UNIVERSIDAD NACIONAL

FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE INGENIERÍA GEOGRÁFICA, AMBIENTAL Y ECOTURISMO
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

PRÁCTICA N°6
“PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE
CHOCOLATE”

GRUPO: LOS MICROAMBIENTALES

CURSO: MICROBIOLOGÍA (LABORATORIO)
PROFESORA: MUJICA
INTEGRANTES:
 ADRIANO MARTINEZ, JAIME
 CARIAPAZA ROQUE, DIANA CAROLINA
 DEUDOR CASIMIR, YORLIN WILMER
 ESPINOZA HUASHUAYO, KELLY GINA
 HINOSTROZA GONZALES, JOSEPH JORDIN
 PACHECO ANGLAS, LUIS ALBERTO

Lima, 01 de noviembre del 2019

 PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN ..............................................................................................................3
2. OBJETIVOS .......................................................................................................................3
2.1. Objetivo general .........................................................................................................3
2.2. Objetivos específicos ...................................................................................................3
3. MARCO TEÓRICO...........................................................................................................4
4. MATERIALES ...................................................................................................................6
5. PROCEDIMIENTO ...........................................................................................................7
6. RESULTADOS .................................................................................................................12
7. CONCLUSIONES ............................................................................................................13
8. BIBLIOGRAFÍA ..............................................................................................................14

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 PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

1. INTRODUCCIÓN
El cultivo es un método, utilizado principalmente en la microbiología, para el estudio de
microorganismos como bacterias, hongos y/o parasito; para poder realizarlo se necesita
un medio de cultivo en condiciones óptimas que estén constituidas por sustancias
complejas que posibiliten el crecimiento de las bacterias y una multiplicación de estos
microorganismos, este proceso de multiplicación se llama fisión binaria, y gracias a ella
podemos encontrar las colonias de microorganismos organizados según lo hayamos
cultivado. Para comenzar, debemos dejar en claro que una bacteria es un organismo
microscópico unicelular, carente de núcleo, que se multiplica por división celular sencilla
o por esporas, que al agruparse se transforman en colonias. Se entiende por colonias a la
agrupación de bacterias originadas a partir de una bacteria madre que se establecen y
extienden por un determinado medio. Un medio para poder observar estas formaciones
de colonias es el Agar Sangre, en el cual se podrán observar microorganismo
individualmente colocados en la placa replicándose, es una combinación de un agar base
(agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre la cual puede ser sangre humana, para
cultivos en una placa de Agar. Por lo tanto, la placa se puede usar para estimar la
concentración de microorganismos en un cultivo o una solución de ese cultivo, usando
un contador de colonias.

2. OBJETIVOS

2.1.Objetivo general

 Conocer cómo preparar y diferenciar los medios de cultivo.

 Cultivar microorganismos en un medio óptimo.

2.2.Objetivos específicos

 Conocer las técnicas de esterilización de los medios de cultivo.

 Utilizar las técnicas empleadas en microbiología para el cultivo de los
diferentes agares como el de sangre y el de chocolate.

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 PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

3. MARCO TEÓRICO
 AGAR DE SANGRE

El agar sangre es un medio de cultivo sólido enriquecido, diferencial pero no selectivo.

Es utilizado para la recuperación y crecimiento de una gran variedad de microorganismos
provenientes de muestras clínicas o para subcultivos.
El agar sangre clásico debe ser incluido para el sembrado de la mayoría de las muestras
clínicas recibidas en el laboratorio; a excepción de las muestras de heces en el que no es
útil, a menos que se prepare con ciertas modificaciones.
Este medio de cultivo se compone básicamente de un agar base enriquecido y 5% de
sangre. La base de agar puede variar de acuerdo a las necesidades, pero principalmente
estará compuesto por peptonas, aminoácidos, vitaminas, extracto de carne, cloruro de
sodio, agar, entre otros. En cuanto a la sangre, normalmente se requiere tener contacto
con un bioterio para la obtención de sangre de animales, tales como carnero, conejo o
caballo. Sin embargo, esto no siempre es posible y en ocasiones se usa sangre humana.
El medio agar sangre puede ser preparado en el laboratorio, la preparación de este medio
es uno de los más delicados, cualquier descuido en su elaboración dará como resultado
un lote contaminado. Es por ello que deben tomarse todas las precauciones posibles y al
final debe realizarse un control de calidad incubando a 37 °C 1 placa por cada 100 que se
preparen.

Ilustración 1. Agar sangre

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 PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

 AGAR DE CHOCOLATE

El agar chocolate es un medio de cultivo sólido, enriquecido, no selectivo y no

diferencial. Es utilizado principalmente para el aislamiento de microorganismos exigentes
desde el punto de vista nutricional, aunque en él pueden crecer cualquier tipo de bacterias.
Es por ello que su utilidad aumenta especialmente en el sembrado de muestras que
normalmente son estériles, como LCR y líquido articular. Aunque también se incluye
dentro de los medios escogidos para siembras de muestras polimicrobianas, pero en estos
casos es necesario la adición de antibióticos que inhiban la flora concomitante. Este medio
posee un color marrón característico muy parecido al chocolate, de allí su nombre. La
preparación es muy similar a la del agar sangre, solo que en este caso la sangre debe ser
calentada con la finalidad de que los glóbulos rojos se rompan. Su preparación, al igual
que el agar sangre, es muy delicada, pues es fácilmente contaminable. Por ello muchos
laboratorios prefieren adquirir este medio ya preparado por casas comerciales que
garantizan su calidad.

