Qu significa LD50?

LD son las siglas de "Dosis letal". LD50 es la cantidad de un material determinado completo de una sola vez, que
provoca la muerte del 50% (una mitad) de un grupo de animales de prueba. El LD50 es una forma de medir el
envenenamiento potencial a corto plazo (toxicidad aguda) de un material.
Los toxiclogos pueden utilizar muchas clases de animales pero muy a menudo las pruebas se hacen con ratas y
ratones. Usualmente se expresa con una cantidad de qumico administrado (miligramos) por 100 gramos (o
kilogramos) del peso corporal del animal. EL LD50 se puede encontrar por cualquier va de entrada o
administracin pero los mtodos de administracin dermal (aplicado en la piel) y oral (administrado por la boca)
son los ms comunes.
Qu significa LC50?
LC son las siglas de "Concentracin Letal". Los valores LC usualmente se refieren a la concentracin de un
qumico pero en estudios ambientales tambin puede significar la concentracin de un qumico en agua.
Para experimentos de inhalacin, la concentracin del qumico en el aire que mata el 50% de los animales de
ensayo en un tiempo determinado (usualmente 4 horas) es el valor de LC50.
Por qu se estudia el LD50?
Los qumicos pueden tener un alto rango de efectos en nuestra salud. Dependiendo de cmo se utilizar el
qumico, se pueden requerir muchas clases de pruebas de toxicidad. Puesto que diferentes qumicos provocan
diferentes efectos txicos, comparar la toxicidad de uno con otro es difcil. Se puede medir la cantidad de un
qumico que provoca dao al rin, por ejemplo, pero no todos los qumicos daarn al rin. Se puede decir que
el dao a los nervios se observa cuando se administran 10 gramos de qumico A, y el dao del rin se observa
cuando se administran 10 gramos del qumico B. Sin embargo, sta informacin no dice si A o B es ms txico
porque no se sabe cal dao es ms crtico o nocivo.
Por lo tanto, para comparar la potencia txica o intensidad de diferentes qumicos, los investigadores deben
medir el mismo efecto. Una forma de realizar pruebas de letalidad (las pruebas LD50) es midiendo qu tanto de
un qumico se necesita para provocar muerte. Este tipo de prueba se conoce tambin como prueba "cuantal"
porque mide un efecto que "ocurre" o "no ocurre".
Quin invent la idea de un LD50?
En 1927, J.W. Trevan intent encontrar una frmula para estimar la relativa potencia de envenenamiento de
drogas y medicinas usadas en esa poca. Desarroll la prueba LD50 porque el uso de muerte como "meta"
permite comparaciones en qumicos que envenenan al cuerpo en muchas formas diferentes. A partir del trabajo
temprano de Trevan, otros cientficos han desarrollado diferentes enfoques para mtodos ms directos y rpidos
de obtener el LD50.
Cules son otros trminos de dosis de toxicidad de uso comn?
LD01 Dosis letal para 1% de la poblacin animal de ensayo
LD100 Dosis letal para 100% de la poblacin animal de ensayo
LDLO La dosis ms baja que provoca letalidad
TDLO La dosis ms baja que provoca un efecto txico.
Por qu los valores LD50 y LC50 son una medida de toxicidad aguda?
La toxicidad aguda es la habilidad de un qumico de provocar efectos adversos relativamente pronto luego de una
administracin oral o una exposicin de 4 horas a un qumico en el aire. "Relativamente pronto" se define
usualmente como un perodo de minutos, horas (hasta 24) o das (hasta cerca de dos semanas) pero rara vez
ms all de esto.
Cmo se realizan las pruebas LD/LC50?
En casi todos los casos, las pruebas LD50 se realizan utilizando una forma pura del qumico. Rara vez se estudian
las mezclas.
El qumico se puede dar a los animales por la boca (oral); aplicndolo en la piel (dermal); por inyeccin en sitios
como venas arteriales (intravenosa), en los msculos (ej., intramuscular) o en la cavidad abdominal (i.v. intraperitoneal).
El valor LD50 obtenido al final del experimento se identifica como el LD50 (oral), LD50 (piel), LD50 (i.v.), etc.,
segn corresponda. Los investigadores pueden hacer la prueba con cualquier especie animal pero usan ratas o
ratones comnmente. Otras especies incluyen perros, hmsters, gatos, conejillos de indias, conejos y monos. En
todo caso, el valor LD50 se expresa como el peso del qumico administrado por kilogramo de peso corporal al
animal y establece la prueba animal utilizada y la ruta de exposicin o administracin; LD50 (oral, rata)-5 mg/kg,

LD50 (piel, conejo) 5 g/kg. Por lo tanto, el ejemplo, "LD50 (oral, rata) 5mg/kg significa que 5 miligramos de ese
qumico por cada kilogramo de peso corporal de la rata, cuando se administra en una dosis bucal, provoca la
muerte del 50% del grupo de ensayo.
