Conceptos Generales de

Toxicología
Mg.Sc. Fernando García Ramón
diego.garcia@unat.edu.pe
investigacionesindda@lamolina.edu.pe
 Conceptos Generales

• Toxicología.
Rama de la ciencia que trata del estudio de
venenos y sustancias de efecto toxico.
• Veneno.
Cualquier substancia capaz de causar un efecto
dañino o deletéreo cuando es administrada a un
organismo vivo.
 Conceptos Generales
• Efecto deletéreo: interferencia con procesos
vitales de las células del organismo.
• Análisis de dosis respuesta.
– Caracterización de la relación entre la dosis de un
químico que es administrada a una población de
animales experimentales y la incidencia de un
efecto adverso determinado.
 Conceptos Generales
• Dosis. Cantidad total de un tóxico, droga u
otro químico administrado o ingerido por los
organismos.
• Dosis umbral. Dosis administrada por encima
de la cual se pueden medir los efectos tóxicos
o deletéreos.
• Dopaje «dosage». se expresa generalmente
como mg de toxico por kg de peso corporal.
Principales áreas de la toxicología:
• Mecanística. Estudia los mecanismos celulares,
bioquímicos y moleculares de la toxicología.
• Regulatoria: Decide en base a la toxicología
mecanística y descriptiva, los niveles seguros y los
tóxicos para un determinado xenobiótico.
• Descriptiva (referida a las evaluaciones toxicológicas
con animales o con cultivo de tejidos).

Casarett LJ, Doull J & Klaassen CD. 2008. Casarett and Doull's
toxicology: the basic science of poisons. McGraw-Hill.
 Mas Definiciones
• Xenobiotico.
– Término general usado para describir a cualquier
químico interactuando con un organismo.
– Dicha interacción no ocurre en las rutas
metabólicas normales del organismo.
– También se le asigna el nombre de compuesto
foráneo.
(Omaye, 2004)
 Toxicología de Alimentos
• Parte de la ciencia de la toxicología que se
enfoca en el análisis y en los efectos tóxicos de
sustancias bioactivas que son presentes en los
alimentos. (Shibamoto and Bjeldanes, 2009)
• En toxicología de alimentos se evalúa la
actividad toxica de una sustancia, la cual es
afectada por los diferentes componentes
químicos de los que forma parte la matriz del
alimento.
 Sinergismo y Potenciación
• En ambos casos: estado tóxico superior
cuando se compara el efecto toxico de
sustancias administradas simultáneamente o
en secuencia vs la suma de los efectos tóxicos
de las sustancias administradas de manera
individual.
• Tanto el sinergismo como la potenciación
representan interacciones entre los tóxicos
 Sinergismo vs Potenciación
• Hay dos xenobioticos y uno de ellos es
relativamente no tóxico cuando se
proporciona solo. (Potenciación 0+2=10)
• Término reservado (con frecuencia) para
cuando hay dos xenobioticos y los dos tienen
una toxicidad intrínseca apreciable. (Sinergia)
El efecto final es mayor a la suma de los
efectos individuales
 Tolerancia o Adaptación
Habilidad de un organismo de mostrar
insensibilidad a un xenobiotico que suele causar
efectos deletéreos.
En los animales superiores tolerancia se refiere a
la habilidad que los organismos adquieren de
resistir a un tóxico como resultado de una
exposición previa.
 Resistencia.

• Asociado a cambio en la composición genética

de la población.
• Implica selección y herencia en las
subsecuentes generaciones.
Paracelsus (1493–1541)

Considerado el padre de la
Toxicología. Postula que no es la
sustancia la que es dañina si no
la cantidad e la misma. Los
excesos. «todo lo que esta en
exceso es tóxico».
Incluso creía que sustancias
como el arsénico, mercurio y
plomo, podrían ser beneficiosas
si se administran en dosis muy
pequeñas y controladas.
 Problemas con el arsenico
• La presencia de arsénico inorgánico es de 0,03 mg/kg en el
pescado, de 0,1 mg/kg en el marisco y una proporción del 70% en
el resto de los alimentos.
• La Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentación (FAO) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) y
sus expertos en aditivos alimentarios (JEFCA), fija en 15
microgramos por kilo de peso corporal a la semana (equivalente a
2,1 microgramos de kilo por peso corporal al día)
• Los expertos de la EFSA han establecido un nuevo valor de
exposición, el BMDL 01, entre 0,3 y 8 microgramos de kilo por
peso corporal al día, basado en un pequeño estudio sobre el
cáncer de pulmón. Por su parte, los expertos en aditivos
alimentarios del JEFCA han establecido el intervalo BMDL entre 2 y
7 microgramos de kilo por peso corporal al día.
 Legado de Paracelsus
• La experimentación es esencial para
determinar la respuesta de un tóxico.
• Distinción del efecto tóxico del efecto
terapéutico. Efectos distinguibles por medio
de la dosis.
Curva de Dosis Respuesta

(Omaye, 2004)
Curva acampanada tipica para dosis vs mortalidad.

