo explicitadas deben tenerse presentes y cumplirse cabalmente durante la recoleccin, manipulacin y transporte de las muestras. 1. Las muestras deben obtenerse preferentemente antes de comenzar la terapia con antibiticos o bien antes de introducir cualquier modificacin al tratamiento con antimicrobianos. 2. La muestra obtenida no debe presentar contaminacin con flora habitual, o sta debe ser la mnima posible. 3. Los sistemas de recoleccin deben ser apropiados al tipo y volumen de la muestra que se desea obtener. El material usado debe ser estril y libre de material residual, como detergentes o desinfectantes. 4. La muestra debe llegar al Laboratorio en un mnimo de tiempo. De existir demora entre la toma de la muestra y su procesamiento, el transporte debe hacerse en los medios de transporte proporcionados por el laboratorio. 5. Las muestras deben ser identificadas con una etiqueta adherida al envase, y los datos anotados deben coincidir exactamente con los de la solicitud de examen. 6. Deben incluirse aquellos datos del paciente que permitan al laboratorio elegir el mejor procedimiento para el aislamiento de patgenos, tales como edad, hiptesis diagnstica, tratamientos concomitantes (especialmente antibiticos) enfermedades concomitantes, etctera. El Laboratorio de Microbiologa presta apoyo al clnico a travs de: 1. Informacin adecuada y actualizada para la toma de muestras. 2. Deteccin e identificacin de los patgenos aislados. 3. Determinacin de la sensibilidad de estos microorganismos. 4. Apoyo a los epidemilogos y encargados de la vigilancia de infecciones nosocomiales en la identificacin y seguimiento de las cepas causantes de las infecciones intrahospitalarias. En comparacin con los otros campos del laboratorio, el de Microbiologa ha tenido un avance ms lento en el desarrollo de medios especficos y rpidos para el diagnstico de los agentes etiolgicos de las enfermedades infecciosas. Para indicar una terapia adecuada en base a la sensibilidad a los antibiticos es indispensable identificar, en forma rpida y correcta el agente causal de la infeccin. Las herramientas diagnsticas ms empleadas, siguen siendo la observacin directa, con o sin tincin y las tcnicas de cultivo. Considerando que estos ltimos suelen demorar algunos das, se ha logrado acelerar su informe en la deteccin de microorganismos procedentes de los hemcultivos y en el cultivo de los Mycobacterium. Estos mtodos han sido complementados y perfeccionados con la introduccin de tcnicas computacionales, que han permitido la recuperacin de las bacterias en tiempos reducidos (ver artculo sobre hemocultivos en esta monografa). Observacin microscopica Observacin directa sin tincin o preparacin al fresco Sepuede obtener informacin rpida a travs de la observacin microscpica de la muestra sin teir, para la bsqueda de hongos, bacterias y parsitos. La muestra se suspende en suero fisiolgico, en solucin de KOH, o bien en tinta china. La suspensin en suero fisiolgico permite demostrar la presencia de Trichomonas Treponemas.Para estos ltimos, adems, se recomienda la observacin en campo oscuro.

