Cuestionario 5.

Actividad del Inhibidor de Tripsina

Nombres:
● Sergio Arturo Rafael Ludeña Cabello 20161106
● Nelson Andrés Vilela Radicy 20181054
● Mayra Vásquez Colqui 20191148

1. Se realizó el siguiente ensayo de actividad del inhibidor de tripsina (AIT) en dos

muestras de harina de soya (M1 y M2). Los valores de A de las muestras 1 y 2 ,
fueron obtenidos como promedio de 2 repeticiones cuyo CV fue menor de 3%.

BST ST RST BM1 M1 BM2 M2

dilucion 0.25/25 0.5/25

Bapna 2 2 2 2 2 2 2
Agua 1 1 1
Muestra 1 1 1 1
diluida
Incubar 5min a 37°C
Tripsina 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar 10min a 37°C
Acético 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
35%
Tripsina 0.5 0.5 0.5
A410nm 0.02 0.48 0.46 0.03 0.312 0.03 0.143

a) Determine la AIT en las dos muestras de soya, conociendo que la extracción del
inhibidor se realizó de la siguiente manera: a 1g de harina de soya se agregó
50ml de NaOH 0.001M, se reguló el pH a 9.4 y se dejó en reposo por 16 horas.
Luego se filtró y se enrazó en una fiola a 100ml. Con esta muestra se preparó la
muestra diluida de la siguiente manera:
M1: 0.25ml en una fiola de 25ml que se enrazó con agua destilada.
M2: 0.5ml en una fiola de 25ml que se enrazó con agua destilada.

Ast - ABST = 0,47 - 0,02 = 0,45

Am1 - ABM1 = 0,312 - 0,03 = 0,282
Am2 - ABM2 = 0,143 - 0,03 =0,113
Actividad de tripsina

ST
1UT = 0,01
x = 0,45
x = 45 UT

M1
1UT <=> 0,01
 x <=> 0,282
x = 28,2UT

Entonces:
(M1):
- 45UT = 100%
28,2UT = x%
x% = 62,66%

Grados de inhibición
100 - 62,66% = 37,33% AIT en la muestra 1
Hallando UTI
45 - 28,2= 16,8 (M1)

UTI/mg

(M1):
- 1g ⇔ 100ml
xg ⇔ 0,25ml (para diluir en 25ml)
x = 0,0025g = 2,5mg

2,5mg ⇔ 25ml
x ⇔ 1ml

x=0,1mg

15,1 AIT - 0,1mg

x - 1mg
x = 151 AIT/mg

(M2):
- 1g ⇔ 100ml
yg ⇔ 0,5ml (para diluir en 25ml)

y = 0,005g = 5mg

5mg ⇔ 25ml
y ⇔ 1ml
y = 0,2mg
34,7AIT - 0,2 mg
y - 1 mg

y = 173,5 AIT/mg

b) Explique cuál de las muestras de harina de soya sería recomendable utilizar

para alimentación.
 Dependería del proceso que se le de al preparar los alimentos, Si esta es
cocinada en alguna receta se podría decir que no importa cual sea que menos
pueda inhibir a la tripsina ya que la cocción desnaturaliza la proteína inhibidora
haciéndola inservible y no afecte a la tripsina. pero si se consumiera en algún
platillo donde no haya cocción o la cocción no sea la suficiente para
desnaturalizar a la proteína inhibidora, debería de consumirse la harina usada en
la muestra 1 ya que tiene un menor grado de inhibición hacia la tripsina por mg
de muestra.

c) Explique si los datos proporcionados en este ensayo son confiables para la

medida de AIT.

si son confiables, por que la absorbancia de tripsina luego de restar el blanco

entran dentro del rango aceptable de 0,42±0,5 o [0,37 - 0,47]
Los datos muestran una UT = 46 = 0,46 absorbancia de tripsina luego de restar el
blanco.
y los promedios de los datos de las absorbancias de las muestras tienen un CV menor de
3%.

2. ¿Por qué los autores recomiendan el uso de tripsina porcina en comparación

con tripsina bovina?

Rpta. La tripsina bovina es inestable en soluciones alcalinas y se comprueba que

a pH elevados disminuye su actividad. El AIT se analiza a un pH de 8,1, ya que
este es el óptimo para la actividad de tripsina contra BAPA. La tripsina porcina
es estable a pH alcalino y es màs adecuada para analizar AIT. Es por ello que el
uso de la tripsina porcina permite la inactivación de la enzima y aumenta la
sensibilidad de medición.

3. ¿Por qué se recomienda que en la muestra diluida el grado de inhibición se

encuentre entre 30-70%?

Esto es para mantener el coeficiente de variación de la absorbancia de inhibidor

de tripsina dentro de más menos 3.5%