Instituto Politecnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Bilogicas
Practica 8 “Separacion de fosofolipidos por cromatografia”
Alumnos: Cerón Cruz Alejandra Karen
Segura García Reymundo Emmanuel
Grupo: 4QV1 Seccion: 2
Introduccion.
Los fosfolípidos son un tipo de lípidos saponificables
que componen las membranas celulares, compuestos
por una molécula de alcohol (glicerol o de
esfingosina), a la que se unen dos ácidos grasos (1,2-
diacilglicerol) y un grupo fosfato. El fosfato se une
mediante un enlace fosfodiéster a otras moléculas,
que generalmente contienen nitrógeno, como colina,
serina o etanolamina y muchas veces posee una carga
eléctrica. Todas las membranas plasmáticas activas
de las células poseen una bicapa de fosfolípidos.
Los fosfolípidos se dividen en fosfoglicéridos (en
que el alcohol es glicerol, un alcohol de cadena corta)
y esfingolípidos (el alcohol es esfingosina, un
alcohol de cadena larga). Los fosfolípidos más
abundantes son la fosfatidiletanolamina (o cefalina),
fosfatidilinositol, ácido fosfatídico, fosfatidilcolina
(o lecitina) y fosfatidilserina.
Funciones.
Componente estructural de la membrana celular: El
carácter anfipático de los fosfolípidos les permite su
autoasociación a través de interacciones hidrofóbicas
entre las porciones de ácido graso de cadena larga de
moléculas adyacentes de tal forma que las cabezas
polares se proyectan fuera, hacia el agua donde
pueden interaccionar con las moléculas proteicas y la
cola apolar se proyecta hacia el interior de la bicapa
lipídica.
Activación de enzimas: Los fosfolípidos participan
como segundos mensajeros en la transmisión de
señales al interior de la célula como el diacilglicerol
o la fosfatidilcolina que activa a la
betahidroxibutirato deshidrogenasa que es una
enzima mitocondrial.
Componentes del surfactante pulmonar: El
funcionamiento normal del pulmón requiere del
aporte constante de un fosfolípido poco común
denominado dipalmitoílfosfatidilcolina. Este
fosfolípido tensoactivo es producido por las células
epiteliales del tipo II e impide la atelectasia al final
de la fase de espiración de la respiración.
Componente detergente de la bilis: Los fosfolípidos,
y sobre todo la fosfatidilcolina de la bilis, solubilizan
el colesterol. Una disminución en la producción de
fosfolípido y de su secreción a la bilis provoca la
formación de cálculos biliares de colesterol y
pigmentos biliares.
Síntesis de sustancias de señalización celular: El
fosfatidinol y la fosfatidilcolina actúan como
donadores de ácido araquidónico para la síntesis de
prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos y
compuestos relacionados.
La cromatografía en capa fina (TLC) es un método
de afinidad que se utiliza para separar los compuestos
de una mezcla. La TLC es un método de separación
muy versátil que se utiliza ampliamente para el
análisis cualitativo y cuantitativo de las muestras. La
TLC puede utilizarse para analizar prácticamente
cualquier clase de sustancia: plaguicidas, esteroides,
alcaloides, lípidos, nucleótidos, glucósidos,
carbohidratos y ácidos grasos.
Objetivos.
• Aplicar la técnica de cromatografía en capa
fina para la separación de los fosfolípidos de
la yema de huevo.
Resultados. Fosfatidil 0.71
etanolamina
Lípidos 1.0
neutros

Mancha 1. 0.7 cm → Rf= 0.12

Mancha 2. 2.1 cm → Rf= 0.38
Mancha 3. 3.1 cm → Rf= 0.56
Disolvente. 5.5
Tabla 3. Resultados de los Rf con solución de
ninhidrina.
Figura 1. Cromatografía de yema de huevo
adicionadas con solución de yodo, molibdato, Fosfolípido Rf Ninhidrina
ninhidrina, bismuto respectivamente. Lisofosfatidil 0.17 X
colina
Tabla 1. Resulatdos de los rf con solución de yodo- Esfingomielina 0.26
Fosfatidil 0.33
Fosfolípido Rf Sol Yodo
colina
Lisofosfatidil 0.17 X
Fosfatidil 0.33
colina
serina
Esfingomielina 0.26
Fosfatidil 0.71
Fosfatidil 0.33 X
etanolamina
colina
Lípidos 1.0
Fosfatidil 0.33 X
neutros
serina
Fosfatidil 0.71 X
etanolamina Mancha 1. 1.1cm → Rf= 19
Lípidos 1.0
neutros Mancha 2. 2.5 cm → Rf= 0.43
Disolvente 5.7 cm
Mancha 1. 1 cm → Rf= 0.18 Tabla 4. Resultados de los Rf con la solución de
Mancha 2. 2.3 cm → Rf = 0.39 bismuto.

