INFORME N° 05:

Extracción de ADN

Joel Guillermo Amancio Quispe

Roberto Melchor Díaz Díaz

Yanpier Bautista Sánchez

Gianfranco Talavera Gutiérrez

DOCENTES
Mg. Julio Reynaldo Ruiz Quiroz

Edwin E. Hualpa Cutipa PhD (c)

ASIGNATURA

Biología Celular

ESCUELA PROFESIONAL
Farmacia y Bioquímica
 I. Introducción.

los ácidos nucleicos son moléculas lineales que almacenan la genética, lo podemos encontrar
en todo el parte de nuestro cuerpo y sus componentes son un grupo fosfato, pentosa y las
bases nitrogenadas que cambia si es respecto al ADN o ARN. El acido desoxirribonucleico
es el encargado de almacenar la mayor cantidad de información genética y de herencia su
forma es doble hélice y esta constituido por bases nitrogenadas timina, adenina, guanina y
citocina, existen muchos estudios del ADN y cada vez se puede saber mas acerca de ello. El
ARN tiene como función de llevar información proceso y codificación y la diferencia que se
encuentra con el ADN es que son simples y presentan uracilo en lugar de timina. En esta
practica podremos obtener de manera sencilla el ADN de frutos e hígado de pollo que gracias
a procesos específicos se logran ver a la vista sin necesidad de llevar al microscopio.

II. Objetivos
- Extraer y observar el ADN de hígado de pollo o cebolla
- Reconocer fundamentos del experimento.
- Concretar conocimientos sobre el ADN y ARN
III. Diagrama de flujo

Uracilo
adenina
 IV. Experimento 1: observación del ADN de hígado de pollo

Objetivo: Extraer observar ADN de hígado de pollo

● Pipeta
● Varilla vidrio o baguete
● Beacker
● Mortero
● Gasa o tela
● Probeta
● Arena
● Reactivos químicos
● Nacl 2 M
● Alcohol
● Detergente SDS

PROCEDIMIENTO

1. Triturar un fragmento de hígado de

pollo en un mortero con arenilla

2. Añadir 50 ml de agua destilada y

4. Medir el filtrado en una probeta
mezclas

3. Filtrar la papilla sobre una tela o

gasa

5. Añadir NaCl 2 M de igual volumen

que el filtrado
 8. Remover y dejar reposar

6. Añadir luego SDS

9. Extraer el ADN

7. Añadir con una pipeta 50 ml de

alcohol 96°

Discusión:

Para estudiar el ADN es imprescindible aislarlo e identificarlo su proceso de extracción del

DNA es una técnica muy importante para los biólogos que deben poner en práctica, esta
consiste en separar el DNA de cualquier tipo de tejido ya sea vegetal o animal. , debido a
que la molécula se encuentra al interior de estructuras membranosas y está asociada con
proteínas, se requiere usar sustancias adecuadas para obtener al ADN de la forma más
purificada posible es por eso que el proceso de extracción del ADN geonómico se lleva
acabo o sigue ciertas pautas para su correcta purificación que son muy diferentes a los
empleados en la purificación de proteínas. El primer paso en la purificación del ADN por lo
general consiste en homogeneizar las células por medio de la trituración con mortero y
arena, esto hace que las membranas de rompan y aislar los núcleos de los cuales se extrae
el ADN. Luego se añadió un volumen igual de cloruro sódico 2M con esto conseguimos
producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina a
continuación se añade 1 centímetro cúbico de SDS. La acción de este detergente es formar
un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las
proteínas que tiene asociadas, el alcohol que se le hecha al final sirve para formar dos fases
donde el ADN precipitara en el medio llamado interfase por teoría de densidades y el
carácter de polaridad.

Estos tipos de practicar se le pueden completar con una tinción específica de ADN.
Tenemos que tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre una varilla de
vidrio y depositarlas sobre una porta. Se tiñe durante unos minutos con un colorante básico.
Se observa al microscopio. (1)

MÉTODO ALTERNATIVO MATERIALES

➢ Media taza de plátanos cortados en trozos.

➢ Una taza de agua fría.

➢ Cloruro de sodio (sal de mesa)

➢ Detergente líquido

➢ Un poco de enzimas conocidas como “ablandador de carne”.

➢ Alcohol de 96° frío (guárdelo en refrigeración un día antes)

➢ Licuadora

➢ Un vaso de precipitados de 250 mL

➢ Un tubo de ensayo

➢ Un colador casero

➢ Un palillo largo (de aproximadamente 10 cm)

PROCEDIMIENTO
1. Verter en la licuadora la taza de agua fría, la media taza de plátano y un poco de
sal.
2. Licuar a la velocidad máxima por exactamente 10 segundos. Después de licuar
colar el contenido.

