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Lab 2 Reacciones de Caracterizacion de Aminoacidos y Protein as 1

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PRACTICA DE LABORATORIO NO 2 REACCIONES DE CARACTERIZACION DE AMINOACIDOS Y PROTEÍNAS GÓMEZ CHRISTIAN (28035149) GUERRERO CHRISTIAN (26035140) MIDEROS CRISTIAN (29035142

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RESUMEN Se realizó la caracterización de aminoácidos y proteínas tales como glicina, prolina, fenilalanina, tirosina, triptófano, arginina, metionina, cisteína, cistina, caseína, muestra problema y biológica (frijol rojo) mediante las reacciones: de nihidrina, biuret, xantoproteíca, Millon, reconocimiento de arginina y la determinación de aminóacidos azufrados. Se obtuvieron resultados positivos y negativos para cada reacción dependiendo de la estructura de los anteriores aminoácidos. Xxxxxx y xxxxx Palabras claves: caracterización, reacción, aminoácido y proteína _________________________________________________________________________ http://books.google.com/books?id=Pm7lNZzKlaoC&pg=PA908&dq=caracterizacion+de+ aminoacidos+y+proteinas+ninhidrina&hl=es&ei=CFueTIPNNsKBlAfHidXsAg&sa=X&oi=b ook_result&ct=result&resnum=2&ved=0CDQQ6AEwAQ#v=onepage&q&f=false INTRODUCCION Basándose en las diferentes estructuras que poseen los aminoácidos, incluyendo los grupos característicos que algunos de ellos poseen, se puede plantear que existen diferentes tipos de reacciones que permiten determinarlos. Entre ellas están: 1. Reacción de Ninhidrina: permite identificar la presencia de proteínas y aminoácidos libres. El grupo -amino de los aminoácidos al reaccionar con la ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) forma complejos de color azul-violeta. 2. Reacción de Biuret: permite determinar la presencia de enlaces peptídicos en una muestra debido a la formación de un compuesto de coordinación de color violeta. El reactivo de Biuret consiste en CuSO4 en solución acuosa alcalina. 3. Reacción de Millón: permite identificar la presencia de tirosina en una muestra. La mezcla de nitrito y nitrato mercúricos y de ácido nítrico, (reactivo de Millón) reacciona con este aminoácido formando una sal de color rojo. 4. Reacción de Xantoproteica: esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos. Los aminoácidos reaccionan con ácido nítrico concentrado y forman nitrocompuestos de color amarillo.

5%y se calentó en baño maría durante 10 minutos. Reacción de Millón Se adiciono 2mL glicina. Reacción de Biuret Se tomo 1mL de glicina. posteriormente se les agregó 1 mL de nitrito sódico al 0. Se adicionó 2 mL de hidróxido de sodio al 30% a cada tubo y se calentó a baño maría durante 10 minutos.5. muestra biologica y problema. muestra biologica y problema en distintos tubos de ensayo. en distintos tubos de ensayo. Determinación de Aminoácidos azufrados: la Metionina. fenilalanina. La ecuación que identifica esta reacción es: Proteína + NaOH Reacción Xantoproteica Se adiciono 1ml de glicina. Se añadió 0. Posteriormente a cada tubo se adicionó 1mL de hidróxido de sodio al 30% y 0. en distintos tubos de ensayo. (Beyer et al. tirosina. cisteína. . cistina. en distintos tubos de ensayo. la Cisteina y la Cistina se reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona el ión sulfuro con una sal soluble de Plomo en medio alcalino. Se agito y se dejó enfriar 10 minutos en baño de hielo.05mL de -naftol al 0.5 mL de reactivo de millón al 0. metionina. muestra biologica y problema respectivamente. triptófano. muestra biológica (frijol rojo) y muestra problema. posteriormente se les agregó 1 mL de acido nítrico concentrado y se calentó a baño maría durante 10 minutos. Reacción de Aminoácidos Azufrados Se tomo una muestra de glicina.05%.5%. Reacción de Arginina En cuatro tubos de ensayo se adiciono 1mL de glicina. Seguidamente se añadió 5 gotas de hipobromito sódico a 1N y urea al 40%. arginina. 6. muestra biologica y problema. 1986) MATERIALES Y METODOS Reacción de Ninhidrina Se tomo una muestra de glicina. posteriormente se adiciono 1 mL de acetato de plomo al 10% y se calentó suavemente. Se les adicionó 2 mL de hidróxido de sodio al 30% y posteriormente se adicionó 3 gotas de sulfato cúprico al 1%. prolina. muestra biológica y problema. en distintos tubos de ensayo. se dejo en reposo durante 30 minutos. se enfrió los tubos en baño de hielo. Se adicionó 1 mL de ninhidrina a cada tubo y se calentó a ebullición en baño maría durante 10 minutos. triptófano. metionina. Reconocimiento de arginina: El grupo imino presente en la cadena lateral de la arginina reacciona con soluciones de -naftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rojos. tirosina.