(Omaye, 2004)
(Casarett and Doull´s, 2008)
 Toxicología Aguda
• Describe los efectos de una o múltiples dosis
durante un periodo de 24 horas.
• Prueba de Toxicidad Aguda mas frecuente:
– LD 50 Valor obtenido de una curva de dosis
respuesta que permite comparaciones entre
sustancias.
Toxicidad (mayor en eje X) y potencia (Mayor en eje Y)

(Omaye, 2004)
 Margen de seguridad (pendiente de la curva)

(Omaye, 2004)
Margin of safety = TD1/ED99

Magnitud en el rango de dosis que se necesita para pasar desde un efecto no letal o
un efecto deseado hasta uno letal.
 PRUEBAS DE TOXICIDAD AGUDA.
I. Las pruebas de LD50 y LC50 fueron desarrolladas por Trevan en
1927.

• Se utiliza el método gráfico para estimar este valor y se basa en que el

efecto es cuántico (uno o nada)
• El porcentaje correspondiente a un grupo experimental es dependiente de
la dosis y que el efecto acumulativo sigue una distribución normal.
• La información que proporciona LD50 es de expresión de letalidad y no
refleja ningún otro efecto agudo.
• Requiere de números grandes de animales experimentales, valores LD50
no son repetibles de un laboratorio a otro pues dependen de la especie,
raza, edad, peso, sexo, salud, nutrición, contenido intestinal, ruta de
administración, condiciones de vivienda, temperatura, tiempo de vida,
estación, error humano.
• La información mas importante es la que proviene de estudios de
toxicidad crónica para los motivos reguladores, debido a que muy poca
información útil se deriva de la estimación de LD 50
• La extrapolación de estos valores a los humanos es muy difícil.
Osweiler GD. 1996. Toxicology. Williams & Wilkins.
 100%

Frecuencia acumulativa
A B

de respuesta
50%
Noel

Dosis

LD50A LD50B

Dosis diaria aceptable: ADI, valor usado en la regulación del

uso de pesticidas y aditivos alimentarios. Es la dosis que puede ser
ingerida durante todo el periodo de vida de individuo sin que
aparezca ningún efecto apreciable. 



 Otras aproximaciones
• LOEL, valor mas bajo en el que se empieza a
observar algun efecto.
• BMD, Dosis de referencia establecidas con la
ayuda de metodos matematicos y en las que
se incluyen en el analisis todos los datos de la
curva de dosis respuesta.
Curva típica que
muestra el efecto de
nutrientes.

(Omaye, 2004)

Hermesis: Fenómeno de dosis

respuesta caracterizado por un
efecto positivo a bajas
concentraciones.
Son por lo general substancias
requeridas para el normal
funcionamiento fisiológico de las
celulas., tales como hormonas,
alimentos etc.
(Shibamoto and Bjeldanes, 2009)
 LC50 ( Concentración letal media)
• Concentración de un químico a la cual cuando una
población de organismos experimentales es
expuesta, se considera fatal al 50% de los organismos
bajo las condiciones de prueba establecidas.

• Este valor es normalmente utilizado en vez de LD50

en estudios de toxicología acuática y toxicología de
inhalación.
 LD50 (Dosis letal media):
• Cantidad de un compuesto químico el cual cuando es aplicado
directamente al organismo experimental es estimado como
fatal al 50% bajo las condiciones establecidas en la prueba.
Valores de LD50 son considerados como los estándares de
comparación para la toxicidad aguda entre tóxicos y entre
especies.
• Estos valores se pueden determinar gráficamente del ploteo
del logaritmo de la dosis contra la probabilidad expresada en
Probits (Unidades de probabilidad).
• Se tabulan el número de animales que mueren en un periodo
de 14 días después de un dosaje único.
Todas las sustancias son venenos
(Paracelcus 1493 – 1541)
 RAZONES POR LAS QUE SE USA EL LD 50:

