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PRACTICA N° 18

DIGESTION DE LAS PROTEINAS: ACCION DE LAS ENZIMAS
DIGESTIVAS PANCREATICAS SOBRE LA CASEINA
I. INTRODUCCION:
La digestión de las proteínas, o degradación hasta aminoácidos en el tubo digestivo, es un proceso
complicado que se realiza con el concurso de diversas enzimas proteolíticas Entre estas enzimas
proteoliticas tenemos: a) de origen gástrico: pepsina y renina; b) de origen pancreático: tripsina,
quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasa; c) de origen intestinal: aminopeptidasas, dipeptidasas.
Son endopeptidasas: pepsina, tripsina, quimotripsina, elastasas. Son exopeptidasas: carboxipeptidasa
y aminopeptidasa. La tripsina, es activada por la enterocinasa en el intestino, y es específica de los
enlaces peptidicos sobre el lado carboxílico de residuos de aminoácidos básicos: lisina y arginina
solamente. La quimotripsina es específica para los enlaces peptidicos de los aminoácidos sin carga
como los aromáticos: tirosina, triptofano y fenilalanina. La elastasa tiene una especificidad amplia,
ataca a los residuos pequeños, como la glicina, alanina y serina. La carboxipeptidasa hidroliza el
enlace peptídico carboxiterminal en las cadenas polipeptidicas.
La falta de enzimas proteolíticas produce creatorrea (presencia de fibras musculares identificables en
las heces, que provienen de la carne de los alimentos), y azorrea (gran cantidad de productos
nitrogenados en las heces). En el lactante con ausencia congénita de tripsinogeno y por consiguiente
por falta de activación de quimotripsinógeno y procarboxipeptidasa, existe hipoproteinemia, con
retardo marcado del crecimiento.

La presente práctica tiene como finalidad demostrar la acción hidrolítica de las enzimas digestivas
contenidas en el páncreas sobre la caseína o proteína de la leche, determinado los productos
(aminoácidos) con ninhidrina

II. REACTIVOS.
- Caseína al 1% en buffer fosfato 0,1 M pH 8.
- Buffer fosfato 0,1 M pH 8.
- Solución de extracto pancreático.
- Solución acuosa de ninhidrina al 0,25% saturada con butanol.
- Acido tricloroacético al 10%.

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento
Armar el siguiente sistema:

COMPONENTES (ml) I II III

Caseína al 1% 1 1 ---
Buffer fosfato 0.1 M pH 8.0 1 1 1
Solución de extracto pancreático 1 --- 1
Agua destilada --- 1 1

Pasos:
* Mezclar y colocar al baño de agua a 37 ºC por 30 minutos.
* Después del tiempo de incubado tomar 0,5 ml, de cada uno de los tubos y trasladelos a
otro sistema numerado (I, II, III).
* En este nuevo sistema, agregar 1 ml de solución de ninhidrina.
* Mezclar y llevar a un baño de agua hirviendo (franca ebullición), durante 3 a 5 minutos.
* Observa los cambios de color de cada tubo.

CUESTIONARIO: 1. IV. Qué efecto tiene el ácido tricloroacético sobre las proteínas? ¿Qué variaciones se obtienen en un sistema de digestión de proteínas. ¿Cómo se explica los cambios de color. * Observe las variaciones que se produce en cada tubo. después de agregar ácido tricloroacético? . * Luego. después de la reacción con ninhidrina en un sistema donde se produce digestión de las proteínas? 3. agregue gota a gota 1 ml de ácido tricloroacético al 10% agitando continuamente. Señale las enzimas digestivas pancreáticas y los sustratos sobre los cuáles actúa. 2.