Si los efectos letales por respirar un compuesto se estn probando, el qumico (usualmente un gas o vapor) se
mezcla primero en una concentracin conocida en una cmara de aire especial en donde se colocan los animales
de prueba. Esta concentracin usualmente se cotiza como partes por milln (ppm) o miligramos por metro cbico
(mg/m3). En este experimento, la concentracin que mata el 50% de los animales se llama un LC50
(Concentracin Letal 50) en vez de un LD50. Cuando se reporta un valor LC50, tambin se debe establecer el tipo
de prueba animal estudiado y la duracin de la exposicin, ejemplo, LC50 (rata) - 1000 ppm/ 4 hr o LC50 (ratn) 5mg/m3/ 2hr.
Cul informacin LD50 es la ms importante para efectos de seguridad y salud ocupacional?
La inhalacin y la absorcin por la piel son las rutas ms comunes por las que los qumicos en el lugar de trabajo
entran al cuerpo. Por lo tanto, lo ms relevante desde el punto de vista de exposicin ocupacional son las
pruebas de inhalacin y de aplicacin por piel. A pesar de este hecho, el estudio de letalidad realizado ms
frecuentemente es el LD50 oral. Esta diferencia ocurre porque dar qumicos a los animales por la boca es mucho
ms fcil y menos costoso que otras tcnicas. Sin embargo, los resultados de los estudios orales son importantes
para drogas, intoxicacin por alimentos, e intoxicacin domstica accidental. Las intoxicaciones orales
ocupacionales pueden darse por contaminacin de los alimentos o cigarrillos por manos sucias, y por ingestin
accidental.
Cmo se compara un valor LD50 con otro y qu significa para los humanos?
En general, entre ms bajo sea el valor LD50, ms txico es el qumico. Lo opuesto es tambin cierto: entre ms
alto el valor LD50, ms baja la toxicidad.
El LD50 da una medida de la toxicidad aguda o inmediata de un qumico en un grupo de cepa, sexo y edad de
una especie animal en particular que se est probando. El cambiar cualquiera de stas variables (ejemplo, tipo de
animal o edad) puede resultar en un valor LD50 diferente. La prueba LD50 no se dise ni se pretende para dar
informacin sobre los efectos de exposicin a largo plazo de un qumico.
Una vez que se tiene un valor LD50, se puede comparar con otros valores utilizando la escala de toxicidad. A
veces ocurre confusin porque estn en uso diferentes escalas de toxicidad. Las dos escalas ms comnmente
usadas son la "Escala Hodge y Sterner" y la "Escala Gosselin, Smith y Hodge". Estas tablas difieren en la
categorizacin numrica dada a cada clase y en los trminos utilizados para describir cada clase. Por ejemplo, un
qumico con un valor oral LD50 de 2 mg/kg, se clasificar como "1" y "altamente txico" de acuerdo con la escala
Hodge y Sterner (ver tabla 1) pero se clasificarn "6" y "super txico" de acuerdo con la escala Gosselin, Smith y
Hodge (ver tabla 2). Es importante hacer referencia a la escala que se est utilizando cuando est clasificando un
compuesto.
Tambien es importante saber que el valor real LD50 puede ser diferente para un qumico dado dependiendo de la
ruta de exposicin (por ejemplo, oral, dermal, inhalacin). Por ejemplo, algunos LD50 para diclorvos, un
insecticida comnmente utilizado en bandas de pesticidas domsticos, se detallan a continuacin:
TITULACION de VIRUS
1.- Introduccin
"Titular" una preparacin de cido, base, anticuerpo, antgeno, significa determinar la cantidad del elemento en
cuestin que esa preparacin contiene. Lo mismo se aplica en el caso de las preparaciones virales.
Para preparar los sustratos celulares infectados para inmunofluorescencia, ELISA, inmunoperoxidasa o
hibridizacin es necesario conocer la cantidad de virus conque se trabaja, es decir el "ttulo" de la suspensin
viral. Esto es as porque para que una infeccin viral sea eficiente se debe trabajar con determinada
"multiplicidad de infeccin" (m.i.), que se define como la cantidad de virus inoculado por clula del cultivo celular.
La obtencin de resultados reproducibles depende del control de todos los elementos que intervienen en el
ensayo, y la m.i. es uno de ellos, que debe definirse para cada procedimiento.
