PARTE EXPERIMENTAL

1. DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS

Obtención de la amilasa salival:

a) Enjuagarse la boca con agua de caño.

b) Mantener en la boca unos 20 ml de agua destilada tibia durante 2 minutos y vaciarla

luego en un beaker.

c) Filtrar esta solución por una gasa y mantenerla en hielo hasta el momento de usar.

Preparación de la solución de digestión.

a) Colocar 25 ml. de una solución de almidón soluble al 1 % en un Erlenmeyer pequeño y

añadir 3 ml de la solución de amilasa salival.

b) Tomar inmediatamente una alícuota con la cual se deberá realizar la reacción de yodo y
benedict, representando esta muestra, el tiempo cero.

c) El resto de la solución de digestión, se le incuba a 37 ºC por 30 minutos, tomando

alícuotas cada 30 segundos para la reacción de Yodo y cada 5 minutos para la reacción
de Benedict.

Reacción de Yodo.

§ Rotular 10 tubos y medir en cada uno de ellos:

 § HCl 0.05 N 2.50 ml.

§ Solución de Yodo 0.25 ml.

§ Solución de digestión 0.25 ml.

§ Dejar en reposo, observar e interpretar los resultados:

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Observ Azul Azul Azul Azul Azul Azul Morado Morado Morado Negro
marino oscuro oscuro
Color

Reacción de Benedict.

§ Rotular 6 tubos y medir en cada uno de ellos:

§ Reactivo de Benedict 2.50 ml.

§ Solución de Digestión 0.25 ml.

§ Colocarlos en baño hirviente por 5 minutos.

§ Observar los resultados e interpretar.

Tubo 1 2 3 4 5 6

- + ++ +++ ++++ +++++

 2. DIGESTIÓN DE LOS TRIGLICÉRIDOS DE LA LECHE.

Los lípidos se caracterizan por ser insolubles en el agua, lo cual constituye un problema para la
digestión, ya que los sustratos no son fácilmente accesibles a las enzimas digestivas de la fase acuosa.
Además, si los lípidos ingeridos se hidrolizan en constituyentes más simples, estos tienden a agregarse
en complejos mayores, lo cual dificulta su absorción. Estos problemas se pueden superar mediante el
aumento del área lipídica y por solubilización de los productos de hidrólisis con detergentes.

La digestión de las grasas, en el organismo ocurre por acción de las lipasas, las cuales
requieren de un agente solubilizante, las sales biliares y de una proteína la colipasa que permite la
interacción de la lipasa con los triglicéridos que se encuentran en la parte interna de la micela.

Fundamento.

La digestión de los Triglicéridos da como resultado: b - monoglicéridos, diglicéridos y ácidos

grasos, éstos últimos pueden ser determinados por titulación con hidróxido de sodio.

Procedimiento.

a) Colocar en 2 Beakers 10 ml de leche y 1 ml de extracto de lipasa (solución de pancreatina),

en cada uno de ellos.

b) A uno de ellos se le añade 1 ml de agua y al otro 1 ml de bilis. Mezclar rápidamente.

c) De cada beaker se toma 2 ml. y se colocan en 2 beakers respectivamente y se añaden dos

gotas de fenoltaleina y se titula con NaOH 0.01 N hasta la aparición de una coloración rosada
débil.
 d) Anotar los ml. gastados y hacer los cálculos.

e) La mezcla que quedó después de retirar los 2 ml. se incuba en baño maría a 37 ºC por una
hora.

f) Transcurrido el tiempo de incubación, tomar nuevamente 2 ml. de cada beaker de incubación

y titularlos del modo antes descrito.

