PRACTICA DE LABORATORIO NO 2 REACCIONES DE CARACTERIZACION DE AMINOACIDOS Y PROTEÍNAS GÓMEZ CHRISTIAN (28035149) GUERRERO CHRISTIAN (26035140) MIDEROS CRISTIAN (29035142

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RESUMEN Se realizó la caracterización de aminoácidos y proteínas tales como glicina, prolina, fenilalanina, tirosina, triptófano, arginina, metionina, cisteína, cistina, caseína, muestra problema y biológica (frijol rojo) mediante las reacciones: de nihidrina, biuret, xantoproteíca, Millon, reconocimiento de arginina y la determinación de aminóacidos azufrados. Se obtuvieron resultados positivos y negativos para cada reacción dependiendo de la estructura de los anteriores aminoácidos. Xxxxxx y xxxxx Palabras claves: caracterización, reacción, aminoácido y proteína _________________________________________________________________________ http://books.google.com/books?id=Pm7lNZzKlaoC&pg=PA908&dq=caracterizacion+de+ aminoacidos+y+proteinas+ninhidrina&hl=es&ei=CFueTIPNNsKBlAfHidXsAg&sa=X&oi=b ook_result&ct=result&resnum=2&ved=0CDQQ6AEwAQ#v=onepage&q&f=false INTRODUCCION Basándose en las diferentes estructuras que poseen los aminoácidos, incluyendo los grupos característicos que algunos de ellos poseen, se puede plantear que existen diferentes tipos de reacciones que permiten determinarlos. Entre ellas están: 1. Reacción de Ninhidrina: permite identificar la presencia de proteínas y aminoácidos libres. El grupo -amino de los aminoácidos al reaccionar con la ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) forma complejos de color azul-violeta. 2. Reacción de Biuret: permite determinar la presencia de enlaces peptídicos en una muestra debido a la formación de un compuesto de coordinación de color violeta. El reactivo de Biuret consiste en CuSO4 en solución acuosa alcalina. 3. Reacción de Millón: permite identificar la presencia de tirosina en una muestra. La mezcla de nitrito y nitrato mercúricos y de ácido nítrico, (reactivo de Millón) reacciona con este aminoácido formando una sal de color rojo. 4. Reacción de Xantoproteica: esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos. Los aminoácidos reaccionan con ácido nítrico concentrado y forman nitrocompuestos de color amarillo.

Seguidamente se añadió 5 gotas de hipobromito sódico a 1N y urea al 40%. metionina. triptófano. muestra biológica y problema. metionina. Posteriormente a cada tubo se adicionó 1mL de hidróxido de sodio al 30% y 0. Se adicionó 1 mL de ninhidrina a cada tubo y se calentó a ebullición en baño maría durante 10 minutos. triptófano.05%. posteriormente se les agregó 1 mL de acido nítrico concentrado y se calentó a baño maría durante 10 minutos. cisteína. prolina.5. cistina. 1986) MATERIALES Y METODOS Reacción de Ninhidrina Se tomo una muestra de glicina. se enfrió los tubos en baño de hielo. Reacción de Arginina En cuatro tubos de ensayo se adiciono 1mL de glicina. Se añadió 0. en distintos tubos de ensayo. se dejo en reposo durante 30 minutos. La ecuación que identifica esta reacción es: Proteína + NaOH Reacción Xantoproteica Se adiciono 1ml de glicina.05mL de -naftol al 0. Se adicionó 2 mL de hidróxido de sodio al 30% a cada tubo y se calentó a baño maría durante 10 minutos. Reacción de Millón Se adiciono 2mL glicina. arginina. muestra biológica (frijol rojo) y muestra problema. Reacción de Biuret Se tomo 1mL de glicina. 6. muestra biologica y problema en distintos tubos de ensayo. fenilalanina. tirosina. Se les adicionó 2 mL de hidróxido de sodio al 30% y posteriormente se adicionó 3 gotas de sulfato cúprico al 1%. muestra biologica y problema. . en distintos tubos de ensayo. (Beyer et al.5%y se calentó en baño maría durante 10 minutos. Determinación de Aminoácidos azufrados: la Metionina. Reconocimiento de arginina: El grupo imino presente en la cadena lateral de la arginina reacciona con soluciones de -naftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rojos. muestra biologica y problema respectivamente. posteriormente se les agregó 1 mL de nitrito sódico al 0. posteriormente se adiciono 1 mL de acetato de plomo al 10% y se calentó suavemente.5 mL de reactivo de millón al 0. muestra biologica y problema. Se agito y se dejó enfriar 10 minutos en baño de hielo. en distintos tubos de ensayo.5%. tirosina. Reacción de Aminoácidos Azufrados Se tomo una muestra de glicina. en distintos tubos de ensayo. la Cisteina y la Cistina se reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona el ión sulfuro con una sal soluble de Plomo en medio alcalino.

