TERCER AVANCE (CORREGIDO)

1. BALANCE DE MASA TEÓRICO PARA EL CRECIMIENTO

𝟏
𝟎. 𝟗𝟑𝑪𝟔 𝑯𝟏𝟐 𝑶𝟔 + 𝑵𝑯𝟑 + 𝟑. 𝟑𝟖 𝑶𝟐 + 𝟎. 𝟎𝟓 𝑲𝟐 𝑯𝑷𝑶𝟒 → 𝟐𝑪𝑯𝟏.𝟗𝟒 𝑶𝟎.𝟓𝟑 𝑵𝟎.𝟐𝟓 𝑷𝟎.𝟎𝟐𝟓 + 𝟒. 𝟑𝟐𝑯𝟐 𝑶 + 𝟑. 𝟓𝟖𝑪𝑶𝟐 + 𝟎. 𝟏𝑲𝑯𝟐
𝟐

BALANCE ESTEQUIMETRICO:

5.58-C-5.58

12.7-H-12.8

12.54-O-12.54

0.5-N-0.5

0.1-K-0.1

0.05-P-0.05

Relación sustrato-biomasa: 0.93 glucosa: 2 biomasa

Reactivos:

 Glucosa
180.156 g GLU
( 0.93 moles )=167.54 g GLu
1mol
 Amoniaco
17.031 g NH 3 1
1 mol 2( )
moles =8.51 g N H 3

 Oxigeno molecular
32 g O2
( 3.38 moles )=108.16 g O2
1 mol

 Fosfato dipotásico (sal del medio)

174.2 g K 2 HP O4
( 0.05 moles )=8.71 g K 2 HP O4
1 mol

Productos:
 Biomasa
26.32 g Biomasa
( 2 moles )=52.64 g biomasa
1 mol
 Agua
 18.015 g H 2 O
( 4.32 moles ) =77.82 g H 2 O
1 mol
 CO2
44.01 g C O 2
(3.58 moles )=157.55 g C O2
1 mol
 KH2
174. g K H 2
( 0.1 moles )=17.42 g K H 2
1 mol

RENDIMIENTO DE BIOMASA

X 52.64 g
Y = =0.314=31.4 %
S 167.54 g

2. BALANCE DE MASA TEÓRICO PARA LA PRODUCCIÓN DEL METABOLITO

𝟕𝟗 𝑪𝟔 𝑯𝟏𝟐 𝑶𝟔 + 𝟏𝟓𝑶𝟐 + 𝟏𝟐𝑪𝟓 𝑯𝟏𝟏 𝑵𝑶𝟐 𝑺 + 𝟏𝟏𝟖𝑵𝑯𝟑 → 𝟐𝑪𝟐𝟓𝟕 𝑯𝟑𝟖𝟑 𝑵𝟔𝟓 𝑶𝟕𝟕 𝑺𝟔 + 𝟑𝟑𝟒𝑯𝟐 𝑶 + 𝟐𝟎𝑪𝑶𝟐

BALANCE ESTEQUIMETRICO

534-C-534
1434-H-1434
528-O-528
130-N-130
12-S-12
Relación sustrato-producto: 79 glucosa: 2 producto

Reactivos:
 Glucosa
180.156 g GLU
( 79 moles )=14,232.32 g Glu
1mol
 Metionina (sal del medio)
149.21 g C5 H 11 N O 2 S
( 12mol )=1,790.52 g metionina
1 mol
 Oxígeno molecular
32 g O2
( 15 moles )=480 g O2
1 mol
 Amoniaco
17.031 g N H 3
( 118 moles )=2,009.65 g N H 3
1 mol
 Productos:
 Insulina recombinante
5807.62 g insulina
( 2moles )=11,615.24 g insulina
1 mol
 Agua
18.015 g H 2 O
( 334 moles )=6015.01 g H 2 O
1 mol
 CO2
44.01 g C O 2
( 20 moles )=880 g C O2
1 mol
RENDIMIENTO DE PRODUCTO
P 11,615.24 g
Y = =0.816=81.61 %
S 14,232.32 g

3. Explicación de diferencias entre los valores obtenidos y los utilizados para la

propuesta de producción a nivel industrial
Los valores propuestos a nivel industrial son totalmente diferentes a los obtenidos en el
balance de masa teórico, esto puede deberse a las relaciones estequiométricas que son
una de las herramientas principales para contabilizar los flujos de materia entre un
determinado proceso industrial, como es el caso de la producción de insulina
recombinante.
En la siguiente tabla se hace la comparación de los diferentes valores obtenidos a partir de
los diferentes métodos.
CRECIMIENTO
COMPONENTE DE ENTRADA g/l de medio COMPONENTE DE SALIDA g/L de medio RENDIMIENTO DE BIOMASA
Glucosa 167.54 Biomasa 52.64
TEÓRICO 31.40%
K2HPO4 8.71 g Agua 77.82
LITERARIO O Glucosa 5 biomasa 80
38%
VARIABLE
K2HPO4 6 Agua 862.244

Ilustración 1. comparación de valores obtenidos/ utilizados en proceso industrial para el crecimiento