La suspensin en KOH se utiliza preferentemente en la identificacin de hongos. La muestra clnica (expectoracin, raspado de piel o de tejidos) es mezclada con la solucin de KOH al 10%, dejndola actuar por 1-15 minutos (se puede calentar suavemente, para acelerar la digestin de los tejidos). La suspensin en tinta china se usa para la visualizacin de Cryptococcus neoformans. Una vez centrifugado el lquido cefalorraqudeo (LCR), se coloca sobre una lmina portaobjetos y se mezcla con una gota de tinta china diluida. La cpsula mucoide que envuelve a la levadura aparece como un halo claro que la rodea. Es importante observar levaduras en yemacin para asegurar el diagnstico. La observacin debe hacerse entra lmina y laminilla, usando un objetivo de 40X. Observacin directa con tincin Tincin de Gram. La diferente coloracin que adquieren las bacterias Grampositivas se basa en el menor contenido lpidos de la pared celular y en la reducida permeabilidad a los solventes de estos microorganismos, en comparacin con los gramnegativos. Las bacterias grampositivas se tien violeta por la retencin del complejo cristal violeta genciana/yodo, mientras que las grannegativas no retienen el complejo y se tien rojas al usar la contratincin de safranina. La tincin de Gram ayuda a determinar rpidamente las caractersticas morfolgicas , por lo que es til en la indicacin de los antibiticos. Esta tincin tambin permite establecer si el material enviado al laboratorio para su cultivo posee la calidad adecuada. Por ejemplo, es inadecuada una muestra de expectoracin en que se observan abundantes clulas epiteliales, lo que indica que est constituida principalmente por saliva y no secrecin del tracto respiratorio. La presencia de polimorfosnuecleares (PMN) puede indicar infeccin. Los hongos levaduriformes se observan formando pseudomicelios cuando hay invasin y no slo colonizacin. Tincin de Giemsa y Wright. Es til en el diagnstico de algunos parsitos como malaria y babesiosis . En las lesiones producidas por virus Herpes simplex y virus varicela-zoster, se observan clulas gigantes multinucleadas, propias de las lesiones virales, lo que permite distinguirlas de las lesiones piodrmicas bacterianas. Tincin argntica (Gomori metenamina de plata, Dieterle) . Es una tcnica difcil de efectuar, reservada a los laboratorios especializados, til en la deteccin de Pneumocytis carinii, Legionella.Treponema, hongos, rickettsias, y microorganismos asociados a la enfermedad por araazo de gato. Tincin cido peridico de Schiff (PAS). Permite la deteccin de hongos en muestras de tejido. Tincin con anaranjado de acridina. Utiliza un fluorocromo que tie el cido desoxirribonucleico (ADN). Es ms sensible que la tincin de Gram , ya que an las bacterias daadas por los antibiticos pueden ser visualizadas. Requiere de microscopio de fluorescencia. Tincin con azul de metileno. Es usada en la bsqueda de leucocitos fecales, permitiendo una buena tincin de los ncleos de estas clulas. Se visualizan en las infecciones intestinales invasoras de la pared del tubo digestivo, como las producidas por Escherichia coli enteroinvasora, Shigella, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y enterocolitis asociada a antibiticos. Cultivos Hemocultivo. La indicacin ms empleada de los hemocultivos es la sospecha de una bacteremia. Ver artculo especfico en esta monografa. Urocultivo. Destinado a la investigacin de la infeccin urinaria. Ver "Infeccin urinaria: Diagnstico y Tratamiento" en esta monografia. Coprocultivo. Se usa de preferencia en las bsqueda de patgenos intestinales productores de enterocolitis aguda. La muestra se obtiene directamente de la deposicin recientemente emitida o bien de un hisopado rectal. Debe usarse un medio de transporte adecuado (Cary-Blair) si sta no va a ser procesada de inmediato. La seleccin de los medios de cultivo, as como el procedimiento de islamiento a seguir, dependen del agente etiolgico que se est investigando. Si no se explicita otra situacin, rutinariamente, la bsqueda se concentra en los patgenos habituales como Salmonella y Schigella.En los casos especiales, debe indicarse si se sospecha Escherichia Coli enteropatgena, enteroinvasora, enterotoxignica, enterohemorrgica , o entero agregante; Campylobacter SPP.,Vibriocholera, Yersinia enteroclitica, etctera. Cultivo de Mycobacterium spp. Util en el diagnstico de tuberculosis pulmonar pausibacilar y especialmente en las formas extrapulmonares. Actualmente est indicado, adems del cultivo en medio slido, el cultivo en medios lquidos, disminuyendo as los tiempos de desarrollo. En nuestro laboratorio utilizamos el sistema MB/Bact semiautomizado para todo tipo de muestras, excepto sangre.