Adems, en ciertos casos de aislamiento viral puede resultar importante conocer cul es la cantidad de virus
aislada.
2.- Conteo de partculas virales
Para determinar la cantidad de virus en un material puede recurrirse al conteo directo de partculas virales
aplicando tcnicas de microscopa electrnica. Este mtodo es tcnicamente complejo y tiene la grave
desventaja de no considerar la actividad biolgica de las partculas virales.
Qu significa sto? Un virus es una partcula macromolecular que se detecta debido a su actividad biolgica, que
se manifiesta cuando la partcula infecta un husped susceptible. La visualizacin de esa actividad puede
consistir en la observacin de efecto citoptico (ECP), o formacin de sincicios o tumores en un cultivo celular,

formacin de pstulas en la membrana corioalantoidea o muerte de un embrin de pollo, muerte o enfermedad

de un animal de experimentacin. Desde el punto de vista biolgico lo que interesa es la expresin de la
actividad biolgica (o infectiva) de la partcula viral, ya que existen partculas virales que por defectos en su
material gentico u otro tipo de alteraciones en su estructura no son infectivas, es decir no tienen actividad
biolgica. Estas partculas estn presentes en todas las preparaciones virales, en cantidades variables (1).
Para fines diagnsticos propiamente dichos, o para la preparacin de reactivos para diagnstico, lo que interesa
cuantificar es la capacidad infectiva del virus, para lo cual no es adecuado el conteo de partculas por
microscopa electrnica. Debe observarse el efecto que el virus produce en el husped inoculado. Si se observa
un solo ejemplar de husped, el efecto o respuesta es de "todo o nada", es una respuesta negativa o positiva.
Por ej.: hay efecto citoptico o no lo hay; el animal de experimentacin muere o sobrevive, aparecen pstulas en
el embrin de pollo o no. Para poder hacer una cuantificacin deben utilizarse varias rplicas del husped elegido
(cultivos celulares, animales, huevos embrionados). Cada rplica se denomina "unidad de prueba". Cuanto mayor
es el nmero de unidades de prueba, ms precisa resulta la determinacin
3.- Mtodo de Titulacin por el Punto Final
3.1.- Curva Dosis-Respuesta
Si se grafica "Efecto viral" versus "cantidad de virus" se obtiene una curva sigmoidea, "Dosis- Respuesta" clsica
(Fig. 1). Por esta razn la forma habitual y ms sencilla de expresar ttulos virales es segn el nmero de dosis
presentes en la muestra. La "respuesta" se mide como "porcentaje de efecto", siendo el efecto cualquiera de los
mencionados anteriormente, segn el virus y el husped. La "Dosis" se expresa como dilucin de la muestra viral.
En general se usan diluciones al dcimo, y se trabaja con el log10 de las diluciones.
Puede expresarse el ttulo como Dosis Infecciosa Mxima o Dosis Infecciosa Mnima. En los casos en que la
infectividad se evidencia por la muerte de animales de laboratorio la denominacin es Dosis Letal Mxima o
Mnima respectivamente.
Observando en la Fig. 1 la forma de la curva "Dosis-Respuesta"-- en nuestros trminos "Porcentaje de EfectoDilucin de muestra" -- vemos que en las zonas de efecto mximo y mnimo no puede asignarse unvocamente
un "Porcentaje de Efecto" a una determinada "Dosis o Dilucin". Para una determinacin precisa debe trabajarse
en una zona de diluciones tal que a una pequea variacin en la dilucin le corresponda una variacin
claramente detectable en la respuesta. Por esta razn se elije la zona correspondiente al 50% de efecto, y el
ttulo de la muestra se expresa como nmero de "Dosis Infecciosas 50%" (DI50), que representa la dosis (dilucin
de muestra) que produce efecto (muerte o enfermedad del animal o embrin, efecto citoptico en cultivos
celulares) en el 50% de las unidades de prueba. Segn el tipo de efecto buscado la DI50 puede expresarse como
Dosis Letal 50%, Dosis Infectante de Cultivo de Tejidos 50%, Dosis Infectante de Embriones 50% (DL50, DICT50,
DIE50, respectivamente).
3.2.- Mtodo de Reed y Muench
Normalmente el 50% del efecto buscado no corresponde exactamente a una de las diluciones de trabajo, por lo
que es necesario hacer una interpolacin matemtica para definirla. El mtodo ms empleado para este fin es el
de Reed y Muench . Se basa en la suposicin de que el nmero de unidades de prueba afectadas vara
proporcionalmente al log10 de la dilucin, es decir que a diluciones menores (mayor concentracin de virus) el
porcentaje de efecto ser mayor que a diluciones mayores (menor concentracin de virus). Adems, se supone
que en la zona cercana al 50% de Efecto ste vara linealmente con la dosis. Es muy importante no omitir
ninguna dilucin intermedia.
