PROPROPUESTA PARA PRODUCCIÓN DE INSULINA RECOMBINANTE

KAREN NICOLE MUÑOZ MADERO

MIRIAM JHOANA GERRERO GASTELUM

1. Balance de masa teórico para el crecimiento

• CRECIMIENTO
𝑪𝟔 𝑯𝟏𝟐 𝑶𝟔 + 𝑶𝟐 + 𝑵𝟐 + 𝑪𝑯𝟏 . 𝟗𝟒𝑶𝟎 . 𝟓𝟑𝑵𝟎 . 𝟐𝟓𝑷𝟎.𝟎𝟐𝟓 = 𝑪(𝟐𝟓𝟕) 𝑯𝟑𝟖𝟑 𝑵𝟔𝟓 𝑶𝟕𝟕 𝑺𝟔 + 𝑯𝟐 𝑶 + 𝑪𝑶𝟐

• COMPOSICIÓN ESTÁNDAR DE MICROORGANISMO

𝑷
𝑪𝑯𝟏.𝟕𝟗 𝑶𝟎.𝟓 𝑵𝟎.𝟐 (𝑹𝑬𝑷𝑹𝑬𝑺𝑬𝑵𝑻𝑨 𝑬𝑳 𝟗𝟓% 𝑩𝑰𝑶𝑴𝑨𝑺𝑨) = 𝑷𝑴 = 𝟐𝟓. 𝟖𝒈
𝑷
• PRODUCCIÓN DE INSULINA
𝑪𝟔 𝑯𝟏𝟐 𝑶𝟔 + 𝑶𝟐 = 𝑪𝟐𝟓𝟕 𝑯𝟑𝟖𝟑 𝑵𝟔𝟓 𝑶𝟕𝟕 𝑺𝟔 + 𝑿𝑯𝟐 𝑶
CONCENTRACIÓN INICIAL DE SUSTRATO: 210 g/L

CONCENTRACIÓN FINAL DE SUSTRATO: 10 g/L

CONCENTRACIÓN DE BIOMASA: 7 g/l

CONCENTRACIÓN DE INSULINA: 4 g/l

• COEFICIENTES ESTEQUIOMÉTRICOS
𝑪𝟔 𝑯𝟏𝟐 𝑶𝟔 + (𝒂)𝑶𝟐 + (𝒃)𝑵𝟐 + 𝑪𝑯𝟏.𝟗𝟒 𝑶𝟎.𝟓𝟑 𝑵𝟎.𝟐𝟓 𝑷𝟎.𝟎𝟐𝟓 = (𝒄)𝑪𝑯𝟏.𝟕𝟗 𝑶𝟎.𝟓 𝑵𝟎.𝟐 + (𝒅)𝑪𝑶𝟐 + (𝒆)𝑯𝟐 𝑶

𝟕 𝒈𝒙 𝒄 − 𝒎𝒐𝒍𝒙 𝟏𝟖𝟎𝒈𝑮 𝒎𝒐𝒍𝒙

𝒄=( )( )( ) = 𝟎. 𝟐𝟒 (𝒄 − )
𝟐𝟏𝟎𝒈 𝟏𝟎𝒈 𝟐𝟓. 𝟖 𝒈𝒙 𝒎𝒐𝒍 𝒎𝒐𝒍𝑮
−
𝒍 𝒍

• BALANCE ELEMENTAL

Carbono: 6=0.24+d

Hidrogeno: 12=1.022(1.79) +2e

Nitrógeno: 2b=1.022(0.2)

Oxigeno: 6+2a=13022(0.5) +2d+e

A= 5.55 moles de 02/mol de glucosa

B=0.102 mol de N2/mol de glucosa

E= 5.08 mol de H2O/mol de glucosa

Considerando una base de calculo de 1000 kg de insulina se obtiene:

210𝑔
1000 𝑘𝑔 𝑖𝑛𝑠𝑢𝑙𝑖𝑛𝑎 ( 𝑙𝑔 ) = 52,500 𝑘𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎
4
𝑙
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2. Explicación de diferencias entre los valores obtenidos y los utilizados para la

propuesta de producción a nivel industrial
Los resultados fueron muy variables a comparación de la producción propuesta, ya
que los obtenidos de forma teórica fueron muy bajos a comparación de nivel
industrial. Como se muestran en los resultados los valores de oxígeno y nitrógeno
son bajos, sin embargo, en comparación con la glucosa requerida para la insulina
recombinante (1000 kg) obtenemos un total de 52,500 kg
3. Justificación del sistema de cultivo a utilizar considerando el comportamiento
metabólico del sistema biológico, velocidad de crecimiento, velocidad especifica
producción del metabolito, velocidad específica del consumo de sustrato, curva de
crecimiento donde se indique comportamiento de la biomasa, sustrato y producto
en función del tiempo.
4.1 SISTEMA DE CULTIVO
El cultivo para utilizar esta formado a partir de los elementos mencionados
en tabla 1, cada uno de ellos permite obtener una adición controlada de sustrato en
el fermentador, así como un mayor rendimiento y productividad del producto
deseado.
Componentes del medio nutritivo g/L
Extracto de levadura 5
Proteína de soya 10
K2HPO4 6
KH2PO4 3
NaCl 5
Glucosa 5
Ilustración 1 componentes del medio nutritivo

Durante la fermentación, las células se alimentaron con una concentración elevada de glucosa como
complemento para mantener los parámetros establecidos.

La concentración de glucosa nutritiva y extracto de levadura en los medios de alimentación permite

una cantidad efectiva de molécula inductora IPTG para minimizar la formación de proteína
recombinante especifica. Este tipo de cultivos generalmente se realizan en glucosa, siendo la fuente
de carbono favorita de E. coli, puesto que su estructura lipídica de la membrana depende de la tasa
de captación de glucosa (Shokri, et al., 2002). Adicionalmente, la glucosa impide el uso de otras
fuentes de carbono mediante la exclusión del inductor y mediante la inhibición de la síntesis de la
molécula señalizadora cAMP, este es un fenómeno denominado represión catabólica del carbono.
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3.2 VELOCIDAD DE CRECIMIENTO

Fue establecida a partir de los datos recolectas de un artículo con los datos de balance similar,
por lo que se llego a una velocidad de crecimiento de 0.10 1/h (Baeshen, N. A, et al.2014).

3.3 CURVA DE CRECIMIENTO

Los datos fueron establecidos a partir de recopilación de artículos, donde se inicia con una X0
de 7.5 g con una Miu de 0.1 h/1. Fue establecida la con la siguiente formula en un tiempo de 24
horas.

𝑥 = 𝑥𝑜 𝑒 𝜇𝑡
Dando los siguientes resultados mostrados en la tabla 2 y 3.

Tabla 2. Curva de crecimiento (g)

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Tabla 2. Curva de crecimiento (g)

REFERENCIAS:

• Baeshen, N. A., Baeshen, M. N., Sheikh, A., Bora, R. S., Ahmed, M. M., Ramadan, H.
A., Saini, K. S., & Redwan, E. M. (2014). Cell factories for insulin production.
Microbial cell factories, 13, 141. https://doi.org/10.1186/s12934-014-0141-0
• Lewis NE et al. Los datos ómicos de E. coli evolucionada son coherentes con el
crecimiento óptimo calculado a partir de modelos a escala del genoma. mol. sist.
Biol. 6, 390 (2010)
• Goyal S., yuan J., Chen T., Rabinowitz JD y Wingreen NS Lograr un crecimiento
óptimo a través de la inhibición de la retroalimentación del producto en el
metabolismo. Cómputo Plos. Biol. 6, e1000802 (2010).
• Nielsen J: Producción de proteínas biofarmacéuticas por levadura. Landes Biosci
Bioingeniería. 2013, 4 (4): 207-211. 10.4161/bioe.22856.
• Shokri, .A., Sandén, .A. & Larsson, .G. Growth. (2002). rate-dependent changes in
Escherichia coli membrane structure and protein leakage. . 21 September 2001, de
Appl Microbiol Biotechnol Sitio web:
https://link.springer.com/article/10.1007/s00253-001-0889-0#citeas