Instituto Politecnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Bilogicas

BIOQUIMICA GENERAL
PRÁCTICA No 12 AISLAMIENTO DE DNA DE ESPINACA O
GUAYABA
Alumnos: Segura García Reymundo Emmanuel
Grupo: 4QV1 Seccion: 2

INTRODUCCION
El DNA es un tipo de ácido nucleico, una macromolécula que forma parte de todas
las células. Contiene la información genética usada en el desarrollo y el
funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, y es
responsable de su transmisión hereditaria. Los ácidos nucleicos son moléculas
esenciales para las funciones de las células, en todas ellas existen dos tipos de
ácidos nucleicos: el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el ácido ribonucleico (RNA),
en el DNA se localiza la información genética de la célula mientras que diferentes
moléculas de ARN forman parte de este y es el encargado de traducir esta
información en las proteínas que determinan la estructura y la función celular.
El ADN es un polímero de nucleótidos, es decir, un polinucleótido. Un polímero es
un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre sí, como si
fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cada vagón es un nucleótido,
y cada nucleótido, a su vez, está formado por un azúcar (la desoxirribosa), una base
nitrogenada (que puede ser adenina→A, timina→T, citosina→C o guanina→G) y un
grupo fosfato que actúa como enganche de cada vagón con el siguiente, lo que
distingue a un vagón (nucleótido) de otro es, entonces, la base nitrogenada, y por
ello la secuencia del ADN se especifica nombrando sólo la secuencia de sus
bases. En el aislamiento de los ácidos nucleicos debe tomarse en cuenta que se
debe romper adecuadamente la pared y membrana celular para facilitar la
extracción del ácido nucleico deseado.

OBJETIVO
Aislar, purificar y caracterizar DNA vegetal (jitomate)
 PROCEDIMIENTO

Colocar 15 g de Adicionar 0.3 mL de Agregar 10 mL de Filtrar el

guayaba o de hojas de amilasa (100 mg/mL). una solución homogeneizado a
espinaca en un mortero Mezclar e incubar 10 saturada de NaCl y 5 través de tela sintética
y adicionar 5 mL de mL de SDS al 10% y en un embudo y
minutos a temperatura
Tris/EDTA/NaCl (50 recuperando el
ambiente y agitar seguir triturando
mM:20 mM: 5 mM).
ocasionalmente. durante 5 minutos. filtrado.
Triturar durante 3 a 5
minutos.

Verter el sobrenadante Centrifugar a 4000 Adicionar 15 mL de la

Hacer una dilución 1:10
a un frasco que rpm durante 10 mezcla cloroformo:
con la solución citrato
contenga 30 mL de minutos y recuperar alcohol isoamílico
diluida y determinar el
alcohol 96° frío y el sobrenadante (24:1). Tapar el tubo y
espectro de absorción
recuperar el DNA. agitar vigorosamente
característico del DNA.
por 30 segundos.
 ESPECTRO DE ABSORCIÓN DEL DNA DE ESPINACA O GUAYABA

Leer la absorbancia Si la absorbencia a Usando esta solución con Con estos datos,
(A) en el 260 nm (A260) es A260 1.0 determinar los construir una
espectrofotómetro mayor que 1.0, valores de absorbencia de gráfica de
en un intervalo de preparar una 210 a 300 nm, de 5 en 5 absorbencia contra
longitud de onda (λ) dilución tal que la nm, para crear el espectro longitud de onda,
de 200 a 300 nm, A260 sea 1.0 o de absorción del DNA. en nanómetros.
calibrando el equipo ligeramente menor.
con la solución
citrato salina diluida.

REFERENCIAS

➢ Olivia R. Taboada M., El genoma humano: nuevos avances en investigación,

diagnóstico y tratamiento. PUBLICACIONES I EDICIONES DE LA
UNIVERSITAT DE BARCELONA, 2006. Barcelona. págs.37.
➢ Peña, A. Bioquímica. limusa. 2004. México. pp 151 Stryer L, Berg JM,
Tymoczko JL (2003): “Bioquímica”, 5ª ed. Editorial Reverté (Barcelona,
España).
➢ Alexander R.R, Griffiths J.M., Wilkinson M.L. 1984 “Basic Biochemical
Methods” Editorial John Wiley & Sons. Inc. 10a Ed.
➢ Bohinski, R. C. 1991 "Bioquímica". 5a. Ed. Addison-Wesley Iberoamericana.
Argentina. Brasil.