Determinar el Nº de mEq de ácidos grasos provenientes de la digestión de 100 ml.

de leche pura.

ml. de NaOH 0.01 N meq. de Ac. grasos / 100

gastados ml de leche pura

Leche + Leche + Leche + Leche +

agua bilis agua bilis

Muestra Basal 2.15 2.2 4.3 4.4

Muestra Incubada 2.4 6.0 4.8 12

3. DIGESTIÓN DE LA OVOALBÚMINA.

Pepsina y tripsina son enzimas que hidrolizan enlaces peptídicos, que se encuentran en el
interior de la molécula de proteína. Pepsina hidroliza enlaces peptídicos en los cuales participan los
aminoácidos aromáticos y leucina y que aportan el grupo amino para formar el enlace peptídico.
Tripsina hidroliza los enlaces peptídicos en los cuales el grupo carboxilo es aportado por la arginina o
lisina.

El sustrato utilizado para estudiar estas dos enzimas es la ovoalbúmina, proteína globular
presente en la clara del huevo.

Parte experimental.

a) Tomar 4 tubos de ensayo y medir en cada uno de ellos 5 ml de albúmina de huevo.

b) Incubar en baño de agua a 37 ºC durante 5 minutos.

c) Después de este periodo de incubación añadir los siguientes reactivos, como se indica a
continuación:

Tubo Nº 1 2 3 4

Tripsina 0.5 ml. 0.5 ml. ------- -------

Pepsina ------- ------- 0.5 ml. 0.5 ml.

Buffer fosfato pH 8.6 ------- 3.0 ml. 3.0 ml. -------

HCl 0.1 N 4.5 ml. ------- ------- 4.5 ml.

 Agua destilada ------- 1.5 ml. 1.5 ml. -------

d) Mezclar bien; continuar la incubación a 37 ºC

e) Observar cada 10 minutos la turbidez o aclaramiento de cada tubo. Incubar por 20 minutos.

Tubos 1 2 3 4

10 min. - + - +

20 min. - ++ - ++

30 min. - +++ - +++

INTERROGANTES.

1. Explique por qué los diferentes tubos toman esas coloraciones, tanto en el experimento
del lugol como en el de Benedict.

Debido a la hidrólisis enzimática que sufre el almidón al entrar en contacto con los reactivos.
Sea para determinar la cantidad de almidón (reactivo de Lugol) o para determinar la cantidad
de azúcares reductores (reactivo de Benedict).
2. ¿Qué enzimas se encargan de romper los enlaces a 1 – 6 ?

La enzima Amilopectina puede romper los enlaces glicosídicos α(1-6)

3. Donde se completa la digestión de los oligómeros residuales, luego de la acción de las a

amilasas? Qué enzimas participan?

La digestión de los hidratos de carbono se inicia por medio de la ptialina de la saliva, y continúa en
el intestino delgado por la acción de la amilasa pancreática. La principal enzima que participa
es la a-amilasa segregada por el páncreas junto al jugo pancreático y que actúa en la luz
intestino

4. Qué es un azúcar reductor?

Azúcares que poseen su grupo carbonilo, y que a través del mismo pueden reaccionar como
reductores de moléculas oxidantes.

5. En que consiste la intolerancia a la lactosa? Por qué se presentan sus síntomas?

Consiste en la malabsorción de lactosa, el intestino delgado produce concentraciones bajas de

lactasa, la enzima que descompone la lactosa, y no puede digerir toda la lactosa ingerida por lo que
la lactosa que no se digiere pasa al colon. en los niños incluyen diarrea y aumento de peso
insuficiente y en adultos hinchazón abdominal, cólicos, diarrea, flatulencia y náuseas.

6. Cuál es el rol de las sales biliares en la digestión de los triglicéridos?

Son detergentes biológicos que facilitan la absorción intestinal de los principales lípidos de la dieta
(grasas o aceites, también llamados triglicéridos.

7. Además de pepsina y tripsina, qué otras enzimas participan en la digestión de las proteínas?
Cuáles son sus sustratos?

Amilasa, producida en la boca (su sustrato es el almidón).

Lipasa pancreática, producida en el páncreas (su sustrato es la harina de trigo).
La ribonucleasa y desoxirribonucleasa, producidas en el páncreas ( sustrato poli-citosina)