Cultivo de hongos. La bsqueda puede ser de hongos levaduriformes o miceliados. Es importante conocer hacia cul de ellos se inclina la sospecha, dado que los tiempos de incubacin son diferentes. Los hongos levaduriformes se incuban por plazos que oscilan entre 5 y 7 das, en cambio los filamentos deben ser incubados por plazos ms largos, de 20 hasta 30 das. Cultivo anaerobio. Algunas bacterias de importancia clnica son anaerbicas, difciles de cultivar y oxgeno lbiles, por lo que en su recoleccin y transporte deben usarse envases especiales que contengan una atmsfera reducida, es decir, con un bajo potencial de oxidoreduccin. Es de extraordinaria importancia que la muestra sea procesada de inmediato. La muestra en lo posible debe ser obtenida por aspiracin. Las trulas no son adecuadas, por la desecacin y exposicin al oxgeno ambiental. Deber evitarse la contaminacin con flora residente, ya que en ella estn ampliamente representadas las bacterias anaerbicas. Los sitios anatmicos adecuados para la obtencin de muestras para estudio de anaerobios son lquidos orgnicos estriles (Lquido pleural, sangre, bilis, lquido peritoneal, liquido sinovial, (LCR), muestras quirrgicas obtenidas de sitios estriles (Contenido de abcesos, aspirado de heridas profundas) y muestras de biopsias obtenidas en forma asptica (Transcutnea pulmonar, aspiracin vesical suprapbica, lquido de culdocentesis , etctera). Es importante tener presente que a toda muestra procesada para la bsqueda de anaerobios, debe efectursele una tincin de Gram. Dado que los cultivos son demorosos en entregar resultados, el Gram puede proporcionar una buena informacin temprana, til para iniciar tratamiento y, al mismo tiempo, verifica la concordancia con los resultados de los cultivos. Catteres intravenosos. Los catteres intravenosos son cultivados cualitativa o semicuantitativamente, dependiendo de las tcnicas usadas en los laboratorios. La tcnica de cultivo semicuantitativo (Maki) , consiste en hacer rodar el extremo del catter sobre la superficie de una placa de medio cultivo, e informar el nmero de colonias que se desarrollan en sta. La presencia de 15 o ms colonias se correlaciona con inspeccin. Falta de desarrollo en el cultivo La falta de desarrollo de un cultivo puede deberse a: 1. Diagnstico incorrecto. La inspeccin es debida a microorganismos no cultivables en los medios habituales, como virus, rickettsias, mycoplasmas y chlamydias. 2. Interpretacin errada de la tincin de Gram . Se interpreta como microorganismos la presencia de artefactos en la preparacin. 3. Muestra inadecuada. La muestra clnica no es representativa del material propio del sitio de la infeccin. 4. Transporte inadecuado o prolongado . Si esto sucede, algunos microorganismos pueden no ser viables al momento de llegar al laboratorio. Esto ocurre con anaerobios, estreptococos, Neisseria. Si el transporte es prolongado, puede haber sobre crecimiento de flora residente que oculte la presencia de patgenos, lo que pueden haber estado en menor nmero. 5. Terapia con antibiticos. Aunque sea una dosis nica, sta muchas veces es suficiente para inhibir o retardar el crecimiento bacteriano. 6. Metodologa de cultivo inadecuada. Se requiere de tcnicas especiales para el cultivo de determinados patgenos, como el caso de anaerobios, micobacterias, hongos y ciertas bacterias exigentes en cuanto a sus nutrientes y/o condiciones de vida. Por esto, el laboratorio debe conocer cul es la sospecha diagnstica, para tener la oportunidad de cultivar al agente etiolgico. Tcnicas inmunolgicas El diagnstico rpido de las enfermedades infecciosas se ve facilitado por el empleo de tcnicas inmunolgicas abreviadas. Ninguna de ellas es tan especfica o sensible como el cultivo, por lo que este ltimo debe ser considerado el "estndar de oro" frente a cualquier comparacin. Las tcnicas inmunolgicas pueden estar orientadas a la bsqueda de anticuerpos o de antgenos. Las destinadas a la bsqueda de anticuerpos necesitan del tiempo necesario para que se produzca un alza significativa del ttulo de anticuerpos. Los antgenos en cambio, pueden ser detectados desde el comienzo

