Reacciones generales de los aminoácidos.

Guañarita, S; Villegas, A:
Bioquímica
5 semestre
Ingeniería de alimentos

RESUMEN
Se realizaron diferentes ensayos cualitativos con diferentes reacciones colorimétricas
(Ninhidrina, Xantoproteica,Millón, Hopkins-cole, Sakaguchi, Acetato de plomo, Ehrlich) con
el objetivo de identificar distintos aminoácidos.

Palabras clave: ensayos, aminoácidos, reacciones.

1. INTRODUCCIÓN.
Los aminoácidos son bloques fundamentales de las proteínas y desempeñan un papel
crucial en numerosos procesos biológicos. La comprensión de sus propiedades y
reacciones químicas es esencial para desentrañar los mecanismos que subyacen a la
estructura y función de las proteínas.
Los aminoácidos son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino (-NH₂) y un grupo
carboxilo (-COOH) unidos a un carbono central, denominado carbono alfa (α). Además,
poseen una cadena lateral variable, denominada grupo R, que confiere a cada aminoácido
sus propias características únicas. La naturaleza ionizable de los grupos amino y carboxilo
proporciona a los aminoácidos propiedades ácido-base, lo que influye en su
comportamiento químico.
(Capacho, 2021)
La clasificación de los aminoácidos en función de la naturaleza de sus cadenas laterales
incluye aminoácidos no polares, polares sin carga, y aminoácidos con carga. Estas
diferencias en la estructura química influyen en las reacciones y propiedades de los
aminoácidos.
El objetivo de la práctica fue profundizar en la comprensión de las reacciones generales de
los aminoácidos mediante la realización de experimentos específicos. Se exploraron
aspectos clave, como la formación de enlaces peptídicos, la ionización de los grupos amino
y carboxilo, y la identificación de propiedades únicas de los diferentes aminoácidos.
Durante la práctica, se llevaron a cabo diversas técnicas experimentales, tales como
titulaciones ácido-base para determinar los puntos isoeléctricos de los aminoácidos, la
formación de péptidos mediante la reacción de condensación entre aminoácidos, y
logramos identificar los grupos funcionales mediante ensayos específicos.

2. METODOLOGÍA
2.1. Materiales y reactivos

MATERIALES REACTIVOS

12 Tubos de ensayo Solución de Nihidrina (fresca)

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1 Pipeta de c/u ( 1 ml, 5 ml, 10 ml) Patrón de aminoácidos 1 g/l: tirosina,

triptófano, arginina, cisteína, histidina, ácido
aspártico, isoleucina, fenilalanina, serina.

1 Espátula Ácido sulfanílico

1 Pinza para tubos de ensayo

Hidróxido de sodio al 10%

Hidróxido de sodio al 40%

1 Trípode

Reactivo de Millón
1 malla de asbesto

Reactivo de Hopkins-Cole
1 gradilla

1 Vaso precipitado de 400 ml

Solución a-naftol al 0,15 %

1 Embudo de vidrio Hipobromito alcalino

Solución de urea 1 g/
1 Agitador de vidrio

Papel indicador universal Acetato de plomo al 10%

Baño de hielo Reactivo de Ehrlich

Ácido sulfanílico al 0,5% en HCl al 2%

Ácido sulfúrico concentrado

Hidróxido de amonio al 10%

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Nitrito de sodio al 0.5 %

Ácido nítrico concentrado

Solución problema con aminoácidos.

2.2 Desarrollo de la práctica

2.2.1 Reacción con ninhidrina

En un tubo de ensayo, se calentó 1 ml de solución de ácido aspártico o de serina, mientras

que en otro tubo se pipeteó 1 ml de la solución problema. A cada tubo se le agregó 0,5 ml
de la solución de ninhidrina y se calentó al baño maría durante 10 minutos. Luego, se
observó la coloración formada.

2.2.2 Reacción xantoproteica

Se calentaron 2 ml de tirosina o triptófano con 2 ml de ácido nítrico concentrado hasta la

ebullición. Luego, se repitió el procedimiento con 2 ml de solución problema, se enfrió y se
observó el cambio de color. Posteriormente, se agregó cuidadosamente gota a gota
hidróxido de sodio al 40% hasta alcalinizar. Se consideró una prueba positiva cuando se
produjo un cambio de coloración de amarillo en medio ácido a naranja en solución alcalina.
Se esperaba que la fenilalanina diera una reacción negativa o débilmente positiva.

2.2.3 Reacción de millón

En dos tubos de ensayo se agregaron 3 ml de solución de tirosina y 3 ml de solución

problema respectivamente. A cada tubo se le añadieron 5 gotas del reactivo de Millón, luego
se calentaron en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos. Posteriormente, se dejaron
enfriar hasta observar la aparición de la coloración rojo ladrillo.