Ejemplo: Supongamos que se inoculan 6 ratones por dilucin y que el efecto buscado es la muerte de los ratones.
Se confecciona la siguiente tabla con los resultados (adaptada de (1)):
El anlisis del control metablico (ACM o MCA en ingls) o Teora del Control Metablico (TCM o MCT en ingls) es
un desarrollo matemtico para la descripcin de vas metablicas, de sealizacin y genticas. ACM cuantifica
cmo las variables, cmo los flujos o las concentraciones de metabolitos, dependen de los parmetros de la red
en que est inmersa. En particular, es capaz de describir cmo las propiedades que dependen de la red (descritos
por los coeficientes de control) dependen de las propiedades locales (descritos por los coeficientes de elasticidad)
[Kacser & Burns 1973; Heinrich & Rapoport 1974; Kacser 1983; Fell & Sauro 1985. Por lo tanto, en estudios del
ACM se estudia el control relativo ejercido por cada uno de los pasos (reacciones enzimticas) en las variables del
sistema (flujos y las concentraciones de metabolitos). Este control se mide mediante la aplicacin de una
perturbacin mientras se mide o estudia el efecto en la variable de inters desps de que el sistema ha
alcanzado un nuevo estado estacionario.
El problema inverso, es decir el clculo de los coeficientes de elasticidad como funcin de los coeficientes de
control, ha sido tambin estudiado como parte de una disciplina denominada Diseo del Control Metablico
(DCM) [Acerenza 1993]. Este tipo de disciplinas (tanto el ACM como el DCM) estn inmersos en la disciplina
denominada biologa de sistemas.

El coeficiente de elasticidad: es un constructo matemtico adimensional que cuantifica la capacidad de respuesta

de una reaccin enzimtica a cambios en un parmetro (e.g. concentracin de sustrato, producto, efectores,
temperatura, etc.) mientras los dems parmetros permanecen constantes. Operativamente se define como el
cociente entre el cambio relativo en la velocidad enzimtica (v) y el cambio relativo en el parmetro (P). El valor
del coeficiente de elasticidad nos proporciona, por lo tanto, una idea de la capacidad de respuesta de una
reaccin enzimtica al cambio en un determinado parmetro. De manera ms explcita, un valor alto nos dice que
el sistema posee una mayor sensibilidad y una baja sensibilidad en caso contrario.
El coeficiente de control: mide el cambio relativo en estado estacionario en un sistema variable (e.g. flujos o
concentraciones) en respuesta a un cambio relativo en un parmetro (e.g. actividad enzimtica). Los dos
principales coeficientes de control son los de flujo y concentracin. Es fcil demostrar que existe una relacin
entre el coeficiente de elasticidad, el coeficiente de control y el coeficiente de respuesta. Los coeficientes de
respuesta nos dicen qu tan sensible es un flujo o la concentracin de un metabolito a cambios de un efector de
carcter externo (I) y se define como el cociente entre el cambio relativo en el flujo (o concentracin de
metabolito) y el cambio relativo del parmetro externo.
Uno de los resultados fundamentales del ACM son los llamados teorema de suma-cin (Kacser & Burns, 1979).
Estos teoremas demuestran que el control es, en principio, compartido por todas las reacciones en el sistema.
Cuando el coeficiente de control con respecto a una reaccin cambia, al menos el valor de otro coeficiente de
control debe cambiar para compensar ese cambio. Matemticamente estos teoremas muestra que la suma de los
coeficientes de control para un flujo determinado suman uno y para un me-tabolito cero.
Se define como reaccin (o enzima) limitante, a aquella reaccin (enzima) cuyo co-eficiente de control de flujo es
igual a la unidad. Encontrar la enzima limitante de una va implica encontrar aquella enzima o paso que controla
toda la va convirtindola en un ob-jetivo ideal para el aumento de su flujo. Los teoremas de sumacin indican
algunas dificultades a la hora de disear un frmaco que altere alguna variable metablica, ya que en principio,
implican un reparto del control. El coeficiente de control de flujo medio es el inverso de la cantidad de reacciones
del sistema lo que sugiere que, para sistemas grandes, la mayor parte de los coeficientes de control de flujo
sern pequeos. Una droga actuando sobre una reaccin elegida al azar, tendr baja probabilidad de producir un
efecto marcado sobre el flujo de inters. Debido a la normalmente baja sensibilidad del flujo al cambio en las
velocidades, para el aumento de un flujo, podra ser necesario el aumento simultneo de ms de una actividad
enzim-tica. Este tipo de modulacin mltiple es la que se encuentra en la base del mtodo uni-versal (Kacser &
Acerenza, 1993).