y forman dióxido de carbono. el cual reacciona con la ninhidrina. es decir en presencia de NaOH. la coloración final es amarilla. (Rivera et al. 1979). Se debe tener en cuenta que la coloración azulada o violeta de las reaaciones es proporcional a la concentración del aminoácido. del que solamente el átomo de nitrógeno pertenece al aminoácido (Lehninger. 2001) La reacción se lleva a cabo en un medio alcalino. el cual es un agente oxidante fuerte que efectúa la descarboxilación oxidativa de los aminoácidos. En el caso de la cisteína. como lo fue el acetato de plomo. Reacción De Aminoácidos Azufrados: la prueba fue positiva para la cisteína y la muestra biologica debido a que son aminoácidos que poseen azufre en su estructura. los grupos tiol de dos moléculas de cisteína se han oxidado para formar un grupo disulfuro de modo que se establece un enlace covalente transversal entre ellas. amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original.RESULTADOS Tabla No. 1: Caracterización de aminoácidos y proteínas. El amoníaco y la hidridantina así formadas reaccionan con una segunda molécula de ninhidrina que da lugar a la formación de un pigmento color azul o violeta. el cual permite la separación del azufre de la estructura del aminoácido. y muestra biologica (frijol rojo) debido a que estas presentan un grupo amino libre. el azufre se combina con el plomo para producir un precipitado de color negro que corresponde a sulfuro de plomo. La ecuación de la reacción para el caso de la cisteína es: . Prueba muestra Biologica (frijol rojo) Muestra problema Glicina Prolina Fenillalanina Tirosina Triptófano Arginina Metionina Cisteína Cistina Ninhidrina Biuret Xantoproteica Millón Arginina azufrados + + + + + - + + + + + + + + - + - + + + - + DISCUSION DE RESULTADOS Reacción de la Ninhidrina: la prueba fue positiva para todas las pruebas: glicina. que estructuralmente no poseen el grupo amino libre. ya que no poseen azufre en su estructura. Al añadir una sal soluble en agua. sino un grupo imino. metionina y cistina la prueba fue negativa. En el caso de la prolina y muestra problema. glicina. prolina. metionina. Por el contrario para la muestra problema.

tal como se muestra en la siguiente reacción: . a pesar de que posee un anillo aromático en su estructura la prueba fue negativa.2g de fenílalanina. el cual reacciona frente a las sales de Mercurio a pH ácido. Pero la ecuación de la reacción se presenta a continuación: Reacción de Millón: esta prueba fue positiva para la muestra biologica. En el caso de la muestra biologica (frijol amarillo). Reacción Xantoproteica: esta prueba fue positiva para la tirosina.6g de triptófano´3. formando en un principio nitrotirosina y mas adelante una sal mercúrica de color rojo.7g de tirosina y 1. debido a que esta reacción detecta enlaces peptídicos y no aminoácidos libres. muestra problema y biologica. ya que esta no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio. se obtuvo un resultado positivo debido a que de ³100g de proteína ésta se encuentra conformada por un 5. glicina y tirosina debido a que estos poseen en su estructura un grupo hidroxifenilo.Reacción de Biuret: fue una prueba positiva solo para las proteínas. el reactivo de biuret cambió a color violeta en presencia de las anteriores proteínas. 4. El NaOH se constituye en el medio que permite la formación de complejos de coordinación Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. En el caso del triptófano y la muestra problema xxxxxx Reacción de Arginina: la prueba fue positiva para la arginina y la muestra biologica (frijol rojo) debido a que el grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la arginina reacciona con soluciones de -naftol y se oxida en presencia de hipobromito perdiendo un grupo imino. Los anillos aromáticos presentes reaccionaron con ácido nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo. es decir para la muestra biologica. triptófano. mas no para los aminoácidos analizados. Este comportamiento se debe a la presencia de anillos bencénicos en la estructura de las anteriores proteínas y aminoácidos. En el caso de la fenílalanina. Por tanto. La arginina oxidada reaccionó con otra molécula de -naftol en medio alcalina formando un complejo coloreado rojo.

Bioquímica estructural: conceptos y tests. Manual de química orgánica. 2001. López. pág.E. Mathews . 2002 K.En el caso de la glicina el resultado fue negativa. pero estos aminoácidos no poseen un grupo guanidinio por tanto se establece que se presentó un error experimental en los patrones establecidos para la clasificación de la prueba. 93 . Editorial Reverte. Editorial Mc Graw Hill. pág. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS y H. Holde.. Walter. W. Editor Tebar. 1986. Madrid. C. V. 2ª Edición. Rivera. 908 y C. Páginas 143-148 [3] y J. Beyer.

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