2.2.4 Reacciones con ácido glioxílico ( hopkins-cole o adam kiewiez)

Se tomaron 3 ml de solución de triptófano y 3 ml de solución problema, que fueron

colocados en tubos de ensayo separados. Luego, se añadieron 2 ml del reactivo de
Hopkins-Cole a cada tubo, se mezclaron y se inclinaron los tubos para agregar
cuidadosamente por las paredes 1 ml de ácido sulfúrico concentrado. Se procedió a
observar la reacción.
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2.2.5 Reacción de sakaguachi

Los tubos de ensayo que contenían 5 ml de solución de arginina y 5 ml de solución

problema respectivamente fueron enfriados en un baño de hielo. Luego, se añadió a cada
uno 1 ml de hidróxido de sodio al 10% y 1 ml de solución de α-naftol al 0,5%, y se dejó
reposar durante 2-3 minutos en el baño de hielo. Posteriormente, se agregaron 10 a 20
gotas de hipobromito alcalino, se mezcló bien y después de 20 segundos se añadió 1 ml de
solución de urea y se mezcló nuevamente. Se observó el color que se desarrolló.

2.2.6 Reacción con acetato de plomo en medio alcalino

Se calentaron 2 ml de cisteína o cistina con 2 ml de solución de hidróxido de sodio al 40%.

Luego, se agregaron gotas de acetato de plomo al 10%, y se calentó hasta obtener el
oscurecimiento de la solución. La prueba se repitió con la solución problema.

2.2.7 Reacción de Ehrlich

Se mezcló 1 ml de solución de ácido sulfanílico con 1 ml de nitrito de sodio al 0,5%, y se

dejó reposar esta mezcla durante 15 minutos. Luego, se añadió 1 ml de solución de
histidina o tirosina, y se alcalinizó con una gota de hidróxido de amonio al 10%. Se observó
el color que apareció, y se repitió la prueba con la solución problema.

3.RESULTADOS

3.1 Escriba los posibles aminoácidos que tiene su solución problema.

Problema N. 3
Aminoácido(s): fenilalanina, triptófano y arginina

3.2 En el organismo existen veinte aminoácidos proteicos, nueve de los cuales se

consideran esenciales y los otros once son los no esenciales. Escriba una lista de
cada grupo de aminoácidos mencionados.

AMINOÁCIDOS ESENCIALES AMINOÁCIDOS NO ESENCIALES

Histidina (His) Alanina (Ala)

Isoleucina (ile) Asparagina (Asn )

Leucina (Leu) Tirosina (Tyr)

Lisina (Lys) Prolina (Pro)

Fenilalanina (Phe) Serina (Ser)

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Metionina (Met) Glicina (Gly)

Treonina (Thr) Glutamina (Gln)

Triptófano Ácido glutámico (Glu)

Valina (val) Cisteína

Ácido aspártico (Asp)

Arginina (Arg)

3.3 Tabla 1. Observaciones de las diferentes reacciones.

Pruebas Observación Resultado Imagen

Se obtuvo un Negativo
Reacción color violeta
claro en ambas
con nihidrina. pruebas

Ambas pruebas Positivo

Reacción arrojaron un
xantoproteica color naranja, la
solución
problemas más
oscura.
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La solución con Positivo

Reacción de millón tirosina arrojó el
color rojo ladrillo
y en la solución
problema no
hubo cambio

Reacciones con En las 2 Negativo

ácido glioxílico soluciones se
obtuvo un anillo
amarillo casi
imperceptible

Color amarillo en Negativo

Reacción de ambas pruebas
sakaguachi

Gris translúcido Negativo

Reacción con
acetato de plomo
en medio alcalino
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La prueba 1 un Positivo para la prueba 1

Reacción de color amarillo y (acido sulfanilico)
Ehrlich la prueba con la Negativo para la solución
solucion problema
problema no
hubo cambio de
color

4. ANÁLISIS DE RESULTADOS

4.1 Según (Herrera, 2014) la reacción con nihidrina es comúnmente utilizada para detectar
aminoácidos, ya que forma complejos de color púrpura con ciertos aminoácidos primarios,
especialmente prolina y aminoácidos con grupos aminos primarios libres. Una de las
razones de que la prueba arrojó un resultado negativo puede ser debido a que el compuesto
en cuestión no tiene grupos funcionales para reaccionar con la nihindrina
.
4.2 La prueba xantoproteica es una reacción química que se utiliza para detectar la
presencia de aminoácidos que contienen anillos aromáticos, como tirosina, fenilalanina y
triptófano. (Estrada, 2020) cuando estos aminoácidos reaccionan con ácido nítrico
concentrado, forman complejos amarillos o naranjas. El resultado del color naranja con
triptófano indica que el aminoácido está presente en la muestra.