• Cuando este test se realiza apropiadamente proporciona

información no solo del LD50 sino también de la causa y
tiempo de la muerte, sintomatología, efectos agudos no letales,
órganos afectados y reversibilidad de los efectos no letales.
• Información concerniente al modelo de acción y detoxificación
metabólica que puede ser deducida de la pendiente de la curva
de mortalidad.
• Los resultados son la base para el diseño de estudios
subcrónicos subsecuentes.
• La prueba es útil como una primera aproximación a los riesgos
de los trabajadores.
• La prueba es rápidamente completada.
Casarett LJ, Doull J & Klaassen CD. 2008. Casarett and Doull's toxicology: the basic
science of poisons. McGraw-Hill.
 CLASIFICACION DE LA TOXICIDAD:

Clase
 LD50 Ejemplo


(mg/Kg)

Súper Tóxico
 5
 TCDD

Extremadamente 5 - 50
 Picrotoxina

tóxico

Muy Tóxico
 50 - 500
 Fenobarbital

Moderadamente 500 - 5000
 Sulfato de
Tóxico
 Morfina

Ligeramente 5000 - 15000
 Etanol

Tóxico

 Toxicidad Sub-aguda
• Es la evaluación de los efectos toxicos
observados por un periodo de hasta 30 días.

Toxicidad Sub-cronica
• Es la evaluación de los efectos toxicos
observados por un periodo entre uno y tres
meses. Periodo donde se observarian la
mayoría de los efectos tóxicos con excepción
de efectos carcinogénicos y reproductivos.
 Toxicidad Crónica
• Es evaluada en periodos de exposición de mas
de tres meses. Se considera el tiempo de vida
promedio para el animal.
• Genotoxicidad
• Mutagenicidad
• Teratogenicidad.
 Toxicidad a largo plazo
• Se estudia administrando dosis repetidas
durante un periodo que alcance al menos para
una especie la mayor parte de su vida y
durante varias generaciones.
• Ratas (2 años); ratones (1 ½ años)
• Otras especies utilizadas son el cerdo, el perro
y el mono. También se utiliza la especie
Drosófila para estudios de posible acción
mutagénica.
 Mutagenicidad
Protocolo de prueba de Ames
 Toxicología Moderna
• Ciencia, aplicada y multidisciplinaria. (física,
biología y medicina)
– Se examinan aspectos adicionales como
solubilidad de los xenobióticos (endobioticos),
rutas de exposición, distribución y excreción.
– Se estudian las rutas de biotransformación con las
enzimas del metabolismo.

Casarett LJ, Doull J & Klaassen CD. 2008. Casarett and Doull's toxicology: the basic
science of poisons. McGraw-Hill.
 Evaluación de la toxicidad
• Propiedades físicas químicas para un compuesto en
cuestión.
• Destino medioambiental y rutas de exposición.
– Estudios de degradación (hidrólisis, fotodegradación).
Degradación en el suelo
– Movilidad y disipación en el suelo, agua y aire.
– Acumulación en plantas, animales acuáticos, animales
salvajes terrestres plantas y animales alimenticios.
 Efectos en la vida salvaje

• Especies seleccionadas de animales

salvajes, aves, peces e invertebrados.
• Toxicidad aguda, acumulación y
reproducción en condiciones de
laboratorio simuladas o condiciones de
campo actuales.
Evaluación toxicológica de un químico nuevo.
Formar Grupos
 CONSIDERACIONES DE PRUEBAS PARA DETERMINAR
TOXICIDAD USANDO ANIMALES

• Uso de Animales, se basa en la siguiente asunción.

• El efecto producido por un compuesto en el laboratorio a un
animal de laboratorio calificado, es el mismo efecto producido
en los humanos.
• El efecto tóxico en los humanos estimado en base a la dosis
por unidad de superficie corporal esta usualmente en el
mismo rango al de aquellos animales experimentales.
• Sobre la base de peso corporal los humanos son
generalmente mas vulnerables que los animales
experimentales probablemente por un factor de 10.
 PROBLEMAS DEL USO DE ANIMALES EN PRUEBAS
TOXICOLOGICAS:

• El bienestar de los animales usados en las pruebas

toxicológicas (sociedades protectoras)
• Extrapolación de efectos obtenidos a altas dosis a
efectos obtenidos a bajas dosis.
• Selección apropiada de los animales y de sus líneas
genéticas.
• El alto costo y complejidad de los protocolos de
prueba relativos a los beneficios esperados. Cada
día se requieren mas pruebas a las ya existentes.
 II. Irritación de los ojos:
• Los animales usados preferentemente son los conejos albinos. Mediante
esta prueba se adiciona directamente el material a estudiar dentro del saco
de la conjuntiva de un ojo y el otro queda como control.
• El material permanece hasta 24 horas periodo después del cual puede se
enjuagado y el ojo es calificado después de 1,2,3 días.
• La calificación es subjetiva y se califica en base a la apariencia de la cornea
principalmente en base a opacidad. El iris en función a apariencia y
reacción a la luz. La conjuntiva en función a la rojizidad debido a los vasos
sanguíneos y los párpados en función a su hinchamiento. Fluoresceína se
puede añadir, pues este compuesto es fácilmente absorbido por los tejidos
dañados, los cuales fluorescen cuando los ojos son eliminados.
• Estas pruebas generalmente levanta todos los reclamos por los derechos
de los animales y es considerada inhumana. también es criticada debido a
las concentraciones altas y alta sensibilidad del ojo de los conejos. “Draize
test”
• Existen intentos para poder sustituir este test por pruebas in-Vitro usando
células cultivadas de animales muertos.
 III. Irritación de piel:
• También existe un Draize test para la piel en conejos.
El conejo es preparado por remoción de la pelambre
en sus espaldas por depiladoras eléctricas. el
químico es añadido en parches sobre la piel
mantenidos en contacto por cerca de cuatro horas.
• Algunos otros estudios pueden requerir la aplicación
sobre la piel raspada. El grado de irritación de la piel
es calificado desde formación de eritema y escarcha
y formación de edema y acción corrosiva.
 IV. Sensitivaciones
Proporciona información acerca de la
capacidad de un químico de sensitivar la piel.
El conejillo de indias es el animal preferido
para estas pruebas incluyendo las pruebas
Draize, la prueba epicutánea abierta, la prueba
de Buehler, la prueba completa del adyuvante
Freund, pruebas de optimización.
Hipersensitividad tipo III, entre otras.
 PRUEBAS SUB-AGUDAS:

• Son llevadas a cabo para obtener información

acerca de la toxicidad de un químico después
de su repetida administración como una
ayuda para establecer la dosis en los estudios
sub-crónicos. Un protocolo típico es
proporcionar tres a cuatro diferentes dosajes
de los químicos a los animales experimentales
y mezclarlos con la comida.
 PRUEBAS SUB-CRONICAS:
• La exposición subcrónica puede durar por diferentes periodos
de tiempo, pero 90 días es el periodo de tiempo mas común.
Los animales debe ser observados dos veces a diario por
signos de toxicidad incluyendo cambios en el peso corporal
consumo en la dieta, cambios en el color de la piel y textura,
problemas respiratorios y cardiovasculares, anormalidades
motoras y de comportamiento y aparición de tumoraciones
palpables.
• Se emplean generalmente tres dosis: Dosis alta: dosis que sin
embargo no produce fatalidades en mas del 10. Dosis baja:
Que no produce efectos aparentes. Dosis intermedia: 10-20
ratas 4-6 perros de cada sexo por dosis.
 ESTUDIOS CRÓNICOS:
• Realizados en forma similar a los estudios sub-crónicos; sólo
que el periodo de exposición es mayor de tres meses.
• En los roedores las exposiciones crónicas son usualmente de
tres meses a dos años. En no roedores es usualmente de un
año.
• La selección de la dosis es crítica en los estudios para asegurar
que la mortalidad prematura por toxicidad crónica no limita el
número de animales sobrevivientes a la expectación normal
de vida. Muchas agencias establecen que la dosis sea la
dosis máxima tolerada (MTD).
 Toxicidad metabólica
• Tiene por objetivo conocer la acción de las
sustancias en el metabolismo como conocer
los mecanismos de detoxificación y de
inducción de enzimas hepáticos o
microsomales capaces de metabolizar la
sustancia. Para estos estudios se utilizan
compuestos con marcadores de diversos tipos.
Después de estudiar estos efectos en animales
se puede pasar a humanos.
 Toxinas en Alimentos
• Para determinar la presencia de toxinas en los
alimentos:
– Conocimiento de tipo de molécula. Proteína,
alcaloide, glucósido, sustancia inorgánica u
orgánica etc.
– Estado físico, gas, líquido, aerosol, polvo. Etc.
– Mecanismo de acción. (a fin de determinar las
formas químicas en las que es tóxica)
– Origen (Microbiano, contaminante
medioambiental, etc.). Ruta de exposición
 Determinación de Toxinas
• Cromatografía líquida (CL).
Principales partes de un sistema de Cromatografía Líquida de tipo HPLC según Reuhs y Rounds (2010)
Cromatografía gaseosa (GC).
En un sistema de este tipo la fase móvil es un gas,
generalmente una sustancia inerte como el nitrógeno, helio u
otros.
. Esquema de un cromatógrafo de gases (Barquero-Quirós, 2006).
Cromatografía líquida (CL) o gaseosa (CG) acoplada a
un Espectrómetro de Masas (MS)