PRODUCCIÓN DEL METABOLITO
RENDIMIENTO DE
COMPONENTE DE ENTRADA g/l de medio COMPONENTE DE SALIDA gramos/batch
PRODUCTO
Insulina recombinante 11,315.24
TEÓRICO Glucosa 14,232.32 81.61%
Agua 6015.01
Insulina recombinante 11
LITERARIO O VARIABLE Glucosa 2.038 52%
Agua 4

Ilustración 2. Comparación de valores obtenidos/ utilizados en proceso industrial para el metabolismo de insulina
recombinante
Como se puede observar los valores obtenidos a partir de balance de masa teórico son
totalmente diferente a los obtenidos en la literatura y simuladores, algunos son mayores y
otros menores, sin embargo, esto se debe a que el balance de masa permite evaluar cada
uno de los compuestos y sus cantidades requeridas de materiales brutos y de productos
obtenidos, además, al ingresar más fuente de carbono nuestra producción será mayor, sin
embargo, el balance de materia no toma en cuenta la cantidad que la cepa Escherichia
Coli BL21 es capaz de ingerir, por lo que tenemos valores mayores en comparación con los
propuestos por la literatura. Es por ello, que podemos decir que los rendimientos de
biomasa son menores en el balance de masa teórico, pues no considera la capacidad de la
bacteria y su productividad al darle grandes cantidades de fuente de carbono (glucosa),
mientras que la literaria se usan gramos que la bacteria podrá tomarlos y usarlos para una
mayor productividad sin que corra riesgos de excretar acetato como un metabolito de
desbordamiento debido a un desequilibrio entre la captación de glucosa y el metabolito
central (Steinsiek, et al,. 2012).
4. Justificación del sistema de cultivo a utilizar considerando el comportamiento
metabólico del sistema biológico, velocidad de crecimiento, velocidad especifica
producción del metabolito, velocidad específica del consumo de sustrato, curva
de crecimiento donde se indique comportamiento de la biomasa, sustrato y
producto en función del tiempo.
4.1) Sistema de cultivo
El medio de cultivo a utilizar es TB modificado junto con kanamicina. Dicho medio esta
formado por nutrientes que permitan obtener una adicción controlada de sustrato en
el fermentador, así como un mayor rendimiento y productividad de la bacteria
seleccionada. En la siguiente tabla (3) se menciona cada uno de sus elementos con
cantidades recomendadas (Baeshen, et al., 2014)

Ilustración 3. Elementos que forman el medio TB modificado

Durante la fermentación, las células se alimentaron con una concentración elevada de

glucosa como complemento para mantener los parámetros establecidos. La concentración
de glucosa nutritiva y extracto de levadura en los medios de alimentación permite una
cantidad efectiva de molécula inductora IPTG para minimizar la formación de proteína
recombinante especifica. Este tipo de cultivos generalmente se realizan en glucosa, siendo
la fuente de carbono favorita de las diferentes cepas de Escherichia coli, puesto que su
estructura lipídica de la membrana depende de la tasa de captación de glucosa (Shokri, et
al., 2002). Adicionalmente, la glucosa impide el uso de otras fuentes de carbono mediante
la exclusión del inductor y mediante la inhibición de la síntesis de la molécula señalizadora
cAMP, este es un fenómeno denominado represión catabólica del carbono
4.2) Velocidad de crecimiento
La velocidad de crecimiento fue establecida a partir de la recopilación de datos, donde
señalan que la bacteria Escherichia coli es capaz de producir insulina recombinante al
1
citoplasma a partir de una tasa de crecimiento de entre 0.08−0.12 , por lo que se
h
1
seleccionó una de 0.10 , pues a partir del simulador, comprobamos que es benéfico para
h
la producción del metabolito manteniendo un equilibrio de biomasa-producto en corto
tiempo. (Baeshen, et al.2014).
4.3) Curva de crecimiento
Los datos propuestos surgen de investigaciones de artículos y revistas científicas. Iniciando
con una concentración de biomasa inicial del cultivo ( x 0) de 7 g y con una μ=0.1h−1
(Baeshen, N. A, et al.2014). Fue establecida la con la siguiente formula en un tiempo
logarítmico de 24 horas.
Dando los siguientes resultados mostrados en la tabla 4-5 y representados en la gráfica de
fase logarítmica (ilustración 6)

Ilustración 5. Parámetros de la curva de crecimiento

Ilustración 6. Curva de crecimiento logarítmica

Ilustración 3. Datos de curva de

crecimiento
5. REFERENCIAS
Baeshen, N. A., Baeshen, M. N., Sheikh, A., Bora, R. S., Ahmed, M. M., Ramadan, H. A.,
Saini, K. S., & Redwan, E. M. (2014). Cell factories for insulin production. Microbial cell
factories, 13, 141. https://doi.org/10.1186/s12934-014-0141-0
Steinsiek, S., & Bettenbrock, K. (2012). Glucose transport in Escherichia coli mutant
strains with defects in sugar transport systems. Journal of bacteriology, 194(21), 5897–
5908. https://doi.org/10.1128/JB.01502-12