UNIVERSIDAD AUTONOMA DE COAHUILA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGIAS

ING. BIOQUIMICA

MICROBIOLOGIA

3°D
PRACTICA 1. TECNICAS DE TINCION

PROFESOR:

MIGUEL ANGEL DIAZ LEON

INTEGRANTES:

PAOLA MONSERRAT ROCHA BARRON

DENNISE DAYANNE OCHOA HERNANDEZ

KAREM PAOLA ARELLANO MUÑOZ

Miercoles 07 de septiembre del 2022

 INTRODUCCION

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de

ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre
la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es
la utilización de colorantes.

Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía,

son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamados de tinción
simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo
todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en
microbiología es la tinción Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las
bacterias pueden dividirse en dos grupos: grampositivas y gramnegativas. Esta
tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.

Mientras que las bacterias gramnegativas son constantes en su reacción, los

microorganismos grampositivos pueden presentar respuestas variables en ciertas
condiciones (son gramlábiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias
grampositivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y, en consecuencia,
se tiñen por la safranina apareciendo como gramnegativas. Análogo efecto se
produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras
modificaciones en la ejecución de la técnica. Por este motivo, es preciso atenerse,
en la práctica, al procedimiento establecido.
 MATERIALES

 Piceta
 Mechero bunsen
 Asa bacteriológica calibrada
 3 portaobjetos
 3 cubreobjetos
 Pinza de disección
 Riel de tinción
 5 goteros

Reactivos:

 Cristal ultravioleta
 Yodo Lugol
 Safranina
 Alcohol- cetona
 Verde de metileno
Aceite de inmersión
Fig1.reactivos
 PROCEDIMIENTO

(TINCION SIMPLE)

1. En un portaobjeto marcar un cuadrado que será donde se colocará nuestra

muestra.
2. Tomar una gota de metanol y añadirla en el cuadro que se acaba de marcar
sobre el portaobjeto.
3. Tomar con un asa calibrada la muestra (e-coli) sobre uno de los
portaobjetos con la gota de metanol y este se marcará como (tinción
simple).
4. Fijar al calor el portaobjeto con la muestra sobre el mechero bunsen.
5. Teñir con verde metileno durante 60 segundos para después retirar el
colorante con H2O dest. directamente de la piceta.
6. Observar al microscopio y registrar los datos.
 (TINCION DIFERENCIAL 1 Y 2)

1. En dos portaobjetos marcar un cuadrado que será donde se colocará

nuestra muestra.
2. Tomar una gota de metanol y añadirla en el cuadro que se acaba de marcar
sobre el portaobjeto.
3. Tomar con un asa calibrada las muestras (e-coli) y colocar en un
cubreobjeto y marcarlo como “TD1”, en otro portaobjetos colocar la
muestra (streptococcus aureus) y marcarlo como “TD2”.
4. Fijar al calor la muestra sobre el mechero bunsen.
5. Teñir con cristal-violeta las dos muestras durante 60 segundos para después
retirar el colorante con H2O dest. Directo de la piceta
6. Teñir con yodo/lugol las dos muestras durante 60 segundos para después
retirar el colorante con H2O dest. Directo de la piceta
7. Teñir con alcohol/acetona las dos muestras durante 60 segundos para
después retirar el colorante con H2O dest. Directo de la piceta
8. Teñir con safranina las dos muestras durante 60 segundos para después
retirar el colorante con H2O dest. Directo de la piceta
9. Observar al microscopio y registrar los datos.
 Resultados

1.1 Tinción simple

Figura 1. Se observa la morfología

de e-coli al haber realizado la
tinción con verde de metileno.

1.2 Tinción diferencial 1

Figura 1.2. Se observa una muestra Gram

negativa de e-coli con tinción roja y
bacilos.

1.3 Tincion diferencial 2

CONCLUSION
Figura 1.3. se observa una muestra Gram
positiva de streptococcus aureus con tinción
morada y cocos.
En esta práctica aprendimos las diferencias entre una bacteria Gram positiva y
Gram negativa, aprendimos a hacer dos tipos de tinciones. La tinción nos ayudó a
conocer su color, tamaño y forma. Al momento de ver al microscopio se observó la
pigmentación en las células que se estimaba.

BIBLIOGRAFIA

-Rojas-triviño UNA (2011). Conceptos y prácticas de microbiología general.

Naciones Unidas Universidad Nacional de Colombia- sede Palmira.

-Montoya Campuzano, (1999). Manual de Microbiología General.

-López Jacome L. Las tinciones básicas en mi laboratorio de microbiología. 2014. 3.

10-18.