GUÍA DE LABORATORIO

LABORATORIO N 01
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS
NOVENO
NATURALES
2021
BIOLOGÍA – BEREMYS ORTIZ

OBSERVACIÓN EN EL MICROSCOPIO DE DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS.

I. OBJETIVO

Diferenciar dos grandes grupos de bacterias en función de sus diferentes componentes de la pared
celular.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

¿Qué es la tinción de Gram?

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La tinción de Gram es una técnica común que se utiliza para diferenciar dos grandes grupos de
bacterias en función de sus diferentes componentes de la pared celular. El procedimiento de
tinción de Gram distingue entre grupos Gram positivos y Gram negativos coloreando estas células
de rojo o violeta. Las bacterias Gram positivas se tiñen de violeta debido a la presencia de una
capa gruesa de peptidoglicano en sus paredes celulares, que retiene el cristal violeta con el que
están teñidas estas células. Alternativamente, las bacterias Gram negativas se tiñen de rojo, lo que
se atribuye a una pared de peptidoglicano más delgada, que no retiene el cristal violeta durante el
proceso de decoloración.

IV. PROCEDIMIENTO

Por medio de una serie de animaciones, se muestra el procedimiento y análisis por microscopio de
la tinción de gram de diferentes bacterias para su posterior observación en el microscopio.

Ingrese al enlace http://virtuallabs.nmsu.edu/stain.php , le aparecerá el siguiente recuadro:

Figura 1. Laboratorio virtual sobre tinción de gram. Tomado de (VirtualLabs, 20121)

De clic en Fullscreen. Luego en Continue.

Aparecerá un recuadro contándole su rol en la simulación y lo que debe hacer. De clic en

Continue. Durante la práctica, el docente hablará acerca de la información que proporciona el
laboratorio virtual. Luego de escuchar cada explicación, en varias secciones, le aparecerá el botón
Info y photo. De clic en cada uno de ellos para conocer acerca de los diferentes temas. Recuerde
anotar las observaciones y explicaciones más importantes.

Figura 2. Laboratorio virtual sobre tinción de gram. Tomado de (VirtualLabs, 20121)

De clic en Continue para proseguir con el laboratorio. Si desea volver a escuchar la explicación,
puede dar clic en el botón de Repeat .

Luego de varias escenas, le aparecerá un percutor para encender el mechero Bunsen. Ahora tome
1 mL del diluyente con la pipeta Pasteur en un tubo de ensayo. Esterilice la asa de inoculación en
la llama del mechero Bunsen hasta que se ponga al rojo vivo. Luego de que se haya enfriado, tome
una pequeña cantidad de yogurt del contenedor:

Figura 3. Toma de muestra de yogurt. Tomado de (VirtualLabs, 20121)

Coloque la muestra de yogurt en el diluyente (PBS). Agite suavemente el tubo de ensayo durante 5
a 10 segundos para mezclar la muestra con el diluyente. Esterilice nuevamente el asa de
inoculación en la llama del mechero Bunsen. Tome dos cantidades del tubo de ensayo y
transfiéralo al portaobjetos. Incline de lado a lado el portaobjetos para extender las gotas
adicionadas. Coloque el portaobjetos sobre el mechero Bunsen.

Luego de haber completado los pasos anteriores le aparecerá el siguiente recuadro:

Figura 4. Reactivos analíticos para la identificación de bacterias por Gram. Tomado de

(VirtualLabs, 20121).

Tome una cantidad de violeta cristal y adiciónelo sobre el portaobjetos. Espere 60 segundos y
luego enjuague con agua corriente. Realice el mismo procedimiento con el reactivo yodo de Gram.
Agregue unas gotas de alcohol y deje actuar por máximo 30 segundos. Finalmente, adicione unas
gotas de safranina y espere 60 segundos.
Ahora seque el montaje empleando hojas de papel. De acuerdo con las instrucciones del docente y
el procedimiento descrito, realice nuevamente la experiencia de adición de los reactivos.

Cuando realice el procedimiento correctamente, podrá observar el resultado del experimento.

Recuerde anotar sus observaciones y explicaciones importantes.

RESULTADOS:
En la siguiente tabla, escriba en las columnas gram positiva y gram negativa las diferencias entre
cada una.

Gram Positivas Gran Negativas

Tabla 1. Diferencias entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas.

Adjunte la captura de pantalla de cada tipo.

Bacteria Imagen

Gram negativa

Gram positiva

Tabla 2. Capturas de pantalla de cada tipo de bacteria.

ANÁLISIS DE RESULTADOS:

Responda las siguientes preguntas y adjunte las fotos de las sustancias o fenómenos
mencionados:

¿Qué es la solución salina taponada con fosfato (PBS)?

¿Qué es el yodo de Gram?

¿Por qué las burbujas de aire son un signo de contaminación?

¿Por qué las bacterias se tiñen de rosa o morado?

¿Qué otras soluciones podemos emplear en este experimento diferente a este reactivo?

DISCUSIÓN PARA EL INFORME

Realice un paralelo sobre las observaciones realizadas en el experimentos entre las bacterias
observadas.

¿Cómo funciona la tinción de Gram?

Describa los pasos para la tinción de gram.

CONCLUSIONES:
Escriba 2 conclusiones que surjan de la practica de laboratorio. Recuerde que deben
responder al objetivo de la práctica. Referencie la bibliografía empleada para su informe de
laboratorio en Normas APA 7ma Edición.

BIBLIOGRAFIA
VirtualLabs. (20121). VirtualLabs. Obtenido de Gram Staining (Beta version):
http://virtuallabs.nmsu.edu/stain.php