“UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL

DE TECNOLOGÍA MÉDICA ESPECIALIDAD EN LABORATORIO
CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA

CURSO: BIOQUÍMICA GENERAL

TEMA: EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

INTEGRANTES:
CACERES HIDALGO KAMILA NICOLD
CUEVAS CASTILLA DEXSY KARINA
LOPEZ PEREYRA CESAR DAVID
LURITA MENDOZA KAROL ANDREA
DOCENTES:
SILVA HUAYTA VILMA EDITH
● FANNY CANCHARI CHACALTANA
 INTRODUCCIÓN

El procedimiento general de extracción de ácidos nucleicos consiste en

tres etapas consecutivas:
★ disgregación de las células o tejidos (lisis celular), inactivación de las
nucleasas intracelulares y en
★ separación de los ácidos nucleicos de los demás componentes
celulares.
La lisis celular depende en gran medida del tipo de muestra que se va a
procesar. Mientras que en muestras como sangre, células, ciertos tipos de
tejidos o saliva puede alcanzarse una eficiente lisis celular en tiempos
relativamente cortos, en otros tipos de muestras como tejidos incluidos en
parafina
la lisis celular requiere un tratamiento previo mucho más laborioso.
 MATERIALES UTILIZADOS
1 hígado de pollo
Plumón marcador
1 Probetas graduadas de 50 ml.
1 Bagueta
5 Portaobjetos y cubreobjetos.
1 Vaso de precipitados de 50 ml.
1 Caja de Petri.
10 Tubos de ensayo
5 Tubos falcon de 5 ml
Pipetas de 0.5 ml (2) y 1 ml (2)
Aceite de inmersion (20 mL).
1 Mortero
1 Bisturí.
1 Balanza digital
1 Espectrofotómetro
1 Microscopio
4 Gasas.
Solución de lisis (Tris – EDTA) 20 mL
Agua destilada (250 mL)
Etanol frío (20 mL)
Colorante Anaranjado de Acridina
Buffer TE (Tris-HCl pH 8.0 10 mM, EDTA 0.1
mM)
 EXTRACCIÓN DE ADN

Cortar un trozo pequeño de hígado con la Triturar el hígado en un mortero, Traspasar el líquido obtenido en la
ayuda de un bisturí y pesar en una caja de adicionando 20 ml de agua trituración a un vaso de
Petri 2 g. de este. destilada. precipitado.
Con ayuda de una gasa filtrar el Añadir aproximadamente 20 ml. de Agregar lentamente el etanol frío y esperar
líquido obtenido y verterlo en una solución de lisis y agitar suavemente por lo menos dos minutos para observar
probeta. con una bagueta. unos filamentos blanquecinos es el
“ADN” extraído
 Extraer algunos de estos Colocar una muestra sobre un Añadir una gota de anaranjado de
filamentos con ayuda de la portaobjeto. acridina y colocar el cubreobjetos.
bagueta.
Observar los filamentos del ADN al
microscopio con los objetivos 10x, 40x
y 100x
Cuantificación de ADN

Recolectamos el ADN del

hígado de pollo y lo Extraemos el ADN hasta Agregar buffer TE hasta llegar
colocamos en un tubo falcon obtener un volumen de 1 ml. a un volumen de 5 ml.
de 10 ml.
 Agregamos nuevamente buffer
Centrifugamos a 3000 rpm por
Decantamos el sobrenadante TE hasta llegar a un volumen
10 min.
de 5 ml.
Centrifugamos a 3000 rpm por Encendemos el espectrofotómetro
10 min. por lo menos 15 minutos antes y
seleccionamos la λ de 260 ηm.
Y leer absorbancia.
CUESTIONARIO
A. Métodos para extraer ADN humano.
● Incubación del lizado para su uso
● Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes
orgánicos
● Lisado y purificado con un detergente iónico. Método del
CTAB
● Método de salado
● Uso de la proteinasa K y el dodecilsulfato de sodio
● Método de extracción de ADN con yoduro de sodio como
agente caotrópico en un único tubo
● Extracción con gradientes de cloruro de cesio – bromuro de
etidio
● Intercambio aniónico para la extracción de ADN del lisado
celular
● Uso de matrices celulósicas para la extracción del ADN de
muestras biológicas
● Uso de resinas de intercambio iónico
B. ¿Qué pasos generales se siguen durante la extracción de ADN
humano
Existen diferentes protocolos para la
extracción de ADN, que siguen
aproximadamente el mismo esquema básico:

● Lisis celular
● Eliminación de proteínas
● Eliminación de otros ácidos nucleicos
(ácido ribonucleico (ARN), etc.)
● Concentración de ADN por
precipitación con etanol
C. ¿Cuáles son los métodos para cuantificar el ADN?
El método indirecto más recomendable para la determinación de la
concentración de ADN en una muestra es mediante la visualización de un gel
de electroforesis en el cual se colocan muestras con concentraciones
conocidas.

El procedimiento requiere la preparación de una cámara de electroforesis,

colocando cada una de las muestras que se desea evaluar en pozos
individuales y dejando al menos 10 pozos libres.

Posteriormente se inicia la electroforesis con 6 v/cm y diez minutos antes de

que concluya la corrida, se detiene la fuente de poder, se destapa la cámara
de electroforesis, sembrando muestras de concentraciones conocidas.

Finalmente se cierra la cámara de electroforesis, se enciende nuevamente la

fuente de poder, dejando que corra durante 10 minutos, se visualiza el
producto con U.V. y se toma una fotografía.

En este método la estimación se realiza contrastando intensidades de luz

entre las muestras, lo cual se realiza visualmente o con el auxilio de algún
programa computacional que contraste intensidades de color.
D. Investigar la función de cada reactivo empleado.
Solución de lisis.- Un tampón de lisis es una solución tampón que se utiliza con el fin de romper
células abiertas para su uso en experimentos de biología molecular que analizan las macromoléculas
lábiles de las células (por ejemplo, transferencia de Western para proteínas o extracción de ADN ).

-Agua destilada .- El agua destilada sirve como reactivo químico, como disolvente y en la medicina
se usa para casi todo. En contra, podríamos decir que el proceso de destilado es, a nivel energético, muy
costoso y poco económico.

-Etanol frío .- La adición de alcohol frío precipita el ADN dado que es insoluble en altas concentraciones de
sal y alcohol. El ADN precipitado forma unas finas hebras blancas y visibles en el límite de separación de la fase
de alcohol, mientras que el resto de las sustancias permanecen disueltas.

-Colorante Anaranjado de Acridina .- El anaranjado de acridina se usa como colorante

fluorescente para diferenciar ADN y ARN. Se une a los ácidos nucleicos de las bacterias y otras células. Cuando se
estimula con luz ultravioleta y el colorante está unido al ADN la emisión es a 525 nm (en el verde).
CONCLUSIÓN

En conclusión la extracción de
ácidos nucleicos es el primer paso
para la mayoría de los estudios en
biología molecular y para las
técnicas del ADN recombinante,
existen múltiples metodologías de
extracción.
GRACIAS