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TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM

Tinción Diferencial de Gram

Juana Valentina Suaza, Sara Sofía López Melo, María Paula Suárez, Alix Camila Lozano, Ana
Sofía Montaño, Paula Barrera, Danna Díaz

Liceo Campestre el Bosque

Biología

Andrés Felipe Colorado

20/05/21
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TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM
1.0. Introducción

La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir

entre varios tipos de células bacterianas. La tinción propuesta por el médico danés Christian

Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología, que

clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas.

La reacción de la tinción de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra

en las paredes celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas

de peptidoglucano, las cuales, a su vez, sostienen moléculas de ácido teicoico. El ácido

teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tinción. Un

complejo de las moléculas cristal violeta-yodo-ácido teicoico es muy difícil de remover.

Como la pared celular de las células Gram positivas retiene estos compuestos, es más difícil

decolorar una célula Gram positiva que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve

el cristal violeta de la célula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de

alcohol también disuelve mucho de la capa exterior de lipopolisacárido de la pared celular de

la pared Gram negativa, lo cual acelera la remoción del colorante primario cristal violeta de

estas células. Cuando otro colorante, usualmente safranina, se añade, las células Gram

positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el color

rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tinción, las células Gram positivas serán

del color del cristal violeta, o colorante primario, y las células Gram negativas serán del color

de la safranina que es el colorante de contraste. De acuerdo con lo anterior, el objetivo de la

práctica es Identificar las diferencias entre organismos procariotas, especificando las

características morfológicas y fisiológicas (Componente Organismo, 2015).

2.0. Procedimiento
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A partir de un cultivo líquido, tome un puñado de bacterias emulsionándolo en una

pequeña gota de agua o solución salina en el portaobjetos. Debe ser una suspensión fina, no

lechosa, o no se teñirá correctamente. Seque el portaobjetos al aire. Esto se hace

automáticamente en el módulo virtual

2.1. Caliente el portaobjetos: pulse el mechero Bunsen, pase el portaobjetos suavemente dos o

tres veces (1-2 segundos) por la llama. No sobrecaliente - esto podría células.

2.2. Inundar el portaobjetos con violeta de cristal durante 1 minuto.

2.3. Aclarar con H2O.

2.4. Inundar el portaobjetos con yodo durante 1 minuto.

2.5. Aclarar con H2O.

2.6. Decolorar con alcohol durante 5-10 segundos.

2.7. Aclarar con H2O.

2.8. Inundar el portaobjetos con safranina durante 1 minuto.

2.9. Aclarar con H2O.

2.10. Ver el portaobjetos bajo el microscopio.

3.0. Resultados

Mediante la práctica virtual se realizaron tres muestras distintas en el portaobjetos variando la

temperatura en cada una de ellas. A continuación, se pueden observar los resultados obtenidos en

dicho experimento.
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4.0. Análisis de Resultados

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El peptidoglucano es una molécula compuesta por péptidos y glúcidos, específicamente

por el N- Acetil glucosamina (NAG) y el N-Acetil murámico (NAM). Al mismo tiempo, este da

a los distintos tipos de bacterias sus formas, rigidez, resistencia a antibióticos y las interacciones

huésped-microorganismo. Mediante la medición de esta molécula que compone a la pared

celular de una bacteria, se puede definir si se está hablando de una bacteria Gram positiva o

Gram negativa. Con el fin de identificar y diferenciar estas bacterias, en el año 1884, el médico

danés Christian Gram realizó la propuesta de un proceso de tinción que permita clasificar las

bacterias según el porcentaje de peptidoglucano presente en la pared celular, la forma, tamaño y

estructuras internas y externas de estas. De modo accesorio, es importante considerar que la

importancia de identificar estos dos tipos de bacterias radica al momento de determinar el tipo de

antibiótico necesario para penetrar la pared celular, de modo que se escogerá el antibiótico que

sea más eficaz con base al tipo de bacteria.

Resulta cierto posiblemente que considerar la estructura de la pared celular es de vital

importancia, pues de esta depende la coloración que tomarán las bacterias. Si apelamos a un

ejemplo, la capa de peptidoglucano presente en las bacterias Gram positivas tiene un mayor

grosor y cantidad de capas en la pared celular, en las cuales se pueden evidenciar las moléculas

de ácido teicoico y ácido Lipoteicoico. Así mismo, tanto las bacterias Gram positivas como

Gram negativas presentan aminoácidos de tipo D, específicamente en las Gram positivas lisina y

en las Gram negativas alanina, sin dejar a un lado los Lipopolisacáridos que están presentes

también en esta barrera. De modo que, a diferencia de las bacterias Gram positivas que tienen

mayor capacidad de absorción del color cristal violeta, las Gram negativas cuentan con una sola

capa de peptidoglucano que se encuentra entre una membrana plasmática y una membrana

externa, lo que impide que todo el tinte penetre en la capa del peptidoglucano, siendo así, estas
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las bacterias que presentarán una menor coloración al realizar el procedimiento. Cabe aclarar,

que el uso de colorantes causa distintos efectos sobre las bacterias, los cuales varían si el

colorante es básico, ácido o neutro. Si apelamos a un símil, los microorganismos que suelen

reaccionar positivamente a colorantes ácidos pueden llegar a volverse Gram negativos debido a

que su alcalinidad aumenta. Del mismo modo, la variedad de colorantes utilizados sobre

bacterias puede causar efectos positivos y negativos sobre estas.

En concordancia con lo sostenido en los párrafos anteriores, se puede evidenciar que en la

primera fotografía obtenida hay presencia de Cianobacterias, esto debido a las altas temperaturas

que intensifican el crecimiento de estas. En segundo lugar, hay presencia de bacterias Gram

negativas, tanto Bacillus como Coccos, es decir que, en la segunda muestra de laboratorio, las

bacterias presentes el Peptidoglucano estaba a un 10% aproximadamente. Finalmente, en la

tercera muestra hay tanto presencia de Gram positivas como de Gram negativas.

5.0. Conclusión

Resumiendo lo planteado, podemos llegar a la conclusión de que, en este experimento, las

bacterias Gram positivas y Gram negativas tienen ciertas características morfológicas que los

diferencian, puesto que la primera de ellas indicaba una forma de tipo Cocco mientras que las

Gram negativas se mostraban como forma de tipo Bacillus. Por otra parte, el grosor y tamaño de

la capa de peptidoglucano es vital al momento de comparar morfológicamente una bacteria de la

otra ya que esta nos determinará el color que va a adquirir, siendo violeta para Gram positiva y

rosa para Gram negativa. Finalmente, durante el proceso de tinción, a nivel fisiológico no se

detallaron diferencias entre estos dos tipos de bacterias y la función del nivel de peptidoglucano

presente en su pared celular.

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