Mancha 3. 3.5 cm → Rf = 0.60 Fosfolípido Rf Bismuto

Lisofosfatidil 0.17
Disolvente.5.8 cm colina
Tabla 2. Resultados de los Rf con solución de Esfingomielina 0.26
molibdato Fosfatidil 0.33
colina
Fosfolípido Rf Molibdato Fosfatidil 0.33
Lisofosfatidil 0.17 X serina
colina Fosfatidil 0.71
Esfingomielina 0.26 etanolamina
Fosfatidil 0.33 X Lípidos 1.0
colina neutros
Fosfatidil 0.33 X
serina
Mancha 1. 0.7 cm → Rf= 0.11
Mancha 2. 1.1 cm → Rf= 0.17}
Mancha 3. 1.5 cm → Rf= 0.24
Mancha 4. 3.1 cm → Rf= 0.5
Disolvente 6.2 cm
Distancia que recorrió el compuesto
Rf=
Distancia que recorrió el solvente
Análisis y discusión.
al inicio de la práctica se realiza la extracción de los
lípidos de la yema de huevo al añadir 15 ml de una
disolución de cloroformo-metanol con una
proporción de 2:1 v/v; al ser mezclado tiene que estar
en un baño de hielo, ya que a temperatura ambiental
el cloroformo puede evaporarse. Después de hacer el
mezclado se realiza un filtrado en el cual se le añade
KCl, su función es la separación de los
contaminantes que están fuertemente asociados a los
lípidos. Se emplea una centrifugación a 2500 rpm
durante 5 minutos para obtener la presencia de dos
fases: una fase superior acuosa y una fase inferior
orgánica; donde solo es de utilizar la fase orgánica a
la cual se le va a aplicar una cromatografía en placa
fina con una fase móvil de cloroformo-metanol-ácido
acético-agua a una proporción de 68:25:8:4 v/v.
Empleando los siguientes reactivos para poder
identificar a los distintos fosfolípidos de la yema de
huevo:
La prueba que se realiza con molibdato es específica
para fosfolípidos porque revela el grupo fosfato,
motivo por el cual todas las fases, excepto lípidos
neutros que carecen del grupo fosfato, pueden
revelarse.
La prueba de yodo consiste en introducir la placa de
cromatografía en una cámara que contenga cristales
de yodo, ya que el yodo al sublimarse se va a
impregnar en la placa mostrando manchas de color
café. En esta prueba se identificó aquellos
fosfolípidos que tienen dobles enlaces en su
estructura química.
Por otro lado, la ninhidrina se torna de un color
morado ya que está revelando un grupo aminoácido
presente en la fosfatidilserina y en la fosfatidil-
etanol-amina al formar complejos con este, y ausente
en el resto de sustancias, motivo por el cual sólo hay
dos manchas, y están a las alturas de estos dos
fosfolípidos.
El reactivo de bismuto va a identificar aquellos
fosfolípidos que tienen colina en su estructura
química; posterior a la cromatografía se va a
identificar aquellas manchas de color amarillo-
naranja, lo cual indica que los fosfolípidos de
lecitina, esfingomielina y lisolecitina van a tener
colina, que está unida a los ácidos grasos que forman
al fosfolípido. Este método físico de separación:
cromatografía en capa fina permite distinguir la
presencia de múltiples fosfolípidos en una misma
muestra, por lo que es posible obtener una
interpretación biológica del origen de la muestra.
Conclusión.
• La yema de huevo contiene tanto lípidos
neutros como fosfatidiletanolamina,
fosfatidilserina, fosfatidilcolina,
esfingomielina y lisofosfatidil colina.
• Fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina,
fosfatidilcolina, esfingomielina y
lisofosfatidil colina son fosfolípidos.
• Fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina
contienen aminoácidos.
• Lisofosfatidil colina, esfingomielina y
fosfatidilcolina tienen en su estructura un
grupo colina.
PREGUNTA EXTRA
Diferencia entre cromatografía en papel y en
capa fina.
Cromatografía en papel: Pertenece a la categoría
"Cromatografía de líquido”, la fase estacionaria se
compone de una cinta de papel introducida
verticalmente en un recipiente de cristal y la fase
móvil de un líquido, el movimiento de la fase móvil
se produce debido a la fuerza capilar. Un campo de
uso de la cromatografía en papel es el análisis de
mezclas.
Cromatografía en capa fina: La cromatografía en
capa fina pertenece a la categoría "Cromatografía de
líquidos" y el principio de funcionamiento es el
mismo que el de la cromatografía en papel. La
diferencia entre ambos procedimientos se encuentra
en la fase estacionaria, que en el caso de la
cromatografía en capa fina se compone de materia
pulverizada como la alúmina, gel de sílice o celulosa
que se sitúan sobre plaquitas de vidrio. Las ventajas
de la cromatografía en capa fina son un tiempo de
ejecución rápido y una alta muestra de
comprobación.

Bibliografía
➢ Nelson, D. L. y Cox, M. M. (2009). Lípidos.
Principios de bioquímica de Lehninger (5a
ed. pp. 243). Ediciones Omega.
➢ Túnez Fiñana, I. y Muñoz, M. C. ().
Cromatografía en capa fina de lípidos (pp. 1-
3). Facultad de Medicina, Universidad de
Córdoba.
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
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➢ Conn, E. E.., Stumpf P. K.,Bruening G., Doi
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