de la enfermedad. Constituye una ventaja el que an durante el tratamiento con antibiticos, los antgenos sean detectables. Entre las enfermedades infecciosas diagnosticadas por exmenes serolgicos estn sfilis, rubola, leptospirosis toxoplasmosis, mononucleosis infecciosa, etctera. Existen diferentes exmenes que permiten su titulacin, entre los que se cuentan aglutinacin, precipitacin, fijacin del complemento, hemaglutinacin, neutralizacin, inmunofluorescencia, ensayo inmunoenzimtico, radioinmunoensayo, etctera. Los exmenes serolgicos se usan en la determinacin del grado de inmunidad que posee un sujeto para el diagnstico de infeccin aguda. Diagnstico del estado inmune. Es de inters verificar el estado inmune del sujeto. Una situacin de este tipo, por ejemplo, es determinar el grado de inmunidad frente a rubola en una mujer en edad frtil. Diagnstico de infeccin aguda. El diagnstico de infeccin aguda se establece comparando los ttulos de dos sueros pareados, uno obtenido en la fase aguda y otro en la fase de convalescencia, o 14 das despus de la primera muestra. El suero de fase aguda debe obtenerse tan temprano como sea posible en el transcurso de la enfermedad. El suero de la fase convalesciente debe extraerse no antes de 10 das de comenzada la enfermedad, de preferencia 2-4 semanas despus. Sueros pareados. Cuando se usan sueros pareados, la conversin de seronegativo a seropositivo o un aumento de 4 veces o ms del ttulo de anticuerpos obtenido inicialmente es indicador de infeccin reciente. Sera altamente recomendable que en todo paciente hospitalizado con un estado febril no diagnosticado, se guarde una muestra de suero congelado, para su uso en eventuales estudios serolgicos. Para que las pruebas serolgicas pareadas tengan validez ambas muestras de suero (fase aguda y fase de convalescencia) deben procesarse simultneamente. Muestra nica de suero (fase aguda). Una muestra nica de suero tambin puede ser til para el diagnstico. Los anticuerpos tipo Igm aparecen tempranamente durante la infeccin primaria y persisten por varias semanas. Por lo tanto la presencia de anticuerpos Igm es indicadora de infeccin reciente. Deteccin de antgenos Son pruebas destinadas a la deteccin de antgenos en las muestras clnicas. Estas reacciones inmunolgicas no dependen de la presencia de microorganismo viables, sino que slo de sus antgenos, por lo que pueden ser usadas aun en sujetos que estn recibiendo antibiticos. Estos exmenes son de gran apoyo al diagnstico por su rapidez, pero no sustituyen a los cultivos, a la tincin de Gram ni a otras tcnicas de diagnstico. Entre las tcnicas ms usadas est la aglutinacin mediante partculas de ltex recubiertas con anticuerpos especficos, que pueden utilizarse para demostrar en forma rpida la presencia de antgenos bacterianos y fngicos. En el diagnstico de cryptococosis, por ejemplo, se usan partculas de ltex recubiertas con anticuerpos antipolisacrido de la cpsula del Crytococcus neoformas, que provocan una aglutinacin visible cuando est presente en el LCR o en el suero del paciente. En casos de meningitis, se puede detectar en el LCR la presencia de antgenos de Haemophilus influenzae (tipo b; Streptococcus pneumoniae (omnitipo); Neisseria meningiditis (tipos A, B, C, W e Y) y de Streptococcus beta hemoltico grupo B. Ensayo inmunoenzimtico (ELISA). Esta tcnica detecta una amplia variedad de agentes infecciosos. Se deja interactuar el suero del paciente, en el que se encuentra el antgeno, con un anticuerpo especfico, luego se extrae el anticuerpo no ligado sobrante y se agrega una inmunoglobulina anti-humana conjugada con una enzima especfica (fosfatasa alcalina, peroxidasa). Finalmente se agrega un sustrato para la enzima. La enzima ligada al complejo acta sobre el sustrato, produciendo cambio de color, el que puede leerse a simple vista o mediante un espectrofotmetro, permitiendo su cuantificacin.El color que se produce es proporcional a la cantidad de anticuerpo especfico que se fija al antgeno. El mtodo se utiliza en la deteccin de virus sincial respiratorio. Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, rotavirus, adenovirus, virus hepatitis,virus varicela-zster, etctera. Inmunofluorescencia directa (IFD). Usa un anticuerpo marcado con isotiocianato de fluorescena, que permite la identificacin de antgenos bacterianos o virales en las muestras clnicas. Se usa en la deteccin de virus respiratorios (influenza, parainfluenza, adenovirus, virus sincicial respiratorio), virus herpes, sarampin y parotiditis, as como en bacterias como Bordetella pertussis, Rickettsia rickettsia y Chlamydia trachomatis. Es una tcnica muy sensible, que requiere de sueros de muy buena calidad y de personal adiestrado.