.Los extractos de páncreas poseen también un péptido inhibidor de la tripsina. secretada a la luz intestinal. con mayor rapidez que las originales desdoblándose en polipéptidos de peso variable y algunos aminoácidos. la alfa-1 antitripsina fecal (1-AT-Fecal) que es una glicoproteína. INHIBICION DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS: ACCION DE LA SOYA HERVIDA Y CRUDA SOBRE EL EFECTO PROTEOLITICO DE LA TRIPSINA INTEGRANTES:  VILCHES SENAS CRISTIAN.  VILLACORTA PONCE LUZ. Es interesante también que el aceite de semilla de algodón posea un pigmento. ello explica en parte que el valor nutritivo del frijol de Soja aumenta considerablemente si se coce a ebullición por varios minutos. INTRODUCCION: La tripsina actúa como una endopeptidasa e hidroliza prácticamente toda clase de proteínas. Digiere las proteínas desnaturalizadas y parcialmente digeridas. Esta sustancia de naturaleza peptídica es inactivada por el calor. Por ejemplo el frijol de soja contiene un principio cuya actividad antitripsina dificulta la digestión de las proteínas. el gisipol. El ovomucoide de la clara de huevo inhibe también de manera enérgica la tripsina. I.  VILLACORTA SEBATIÁN NANCY. Algunos alimentos en estado natural poseen componentes perjudiciales para la nutrición. con actividad antioxidante y antitripsina que disminuye el apetito y dificulta la digestión de las proteínas.

b. .5 Proteína de soja cruda 30% 0.5 .Etanol absoluto III.2 . ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento Armar el siguiente sistema: COMPONENTES (ml) I II III IV Buffer fosfato 0. Incubar en baño maría a 37°C durante 1 hora. f.5 Solución de tripsina 20 mg% 0.25%. . d. 0.25% saturada con butanol. II.2 - Pasos: a. REACTIVOS A UTILIZAR. En otra serie de tubos numerados I .Solución de tripsina 20 mg%. 0. . Someter los tubos a temperatura de ebullición del agua utilizando baño maría durante 5 minutos. - Proteína de soja hervida 30% .0.0 2.1 M pH 8.Buffer fosfato 0. . IV colocar 1 ml de sobrenadante de los tubos respectivos del paso anterior y agregar 1 ml de ninhidrina 0. II.5 2.5 0. Mezclar y centrifugar a 2500 rpm por 10 min. c.Solución de ninhidrina 0.Proteína de soya cruda 30%.1 M pH 8. e.5 2. III. .5 2.Proteína de soya hervida 30%. . Después del tiempo de incubación: agregar a cada uno de los tubos 2 ml de etanol absoluto. . . Anotar los resultados.5 0.

Explique con sus propias palabras cuál cree que es el objetivo de la práctica que realizó. 1981) y por Collins y Beaty (Collins y Beaty. Es un pigmento amarillo. El ovomucoide es una glicoproteína el cual tiene un inhibidor de tripsina de una alta estabilidad térmica. 1980). Debido a que el hervor rompe con tal efecto. generalmente va acompañado de un incremento en la calidad nutritiva. indicando que es suficiente un tratamiento con agua hirviendo por tres minutos para inactivar el 90% de inhibidor. ¿Qué es el gisipol y cómo actúa en su acción antioxidante? Químicamente. Gran parte de los alimentos de origen vegetal. el gisipol se clasifica como un polifenol. siendo su sitio activo en el residuo de lisina para la mayoría de las aves. Posee una serie de enlaces azufrados. que permeabiliza las células y actúa como un inhibidor para varias de las enzimas deshidrogenasas. pero en gallinas se encuentra en la arginina. Básicamente. Por qué razón el ovomucoide de la clara del huevo inhibe la acción de la tripsina. El objetivo central del siguiente experimento es demostrar el efecto inhibidor del extracto de soya cruda sobre el efecto proteolítico de la tripsina. 2. También se demuestra en esta práctica que tal efecto inhibidor desaparece al utilizar soya hervida. en donde la mayor proporción se manifiesta en la semilla. Es un inhibidor del tipo Kazal. La mayoría de los inhibidores de proteasas son inactivados por la acción del calor. por lo que en el cocimiento de los alimentos que contienen este tipo de compuestos.IV. CUESTIONARIO: 1. el gisipol se presenta en dos formas: . Estudios relacionados con la inactivación del inhibidor de soya fueron realizados por Bainter (Bainter. presentan inhibidores de proteasas. 3.