Se licua con el fin de

que sus células se
rompan y comience a
liberar el ADN

3. Agregar al producto resultante del colado una sexta parte de detergente líquido y
dejar reposar la mezcla durante 10 minutos.

La solución de
detergente liquido
actúa sobre la
membrana
rompiendo la capa de
lípidos
 4. Colocar en el tubo de ensayo 3 mL del licuado anterior y añadir una pizca de la
enzima “ablandador de carne”. Agitar suavemente.
En este
caso se
utiliza el
jugo de
papaya
como
ablandad
or casero

Con ayuda de un
embudo filtrar la
solución anterior

5. Agregar alcohol frío hasta la mitad del tubo de ensayo, el ADN se elevará en el
tubo como un hilo blanco, que se puede extraer de manera cuidadosa con el palillo

El alcohol ayuda a
precipitar el ADN
Discusión:
El Dodecilsulfato de sodio (SDS) es un tensoactivos aniónicos que en solución se ionizan,
pero considerando el comportamiento de sus grupos en solución, el grupo hidrófobo queda
cargado negativamente. Están constituidos por una cadena alquílica lineal o ramificada que
va de 10 a 14 átomos de carbono, y en su extremo polar de la molécula se encuentra un
anión. Representantes de este grupo son derivados del ión sulfato o de sulfonatos como es
el dodecil sulfato de sodio o dodecil bencen sulfonato de sodio.(2)
A este tipo pertenecen los detergentes sintéticos como los alquil benceno sulfonatos, los
jabones (sales de sodio de ácidos grasos), los agentes espumantes como el lauril sulfato,
los humectantes del tipo sulfosuccinato, los dispersantes del tipo lignosulfonatos, etc. La
producción de los surfactantes aniónicos representa alrededor del 55% de los surfactantes
producidos anualmente en el mundo.(3)
El detergente aniónico como el SDS (sodio dedecil sulfato), que solubiliza proteínas, tejidos
y membranas, evitando que una cantidad significativa de ADN quede atrapada en los
desechos o restos celulares. Para prevenir que el ADN extraído presente coloración gris o
parda, la cual se debe a la actividad de polifenoloxidadas presentes en algunos tejidos. (4)
CONCLUCIONES
- Existen métodos muy sencillos para extraer ADN de los seres vivos como
es el caso de nuestro experimento en que vasto hacer un pequeño
tratamiento a la muestra por medio de la trituración con el fin de destruir los
tejidos y separar las células , se utilizó además el un detergente para destruir
las membranas tanto de la célula y del núcleo , luego se le agrego sal de
NaCl a 2M para romper toda estructura asociada al ADN y liberarlo y para
finalizar se le agrego alcohol con el objetivo de producir un ascenso del ADN
y flote.
- Se reconoció fundamentos como el uso adecuado del alcohol, el SDS es
muy importante para la ruptura de menbrana, la sal para la unión de fibras
de ADN, el ablandador se puede sustituir por jugo de papaya que contiene
papaína y ayuda a destruir proteínas que podrían ser impurezas entre otros.

V. CUESTIONARIO:
1. ¿En que difieren el ADN y el ARN?
2. Elabora una tabla comparativa entre los diferentes tipos de ADN
3. ¿Porque es importante realizar una buena trituración de la muestra?
4. Describa 5 ejemplos de tejidos del cuerpo humano de los cuales se pueda extraer ADN
para su estudio molecular.
5. ¿Qué aplicaciones potenciales tiene la aplicación de técnicas basadas en ADN en el
campo farmacéutico?

RESPUESTAS:
1. La principal diferencia que se encuentra entre ADN y ARN es la composición en el
azúcar. Mientras que el ARN presenta en su nucleótido una azúcar ribosa, debido a que el
anillo posee un grupo –OH unido al átomo de carbono en su extremo inferior derecho. El
ADN posee un azúcar desoxirribosa debido a que su carbono no está enlazado a un grupo
–OH, sino a un hidrógeno simplemente. (5) Otra diferencia es la que radica en la estructura
de las bases nitrogenadas, mientras que en el ARN existe uracilo (U), en el ADN no
encontramos esta base, ya que está reemplazada por la timina (T). (6)
2.
ADN A ADN B ADN Z
Sentido de giro de Dextrógiro Dextrógiro Levógiro
la hélice
Pares de bases 11 10 12
nitrogenadas por
vuelta
Diámetro de la 2,55 nm 2,37 nm 1,84 nm
hélice
Unidad estructural Par de bases Par de bases Dos pares de bases
Forma y tamaño Más ancha y corta intermedia Más estrecha y
larga
Inclinación de los 19° 1,2° 9°
pares de bases