Inmunofluorescencia indirecta (IFI). Usa el suero del paciente para investigar anticuerpos. Este suero es incubado en presencia de un antgeno especfico. Para la visualizacin del completo resultante, se utiliza un anticuerpo antiglobulina humana, marcado con isotiocianato de fluorescena. Sensiblidad In Vitro a antibiticos Slo haremos un resumen de este tema, puesto que ste se trata en profundidad en otro artculo de esta monografa. Se emplean dos grupos de tcnicas en la determinacin de sensibilidad de los microorganismos a los antibiticos. Tcnica de difusin. Se basa en la difusin del antibiticos a partir de un disco de papel impregnado con una cantidad determinada de antibitico. Esta tcnica, basada en el mtodo de Kirby-Bauer, es un mtodo suficiente para la determinacin de la sensibilidad de las bacterias de crecimiento rpido. Los discos con el antibitico son colocados sobre una placa de agar Mueller-Hinton, previamente sembrada con un inculo estndar del microorganismo a estudiar. Las placas,despus de ser incubadas por 18 horas, presentan zonas de inhibicin bacteriana alrededor de cada disco que contiene un antibitico activo frente al microorganismo. El dimetro de la zona en inhibicin determina si existe sensibilidad o resistencia. Tcnica de dilucin. El antibitico es diluido sucesivamente a la mitad, ya sea en medio lquido o slido. Luego se procede a inocular el microorganismo en concentracin adecuada en cada una de las diluciones efectuadas. Esta tcnica permite establecer la concentracin inhibitoria mnima (CIM) para cada microorganismo analizado, valor que est dado por la concentracin de antibitico presente en el ltimo tubo que no presenta desarrollo. La determinacin de sensibilidad por difusin es habitualmente suficiente como indicador de la sensibilidad de un microorganismo, sin embargo en ciertas situaciones se recomienda la determinacin de CIM por dilucin. Estas situaciones pueden resumirse en la endocarditis bacteriana, septicemia y meningitis bacteriana (ver en artculo "Interpretacin de los estudios de susceptibilidad antimicrobiana") Tcnicas rpidas de determinacin de resistencia. Existen dos tcnicas usadas en la determinacin rpida de resistencia a antibiticos. Una de ellas es la deteccin de betalactamasas, que permite establecer la presencia de penicilinasa o cefalosporinasa, enzimas que inactivan a los antibiticos betalactmicos. Otra tcnica que puede emplearse es la deteccin de resistencia al cloramfenicol, mediante la acetiltransferasa, enzima que altera la estructura del cloramfenicol, inactivndolo. Monitoreo de la terapia antibitica. Una forma de prever la respuesta de la infeccin a los antibiticos, consiste en determinar el poder bactericida del suero, conocido tambin como test Schlichter . Para esto se necesitan la cepa causante de la infeccin y el suero del paciente en perodo peak y valle de la concentracin plasmtica. El suero del paciente es puesto en contacto con la cepa, en diluciones sucesivas a la mitad, determinndose la dilucin mxima capaz de inhibir o destruir el microorganismo. Se utiliza en la endocarditis bacteriana, en la cual se necesita de una actividad bacteriana para la erradicacin del agente etiolgico. Se considera eficaz el poder bactericida del suero en los casos en que es capaz de inhibir el desarrollo del microorganismo en diluciones entre 1:32 y 1:64, segn se trata de concentraciones valle o peak.Es una tcnica poco usada, por no existir una estandarizacin adecuada entre los diferentes laboratorios. Niveles sricos de antibiticos. En el manejo de los pacientes crticos, es importante establecer los niveles sricos de algunos antibiticos, especialmente de aquellos con estrecho margen teraputico, como es el caso de los aminoglucsidos, o en los con toxicidad proporcional a la concetracin srica, como son la vancomicina, el cloramfenicol y el cotrimoxazol. La toxicidad puede prevenirse al mantener los niveles sricos de estos antibiticos por debajo del umbral establecido. Tecnologa del ADN recombinante Frente a la presin de contar con un diagnstico precoz y acertado del agente etiolgico, durante los ltimos aos se han introducido tcnicas de punta, derivadas fundamentalmente de la biologa molecular. En este ltimo tiempo se ha producido un ambiente de excitacin en la comunidad microbiolgica, debido al uso de las denominadas "sondas de cidos nucleicos" Estas sondas permitiran a los microbilogos identificar a aquellos patgenos difciles de cultivar, hacerlo en forma rpida y con un alto grado de especifidad y efectuarlo directamente de las muestras clnicas.