Los rumiantes adultos pueden ingerir gisipol mientras que los bovinos jóvenes son mucho más susceptibles. pudiendo producir anemia. Es un antioxidante biológico que hace que disminuya el apetito y que se produzca estreñimiento. El efecto biológico del gisipol puede evitarse añadiendo hierro.8 a 1. así como la síntesis de DNA. El gisipol (C30H30O8) es una toxina potente que interfiere con la utilización de los elementos minerales. siendo el factor principal de la toxicidad su efecto acumulativo.libre y ligado. el gisipol total constituye de 0. en la semilla del algodón. Normalmente. Ejerce un efecto inhibidor en las enzimas digestivas. El gisipol es tóxico para los animales monogástricos cuando se les suministra en cantidades excesivas. como el Fe++. Combina su grupo carbonilo con las proteínas y los aminoácidos. forma complejos estables con cationes. Las gallinas alimentadas con harina de semilla de algodón pueden dar huevos con yemas moteadas debido al efecto del gisipol. Las aves de corral son más tolerantes.4%. siendo de mayor importancia la forma libre. El cerdo y los conejos son los animales más sensibles. causa alteraciones en las organelas celulares. altera los procesos bioquímicos e inhibe la actividad de algunas enzimas. en forma de sulfato férrico. . que es biológicamente tóxica y que corresponde casi a la totalidad de gisipol de la planta del algodón.

YA Extraer 1ml HERVIR del QUE FUE INHIBIDO sobrenadante POR LA ACCIÓN DE LA SOYA CRUDA. TUBO I BUFFER FOSFATO 0. DEBIDO A LA INACCIÓN DE LA TRIPSINA. . Con dibujos represente la práctica realizada.1M / pH 8 ETANOL 37ºC x 1 hora ABSOLUTO SOLUCIÓN DE TRIPSINA PROTEÍNA DE SOYA CRUDA 30% C E N T R IF U G NIHIDRINA A R NO HUBO REACCIÓN. 4.

1M / pH 8 ABSOLUTO 37ºC x 1 hora PROTEÍNA DE SOYA CRUDA 30% C E N T R NIHIDRINA IF U G A NO HUBO R REACCIÓN POR Extraer 1ml HERVIR del LA AUSENCIA sobrenadante DE TRIPSINA TUBO III BUFFER FOSFATO ETANOL 0. AL HERVIR del AGREGAR sobrenadante NIHIDRINA. . TUBO II BUFFER FOSFATO ETANOL 0. PONE DE MANIFIESTO LA ACCIÓN DE LA TRIPSINA.1M / pH 8 ABSOLUTO 37ºC x 1 hora PROTEÍNA DE SOYA HERVIDA 30% C E N T SOLUCIÓN R DE TRIPSINA NIHIDRINA IF U LA SOYA HERVIDA G A PERDIÓ SU R ACTIVIDAD Extraer 1ml ANTITRIPSINA.

NO OCURRIÓ PROTEÓLISIS. NO HUBO AMINOÁCIDOS LIBRES. TUBO IV BUFFER FOSFATO ETANOL 0. EN LOS TUBOS 1 Y 2. * LA ACTIVIDAD ANTITRIPSINA ES INHIBIDA AL HERVIR LA SOYA. LO QUE SE OBSERVÓ CON MÁS ACENTUACIÓN EN EL TUBO Nº 3. . IMPIDIENDO LA PROTEÓLISIS DE LAS PROTEÍNAS Y LA FORMACIÓN DE AMINOÁCIDOS. LA NIHIDRINA TIÑE LA SOLUCIÓN DE COLOR VIOLETA OSCURO. LO QUE SE DEMOSTRÓ CON LA NIHIDRINA (INDICADOR DE AMINOÁCIDOS LIBRES). LO QUE PERMITE LA ACCIÓN DE LA TRIPSINAY LA FORMACIÓN DE AMINOÁCIDOS LIBRES.1M / pH 8 ABSOLUTO 37ºC x 1 hora PROTEÍNA DE SOYA HERVIDA 30% C E N T R NIHIDRINA I F U G A Extraer 1ml R HERVIR del sobrenadante CONCLUSIONES: * LA SOYA CRUDA TIENE PROPIEDADES INHIBITORIAS PARA LA TRIPSINA.

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 RESULTADOS FINALES .