Ilustración 2. Agar chocolate

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 PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

4. MATERIALES

MATERIALES REACTIVOS

PLACAS PETRI AGAR

MECHERO MUESTRA DE
DE GAS SANGRE

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MUCOSA
CAMPANA SALIBAL
ANAEROBICA

5. PROCEDIMIENTO

1) Retirar los agares del refrigerador con anticipación (30 min) antes que empiece la
práctica.

2) Limpiar con alcohol las mesas de trabajo para iniciar la siembra.

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PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

3) Extraer 5 ml de sangre para realizar los distintos agares.

4) Después de extraer la sangre, mezclamos con 100ml de agar teniendo en cuenta

que se tiene que hacer cerca al mechero para eliminar microorganismos no
deseados.

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PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

5) Agitamos el matraz con la nueva mezcla y observamos que se torna un color rojo
oscuro.

6) Se usó las placas de Petri en donde se colocó el agar sangre y dejamos reposar por
5 minutos.

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PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

7) Se calentó parte del agar sangre por unos 20 segundos a una temperatura de 80°C
produciendo el agar chocolate.

8) De la misma forma que el agar sangre, se extrajo una parte del agar chocolate y
se dispuso en una placa de Petri, esperamos por 5 minutos para que se vuelva
acuoso.

9) Con el uso de un hisopo se extrajo mucosa salival y por el método de estrías se

colocó en los agares respectivos con la cercanía al mechero para la esterilización
de microorganismos.

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PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

10) El agar de sangre se envolvió con papel craff y se almaceno en la estufa de cultivo.

11) En cambio, el agar de chocolate se almaceno en la campana anaeróbica.

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6. RESULTADOS

Agar chocolate con rothia mucilaginosa

Agar sangre con rothia mucilaginosa

Tinción de Gram que muestra las características de Rothia mucilaginosa

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7. CONCLUSIONES
 Se pudo concluir todos los procedimientos para la obtención de ambos
agares, siguiendo todos los procedimientos dados por la docente sin
ningún inconveniente.
Agar sangre Agar chocolate
Para el aislamiento y cultivo de El Agar Chocolate es un medio no
numerosos microorganismos. Con la selectivo para cultivo y aislamiento de
adición de sangre, es útil para microorganismos exigentes,
microorganismos aerobios y anaerobios especialmente de Neisseria y
nutricionalmente exigentes a partir de Haemophilus spp de muestras clínicas.
una gran variedad de muestras, así como
para la observación de reacciones de
hemólisis.

La base del Agar Chocolate contiene La peptona y el almidón otorgan al medio

caseína y peptonas seleccionadas como
fuentes de nitrógeno, con un pH
controlado, la hemoglobina aporta la
hemina (factor X) y el suplemento
vitamínico que aporta entre otros el factor
V (nicotinamida adenina dinucleótido),
esencial para las diferentes especies de
Haemophilus, además de vitaminas,
aminoácidos, coenzimas, glucosa,
factores esenciales para el crecimiento de
Neisserias patógenas y otros
microorganismos exigentes.
un alto valor nutritivo que permite el
crecimiento de una gran variedad de
microorganismos incluso aquellos que
son muy exigentes. El cloruro de sodio
mantiene el equilibrio osmótico. La
adición de sangre de cordero, en una
concentración de 5% a 10 %, aporta
nutrientes esenciales para el crecimiento
bacteriano; además, permite la
observación de hemólisis.

Composición Composición
Peptona especial 23.0 gr Proteasa Peptona nº3 15,0 g
Almidón 1.0 gr Hidrolizado de hígado 2,5 g
Cloruro de sodio 5.0 gr Extracto de Levadura 5,0 g
Agar 10.0 gr Cloruro sódico 5,0 g
Sangre Sangre
pH final 7.3 +/- 0.2 Cloruro sódico 5,0 g
Agar 12,0 g

 Para la obtención de organismos en un estado óptimo sus condiciones deben

ser las siguientes:

Agar sangre: Conservado refrigerado entre 2º y 12º C es estable hasta la fecha de

caducidad. El medio de cultivo se debe almacenar sellado y con la cubierta de la placa

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 PREPARACIÓN DEL AGAR DE SANGRE Y AGAR DE CHOCOLATE

(tapa) abajo. Se recomienda almacenar a temperaturas cercanas a 8ºC. A menor

temperatura de almacenamiento mayor probabilidad de condensación y hemólisis, y
por tanto mayor riesgo de filtración del sello de PVC.
Agar chocolate:
Conservado refrigerado entre 2º y 12º C es estable hasta la fecha de caducidad. El
congelamiento daña irreversiblemente el producto. El medio de cultivo se debe
almacenar sellado y con la cubierta de la placa (tapa) abajo. Se recomienda almacenar
a temperaturas cercanas a 8ºC. A menor temperatura de almacenamiento mayor
probabilidad de condensación, y por tanto mayor riesgo de filtración del sello de PVC.
 El método para la esterilización fue por flameo directo realizado antes
del procedimiento.

8. BIBLIOGRAFÍA

Gil, M. (2018). Agar Chocolate. Obtenido de Lifeder.com: https://www.lifeder.com/agar-

chocolate/

Gil, M. (2018). Agar sangre. Obtenido de Lifeder.com: https://www.lifeder.com/agar-sangre/

Soberón, S. M. (2017). Agar chocolate. Obtenido de SCRIBD:

https://es.scribd.com/document/361547951/60489943-Agar-Chocolate-docx

Zamudio, A. (2016). MicroBiologia: Medio de Cultivo Agar Sangre. Obtenido de SCRIBD:

https://es.scribd.com/document/252439746/MicroBiologia-Medio-de-Cultivo-Agar-
Sangre

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