3. Se debe realizar una buena trituración, ya que es un proceso mecánico por el cual, las
células pueden ser destruidas, de manera que sueltan el material genético. Muchas veces,
no triturar de manera adecuada la muestra, tare consigo errores al momento de hacer una
correcta extracción. (7)
4. Entre los tejidos más utilizados para realizar un buen estudio molecular a partir de la
extracción de ADN encontramos tejido sanguíneo, tejido óseo (huesos), tejido conectivo
(cabello), tejidos orales (saliva) y semen. (8)
5. Un notable uso estaría evidenciado en el tratamiento de la diabetes, ya que los pacientes
con esta enfermedad necesitan inyecciones de insulina humana para estabilizar los niveles
de mando de glucosa, pues han perdido la capacidad de regular la glucosa en sangre
efectivo. Usando el rDNA para crear la insulina humana bastante que la forma que las
fuentes animales permiten su uso disperso a través de la industria farmacéutica. (9)
Se han desarrollado nuevos sistemas de administración de fármacos, los cuales, incluyen
partículas microscópicas llamadas microesferas, que tienen orificios del tamaño justo para
aplicar los fármacos directamente en las dianas farmacológicas. Actualmente existen
tratamientos con microesferas en investigación para distintos cánceres y enfermedades.
(10)

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1. Mendiola, R. G. 1999. Aislamiento del ADN en Células Animales y Vegetales.
Colegio de Ciencias y Humanidades. Plantel Naucalpan. UNAM.
2. Tensoactivos [Internet]. [cited 2020 Jul 17]. Available from:
https://biorem.univie.ac.at/fileadmin/user_upload/p_biorem/education/lectures/SEM
ARNAT/SEMARNAT-E-Clasificacion_de_Tensoactivos.pdf
3. Salager J-L. LABORATORIO DE FORMULACION, INTERFASES REOLOGIA Y
PROCESOS UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA SURFACTANTES Tipos y Usos
 CUADERNO FIRP S300-A CUADERNO FIRP S300-A en español.
4. Detergentes IBI SCIENTIFIC – Científica Senna [Internet]. [cited 2020 Jul 17].
Available from: https://cientificasenna.com/producto/detergentes-ibi/
5. Campbell NA. Biología: conceptos y relaciones [Internet]. Pearson Educación; 2001.
860 p. Disponible en:
https://books.google.com.pe/books?id=NI2qFwNNYX4C&pg=PA187&dq=diferenci
as+adn+y+arn&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwi33s_q4NTqAhX7GbkGHbAQAK8Q6A
EwAXoECAQQAg#v=onepage&q=diferencias%20adn%20y%20arn&f=false

6. Teijón JM. Fundamentos de bioquímica estructural [Internet]. Editorial Tebar; 2006.

446 p. Disponible en:
https://books.google.com.pe/books?id=avt8LFmp8q4C&pg=PA261&dq=diferencias
+adn+y+arn&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwi33s_q4NTqAhX7GbkGHbAQAK8Q6AE
wAHoECAMQAg#v=onepage&q=diferencias%20adn%20y%20arn&f=false

7. Crespo A, Blanco O, Cubero O, Molina C, Cubas P. Técnicas y métodos para la

iniciación en el estudio de la evolución molecular con aplicaciones especiales para
el análisis de los hongos liquenizados. Botánica Complutensis. 1999;13-51.

8. Noriega LFH. El ADN de Locard: Genética forense y criminalista [Internet]. Editorial

Reus; 2013. 320 p. Disponible en:
https://books.google.com.pe/books?id=qQiKAgAAQBAJ&pg=PA55&dq=tejidos+hu
manos+usados+para+extraccion+de+adn&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwikycKD-
NTqAhUuDrkGHcPLD2sQ6AEwAXoECAYQAg#v=onepage&q=tejidos%20humano
s%20usados%20para%20extraccion%20de%20adn&f=false

9. Smith Y. Usos de la DNA recombinante [Internet]. News-Medical.net. 2010 [citado

17 de julio de 2020]. Disponible en: https://www.news-medical.net/life-
sciences/Recombinant-DNA-Applications-(Spanish).aspx

10. Martínez J. NUEVOS MEDICAMENTOS DE ORIGEN BIOTECNOLÓGICO

[Internet]. [España]: Universidad Complutense Madrid; 2018. Disponible en:
http://147.96.70.122/Web/TFG/TFG/Memoria/JAVIER%20MARTINEZ%20TEJEDO
R.pdf