• Mediante esta técnica, las sustancias, previamente

separadas por la cromatografía, son introducidas a
una fuente iones y a un espectrómetro de masas.
Ocurre entonces la ionización de los componentes
de la muestra y los iones son separados en función
a su masa. Para ello pasan por una parte del
equipo llamada quadrupolo el que genera campos
eléctricos capaces de separar los iones en función
a la tasa Masa/carga (M/z). Estos valores son
utilizados posteriormente para la identificación de
los diferentes componentes.
Espectrometría de masas por plasma
inductivamente acoplado (ICPMS).

• Es una técnica que se aplica para investigar la

presencia de contaminantes metálicos en los
alimentos tales como arsénico, cadmio, plomo y
mercurio, pueden detectarse muchos más elementos.
• Por medio de esta técnica la muestra, después de ser
digerida por medio de ácidos, es nebulizada hasta
aerosol y transportada hasta un plasma de argón
donde alcanza altas temperaturas transformándose en
iones los que son conducidos al espectrómetro de
masas donde son identificados
 ELISA

Fuente: Gráfico tomado de

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bookres.fcgi/stryer/ch4f35.gif
 Comparación de algunas técnicas utilizadas en el
análisis del nivel de contaminación con aflatoxinas.

Característica del método HPLC ELISA

Límite de detección (ng/g) <1 1-5

Limpieza por muestra (min) 60-120 10-30

Detección por muestra (min) 120 10

Cuantificación por muestra (min) 30 1-5

Tiempo total (min) 270 15 - 50

Fuente: (Lee y Kennedy, 2007)

 Análisis de toxinas por métodos
moleculares.
• La biología molecular

… estudia los diferentes procesos

desarrollados en los seres vivos a nivel
molecular; tales como reacciones bioquímicas al
nivel molecular, donde se aplican diferentes
disciplinas para buscar el entendimiento de los
diferentes sistemas que mantienen funcionando
la célula…
 ADN: molécula de información y regulación celular.
Cada nucleótido 3’hidroxido

contiene: un
azúcar
(desoxirribosa),
una base
nitrogenada
(adenina: A,
timina: T, citosina:
C o guanina: G) y La secuencia
un grupo de de unión de
enganche el los
fosfato. nucleótidos
es típica del
gen.

Turnpennyy Ellard ( 2009).

 CONCEPTOS BASICOS
• Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

…Secuencia de reacciones que resultan en la

amplificación catalizada por una ADN polimerasa
termoestable, de una secuencia específica de
nucleótidos dentro de una cadena individual de ADN.
Esta secuencia es delimitada por los “primers”, llamados
en español “cebadores”. La unión se da por los
nucleótidos complementarios; los nucleótidos son:
adenina, timina, citosina y guanina; la adenina es
complementaria con timina (A-T) y la guanina con la
citosina (C-G).
 PCR

Marmiroli y Maestri, 2007)

PCR

(Purves W. K., et al., 2001)

 CONCEPTOS BASICOS
• PCR en tiempo real o PCR cuantitativa.
… es una modificación de la técnica de PCR, por
la cual se optimizan los cebadores, los tiempos y
temperaturas necesarios para la amplificación
de una secuencia específica, generalmente más
pequeñas…con un sistema de detección que
utiliza un fluorímetro para un monitoreo
instantáneo y constante durante el periodo de
amplificación….
Sensores utilizados en PCR tiempo real
Partes de un Equipo de PCR en tiempo
real

Tomando como modelo el LightCycler® de Roche

Preguntas