el azufre se combina con el plomo para producir un precipitado de color negro que corresponde a sulfuro de plomo. como lo fue el acetato de plomo. el cual reacciona con la ninhidrina. 2001) La reacción se lleva a cabo en un medio alcalino. la coloración final es amarilla. metionina. (Rivera et al. y forman dióxido de carbono. En el caso de la prolina y muestra problema. Se debe tener en cuenta que la coloración azulada o violeta de las reaaciones es proporcional a la concentración del aminoácido. del que solamente el átomo de nitrógeno pertenece al aminoácido (Lehninger. que estructuralmente no poseen el grupo amino libre. 1979). amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. 1: Caracterización de aminoácidos y proteínas. el cual es un agente oxidante fuerte que efectúa la descarboxilación oxidativa de los aminoácidos. el cual permite la separación del azufre de la estructura del aminoácido. El amoníaco y la hidridantina así formadas reaccionan con una segunda molécula de ninhidrina que da lugar a la formación de un pigmento color azul o violeta. Por el contrario para la muestra problema. Al añadir una sal soluble en agua. La ecuación de la reacción para el caso de la cisteína es: . es decir en presencia de NaOH. prolina. En el caso de la cisteína. Reacción De Aminoácidos Azufrados: la prueba fue positiva para la cisteína y la muestra biologica debido a que son aminoácidos que poseen azufre en su estructura.RESULTADOS Tabla No. metionina y cistina la prueba fue negativa. sino un grupo imino. glicina. ya que no poseen azufre en su estructura. Prueba muestra Biologica (frijol rojo) Muestra problema Glicina Prolina Fenillalanina Tirosina Triptófano Arginina Metionina Cisteína Cistina Ninhidrina Biuret Xantoproteica Millón Arginina azufrados + + + + + - + + + + + + + + - + - + + + - + DISCUSION DE RESULTADOS Reacción de la Ninhidrina: la prueba fue positiva para todas las pruebas: glicina. los grupos tiol de dos moléculas de cisteína se han oxidado para formar un grupo disulfuro de modo que se establece un enlace covalente transversal entre ellas. y muestra biologica (frijol rojo) debido a que estas presentan un grupo amino libre.

En el caso de la muestra biologica (frijol amarillo). se obtuvo un resultado positivo debido a que de ³100g de proteína ésta se encuentra conformada por un 5. 4.7g de tirosina y 1.2g de fenílalanina. Pero la ecuación de la reacción se presenta a continuación: Reacción de Millón: esta prueba fue positiva para la muestra biologica. es decir para la muestra biologica. ya que esta no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio. Este comportamiento se debe a la presencia de anillos bencénicos en la estructura de las anteriores proteínas y aminoácidos. Reacción Xantoproteica: esta prueba fue positiva para la tirosina.Reacción de Biuret: fue una prueba positiva solo para las proteínas. En el caso de la fenílalanina. tal como se muestra en la siguiente reacción: . El NaOH se constituye en el medio que permite la formación de complejos de coordinación Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. En el caso del triptófano y la muestra problema xxxxxx Reacción de Arginina: la prueba fue positiva para la arginina y la muestra biologica (frijol rojo) debido a que el grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la arginina reacciona con soluciones de -naftol y se oxida en presencia de hipobromito perdiendo un grupo imino. formando en un principio nitrotirosina y mas adelante una sal mercúrica de color rojo. triptófano. debido a que esta reacción detecta enlaces peptídicos y no aminoácidos libres. el cual reacciona frente a las sales de Mercurio a pH ácido. el reactivo de biuret cambió a color violeta en presencia de las anteriores proteínas. Los anillos aromáticos presentes reaccionaron con ácido nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo. Por tanto. mas no para los aminoácidos analizados. La arginina oxidada reaccionó con otra molécula de -naftol en medio alcalina formando un complejo coloreado rojo. glicina y tirosina debido a que estos poseen en su estructura un grupo hidroxifenilo.6g de triptófano´3. muestra problema y biologica. a pesar de que posee un anillo aromático en su estructura la prueba fue negativa.

1986. Editorial Mc Graw Hill. Editor Tebar. Mathews . 2002 K. 93 . W. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS y H. Holde. 908 y C. Manual de química orgánica.E..En el caso de la glicina el resultado fue negativa. López. pero estos aminoácidos no poseen un grupo guanidinio por tanto se establece que se presentó un error experimental en los patrones establecidos para la clasificación de la prueba. V. Bioquímica estructural: conceptos y tests. Editorial Reverte. Walter. Páginas 143-148 [3] y J. 2ª Edición. Beyer. pág. Madrid. C. pág. Rivera. 2001.

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