REACCIONES DE CARACTERIZACION DE AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS

REPARACIÓN DE LAS MUESTRAS H2O Cada grupo va a aplicarle las pruebas para
Destilada caracterizar aminoácidos y proteínas descritas
500 en la guía: a la clara de huevo, la leche de soya,
ml 250
H2O
ml caseína y/o gelatina y los aminoácidos que
H2O
Diluir leche de soya Igual volumen
se proponen en cada prueba.
Hervir Verter la clara
que la clara
REACCION DE NINHIDRINA

1 mL de solución 1 mL de glicina, metionina Calentar 10 min

de cada proteína y prolina + 1 ml de Solución violeta azul
ninhidrina o amarillo,

REACCION DE BIURET

1 mL de proteína 1 mL de glicina 3 gotas sulfato cúprico al 1% - mezclar

Rojo – indica enlace peptídico
Añadir 2 ml de hidróxido de
sodio al 30%

REACCION XANTOPROTEICA
 1 ml de 1 ml de aminoácidos Proteína= precipitado Dejar enfriar
Calentar 5 min
proteína (Glicina, tirosina y triptófano) blanco → proteína Añadir 2 ml de hidróxido de sodio
= precipitado amarillo
desnaturalizada al 30% = color naranja fuerte.

1 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTADO

REACCIÓN DE MILLON

1 ml de 1 ml de aminoácidos + 0.5 ml del reactivo de Millón y agitar.

proteína Enfriar y + 0,5 ml de nitrito sódico. Calentar 5 min, La tirosina y proteínas
(Glicina, tirosina y triptófano)
Proteínas = precipitado blanco que la contienen = color rojo.

RECONOCIMIENTO DE ARGININA

1 ml (proteínas, arginina y glicina) Agitar y enfriar en 2 gotas de hipobromito sódico 1N.

+ 0.1 ml de hidróxido de sodio al baño de hielo 5 min Presencia de arginina u otra guanidina = rojo vivo
30% y 0.3 ml de α-naftol al 0.05%. + 0.3 ml de urea al 40% estabiliza el color.

RECONOCIMIENTO DE TRIPTÓFANO.
 a) Reacción de Hopkins-Cole

1 ml glicina, triptófano, metionina y 1 1,5 ml de ácido sulfúrico concentrado.

ml de proteína + 1 ml de reactivo de Anillo violeta en la interfase de los líquidos
Hopkins-Cole.
= triptófano.
Agitar

b) REACCIÓN DEL ÁCIDO GLIOXÍLICO:

1 ml arginina, glicina, metionina y triptófano, Dejar caer por las paredes 1 ml de ácido
proteína. sulfúrico concentrado → dos fases.
Adicione a c/tubo 1 ml de ácido acético Color en la interfase → anillo violeta =
glacial aminoácido triptófano.

DETECCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS:

1 ml proteína y glicina,
metionina, cisteína y cistina
+ 1 ml de hidróxido de sodio
al 30%
Se enfrían
+ 1 ml de acetato de plomo al Calientar suavemente =
Calentar 10 min
5% y agitar bien Oscurecimiento progresivo
de la solución.