Con las tcnicas de hidridizacin es posible detectar cantidades mnimas de ADN. Para el infectlogo esto significa la posibilidad de diagnosticar microorganismo en forma especfica, cuando el aislamiento es imposible, poco sensible, impracticable, demanda un trabajo exagerado o no es costo afectivo. Las tcnicas de hibridizacin son capaces de detectar el equivalente a 0,1 pg de ADN. Tambin sera capaz de detectar infecciones latentes o abortivas. En situaciones que la multiplicacin viral es mnima o no se produce, las tcnicas de hibridazacin son ms sensibles que el aislamiento viral directo para determinar la presencia del virus. Esta tecnologa puede utilizarse con ventaja en la caracterizacin de aquellos microorganismos responsables de un brote epidmico, precisando en esa forma su pertenencia a una misma cepa. Permite determinar la resistencia a los antibiticos de microorganismos tales como Salmonellas, as como tambin define la epidemiologa de las infecciones. Otro ejemplo lo constituyen los fingerprints del ADN tratado con endonucleasas de restriccin, que son una poderosa herramienta para la identificacin de microorganismos en las infecciones nosocomiales. El desarrollo ms relevante en el campo de la va molecular es la Reaccin de polimerasa en cadena (Polymerase Chain Reaction, PCR).Es un mtodo rpido que permite sintetizar millones de copias de una secuencia discreta de ADN o de ARN. La PCR fu descrita en el ao 1985 por Saki y otros colaboradores. Su tcnica ha sido perfeccionada en los ltimos aos, hacindose popular en muchas reas de la investigacin mdica y biolgica, como tambin en el diagnstico clnico. Es un mtodo in vitro elegante y simple de amplificacin en pocas horas, por un factor de 100.000 a 1.000.000, de la secuencia de un ADN blanco. La reaccin consiste de tres pasos que constituyen un ciclo: 1. Desnaturalizacin por el calor del ADN de doble hebra, (separacin de las dos hebras). 2. Unin de "amplmeros" especficos a las secuencias complementarias (o casi complementarias) del ADN. 3. Accin de la ADN que extiende las secuencias del ADN. La amplificacin por PCR requiere de dos oligonucletidos sintticos, "primers", del ADN blanco con la secuencia deseada, de cuatro deoxirribonucletidos y de ADN polimerasa En el primer paso, la desnaturalizacin por calor del ADN blanco deja dos hebras simples de ADN que actan como molde. En el segundo paso, los primers, que poseen las secuencias complementarias de una u otra hebra del molde de ADN, se unen al sitio que flanquea la regin a ser amplificada. Al final del primer ciclo, la extensin en direcciones opuestas de los dos primers unidos, producida por la polimerasa en el tercer paso, produce hebras complementarias de un segmento de secuencia deseada, delimitadas por los primers en el ADN blanco. El nmero de amplificaciones de secuencias de ADN blanco producidas por PCR se duplica despus de cada ciclo. El uso de una ADN polimerasa termoestable (polimerasa Taq, del Thermus aquaticus) obvia la necesidad de agregar enzima despus de cada ciclo, simplificando el procedimiento, permitiendo su automatizacin. El nmero de secuencias del ADN blanco aumenta aproximadamente 10/8 a 10/9 veces despus de 30 ciclos. Se requieren cantidades mnimas de ADN para comenzar la reaccin (1 picogramo, que es el material gentico equivalente a 1 bacteria).Se puede decir que una sola copia de la secuencia de ADN genmico humano puede ser amplificado a partir de una muestra de menos de 50 ng de ADN. La tecnologa de PCR est encontrado muchas aplicaciones, tanto en el diagnstico como en la investigacin. Tiene un gran campo de aplicacin en la deteccin de mutaciones responsables de las alteraciones genticas. Se usar corrientemente en microbiologa para la identificacin de patgenos virales bacterianos, y se emplear para examinar la funcin y regulacin de genes en la investigacin del cncer. Actualmente, en nuestro laboratorio de Microbiologa se est usando tcnica de PCR en la bsqueda de Mycobacterium tuberculsis en muestras pulmonares.