4.3 Según (Herrera, 2014) La prueba de Millon es una reacción química utilizada para
detectar la presencia de tirosina en una muestra. En esta prueba, el reactivo de Millon
(ácido nítrico en presencia de nitrato mercúrico) produce un color rojo intenso o violeta con
la tirosina debido a la formación de complejos de fenol-mercurio. Aminoácidos como la
fenilalanina, triptófano y arginina no reaccionan de manera significativa con este reactivo y,
por lo tanto, no producen cambios visibles en la solución. Es posible que en la solución
problema la tirosina presente haya sido la responsable del cambio de color, mientras que los
otros aminoácidos no afectaron la reacción.
4.4 Reacción con ácido glioxílico. Según (Muñoz Ruiz, 2022) esta prueba es específica
para la identificación de triptófano libre o presente proteínas, en ella ocurre, una reacción de
tipo deductiva, donde el anillo presente en la cadena lateral de los alfa aminoácidos libres o
haciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer mediante reacciones con el
ácido glioxílico a pH ácido, puesto que forma complejos de coloración violeta oamarillo
violeta, permitiendo identificar al triptófano. Como se puede observar para esta prueba se
logró reconocer la formación del anillo en el triptofano y sus proteínas ya que la teoría nos
indica que los colores de nuestros resultados son correctos.
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4.5 Reacción con sakaguachi. La reacción de sakaguachi, es una prueba bioquímica

utilizada para detectar la presencia de arginina en una muestra.en condiciones normales,
según (Vazquez, 2014)cuando la arginina reacciona produce un color rojo o violeta, no
amarillo. lo que indica que para esta prueba hubo un error en los resultados.

4.6 Reacción acetato de plomo en medio alcalino. Según (Nelson, 2008)La falta de
cambio de color en la solución problema podría tener varias explicaciones como la
presencia de otros compuestos en la muestra que interfieren con la reacción o una
concentración insuficiente de grupos -SH para producir un precipitado detectable.

4.7 Reacción de Ehrlich. La histidina es un aminoácido que no produce indol, por lo que no
debería reaccionar en la prueba Ehrlich. Según (Muñoz Ruiz, 2022)
Se puede detectar la presencia de tirosina e histidina a través de la formación de un
complejo de coloración rosa o púrpura cuando el indol reacciona con
P-dimetilaminobenzaldehído conocido como reactivo de Ehrlich en un medio ácido al
realizar la reacción con ácido sulfanílico y nitrito de sodio.

5.TRABAJO PREVIO

5.1 Complete el siguiente cuadro.

Reacción Aminoácido Color obtenido Color obtenido

(patrón) con aminoácido con el problema
patrón

1- Ninhidrina Ácido aspártico Las sustancias que Violeta claro

poseen al menos un
grupo amino y un
carboxilo libre
muestran
reactividad con la
ninhidrina. La
positividad se
evidencia mediante
la aparición de un
color azul o púrpura.
En este caso, el
color observado fue
azul oscuro.
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Triptófano Naranja
2- Xantoproteica Es una reacción que
identifica los
aminoácidos que
contienen el grupo
bencílico (tirosina,
fenilalanina,
triptófano). La
positividad se
determina por la
aparición de un
color amarillo,
anaranjado o verde.
En este caso, el
color observado fue
naranja.

3- Millón Tirosina Es una prueba Sin cambio de color

utilizada para
detectar
aminoácidos que
contienen azufre y
las proteínas que
los incluyen. Se
identifican por la
formación de una
coloración rojo
ladrillo. En este
caso, se observó un
tono rojo pálido.

4- Hopkins-cole Triptófano Cuando una un anillo como

solución contiene amarilloso
una proteína que
contiene triptófano o
el aminoácido libre,
al reaccionar con el
reactivo
Hopkins-Cole y
añadir ácido
sulfúrico
concentrado, se
forma un anillo de
color violeta. En
este caso, se
observó la
formación de un
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anillo violeta muy

claro, casi
imperceptible.

5- Sakaguchi Arginina Esta prueba es Amarillo incoloro

selectiva para el
grupo guanidino
presente en la
arginina. Al
reaccionar este
aminoácido con
naftol e hipobromito
alcalino, se genera
una leve coloración
amarilla que puede
disminuir con el
tiempo. En nuestros
resultados,
observamos un tono
amarillo incoloro.

6- Acetato de Cistina Esta reacción es Sin cambio de color

plomo altamente específica
para aminoácidos
que contienen
azufre en su
estructura, como la
cisteína. Durante el
proceso, se produce
la hidrólisis alcalina
del grupo
sulfhídrico, dando
lugar a la formación
de sulfuro de sodio.
Luego, el plomo se
desplaza hacia el
sodio, lo que
conduce a la
aparición de un
color gris o negro.
En nuestros
resultados, hemos
observado un tono
gris característico.

7- Ehrlich Histidina Este reactivo tiene Sin cambio de color

la capacidad de
reaccionar con
diversos
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compuestos
orgánicos, como
índoles, aminas
aromáticas y
compuestos ureicos,
formando complejos
coloreados. Es
utilizado en la
determinación de
sustancias como el
LSD. En nuestros
resultados, se
observó la
formación de un
color amarillo
distintivo.

6. CONCLUSIÓN

Los experimentos llevados a cabo han logrado exitosamente el propósito de identificar

cualitativamente ciertos aminoácidos a través de reacciones colorimétricas. La
implementación de estas técnicas nos ha brindado datos valiosos sobre la composición de
nuestras muestras, lo que ha contribuido significativamente a nuestro entendimiento de la
química de los aminoácidos.

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