Un efector externo cambiar las concentraciones y los flujos del sistema. Sus efectos estn caracterizados por un
conjunto de coeficientes de control, denominados coeficientes de respuesta, que describen el cambio relativo en
una variable del sistema causado por un cambio infinitesimal relativo en el efector. Primeramente, consideremos
que el efector externo, A, afecta nicamente una de las enzimas del sistema, Ei, que cataliza la reaccin vi.
Entonces vi tendr una elasticidad eviA, distinta de cero. Esta velocidad tendr un cierto control sobre cierta
variable del sistema de inters como por ejemplo, Jk, caracterizado por el coeficiente de control
correspondiente:CJkvi. El efecto que produce A sobre la variable del sistema Jk puede ser calculado como el
producto de ambos coeficientes y se denomina coeficiente de respuesta parcial (Kholodenko B. , 1988):
(_^(v_i))r_A^(J_k ) = C_(v_i)^(J_k )._A^(v_i )
Kacser en 1973 define el coeficiente de respuesta de una variable Jk, del sistema a un parmetro externo, A y lo
nota:
R_A^(J_k )=A/J_k .((J_k)/A)
Solamente en el caso en que A afecte a una sola reaccin se cumple que:
En el caso en donde el efector altere varias reacciones, es demostrado por Kholodenko en 1988, que el
coeficiente de respuesta a un parmetro externo es igual al promedio ponderado de los coeficientes de
elasticidad con respecto al efector, donde los factores de ponderacin son los coeficientes de control de las
correspondientes enzimas:
Cabe remarcar, que este tipo de anlisis solo se aplica a sistemas en estado esta-cionario en donde ocurren
cambios infinitesimales o muy pequeos (casos tal vez no apli-cables al estudiar por ejemplo los efectos de una
hormona o el encendido y apagado de un gen). Sin embargo, ciertos desarrollos tericos han acortado esta
brecha existente en-tre la teora tradicional y sus extensiones a grandes cambios y regmenes no estacionarios.
Por teora para grandes cambios ver: (Acerenza, 2000; Acerenza & Ortega, 2007; Ainscow & Brand, 1999d;
Ortega & Acerenza, 2002; Small & Kacser, 1993a) (1993b) y para sistemas alejados del estado estacionario o
tiempo dependientes (Acerenza, Sauro, & Kacser, 1989; Cascante, Torres, Franco, Melndez-Hevia, & Canela,
1991; Cascante, Melndez-Hevia, Kholodenko, Scicilias, & Kacser, 1995; Heinrich & Reder, 1991; Melndez-Hevia,
Torres, Sicilia, & Kacser, 1990; Reijenga, Westerhoff, & Snoep, 2002
Coeficiente de regulacin particional En general, cuando sobre un sistema se ejerce un cambio en un parmetro,
este cambio generar una serie de cambios a lo largo de las distintas vas que terminaran repercutiendo sobre las
distintas variables del sistema (flujos, concentraciones de intermediarios). En particular, si nos enfocamos sobre

un paso, el cambio producido sobre ste, puede ser disecado y separado en las contribuciones que se produzcan
a causa del efecto que tenga cada uno de los intermediarios metablicos del sistema sobre l. En este sentido, el
coeficiente de regulacin particional (Sauro, 1990) o elasticidad condicional (Holzhutter, Jacobasch, & Bisdorff,
1985) nos dice que contribucin ha tenido cada componente sobre cambio neto que se ha producido. De esta
manera, las concentraciones a las que este paso sea sensible tendrn un coeficiente de regulacin particional
distinto de cero, y un valor igual a cero, para aquellas concentraciones que no estn afectando el paso en
estudio. El coeficiente de regulacin particional sobre el flujo Jj debido a Si cuando se modifica vk se define como
el producto entre tres factores: el coeficiente de elasticidad de vk con respecto a Si, el coeficiente de control de Si
con respecto a vk y el inverso del coeficiente de control del flujo Jj con respecto a la velocidad vk:
Sauro en su artculo de 1990, demuestra la suma de los coeficientes de regulacin particional debe ser igual a
uno, o lo que es igual:
Esta ecuacin nos permite discernir en un anlisis con coeficientes de regulacin parti-cional obtenidos
experimentalmente si estamos teniendo en cuenta todos los efectores internos o si estamos obviando alguno.