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TINCION DE GRAM
*5°Semestre Grupo “C” Programa educativo Q.F.B. UACQ, ACS, Campus UAZ
Siglo XXI, carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6 s/n ejido La Escondida Cp. 98160
Zacatecas Zac. Ciclo agosto-diciembre 2010
OBJETIVO
RESÚMEN
La tinción de Gram es una prueba útil y de fácil realización que permite diferenciar las dos
principales clases de bacterias con el objeto de instaurar un tratamiento
Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de algún otro modo y
se tiñen con cristal violeta a continuación, se añade una solución yodada que actúa como
mordiente y luego se realiza un lavado con un agente decolorante (acetona) y agua con el
fin de eliminar el colorante no fijado. Posteriormente se cubre con un colorante de contraste,
safranina, para teñir de rojo las células que no hayan retenido el cristal violeta. Todo este
proceso tiene una duración inferior a 10 minutos. [1]
Laboratorio de Microbiología
LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM
UAZ, ACS, UACQ, QFB, QUINTO SEMESTRE GRUPO C
Practica de Microbiología 2010
INTRODUCCIÓN Y FUNDAMENTO
Laboratorio de Microbiología
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Practica de Microbiología 2010
Laboratorio de Microbiología
LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM
UAZ, ACS, UACQ, QFB, QUINTO SEMESTRE GRUPO C
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MATERIAL Y EQUIPO
Laminas portaobjetos
Cubreobjetos
Asa de platino
Microscopio Óptico (marca Carl Zeizz) línea Axiostar Plus (serie student).
Mechero de Bunsen
Puente para tinciones
Goteros
Lápiz graso
PROCEDIMIENTO
1. En cada lamina portaobjetos trazar una línea de seguridad con el lápiz graso.
2. Colocar una gota de agua en cada uno de los extremos del portaobjetos. Con
el asa de nicromo, después de haberla esterilizado en la flama, tome una
pequeña asada del microorganismo E. coli, haga el frotis en forma oval sobre
la gota de agua colocada anteriormente en la primera parte del portaobjetos.
Hacemos l mismo para el cultivo de S. aureus en el otro extremo del
portaobjetos.
3. Fijamos la preparación al calor, pero sin calentar demasiado el portaobjetos.
4. Repetir los pasos 2 y 3 en las tres láminas restantes.
5. Al primer portaobjetos cubrirlo con cristal violeta durante 60 s Tirar el exceso
de colorante y lavar al chorro de agua indirectamente, secar al aire.
6. Al segundo frotis cubrirlo con cristal violeta durante 60s. Tirar el exceso de
colorante y lavar con agua, agregamos lugol dejándolo sobre la preparación
durante 30s. lavamos con agua indirectamente y secamos al aire
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LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM
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OBSERVACION Y RESULTADOS
Portaobjetos No. 1
A B
E. coli S. aureus
Inmersión 100x Inmersión 100x
Portaobjetos No. 2
A B
E. coli S. aureus
Inmersión 100x Inmersión 100x
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Portaobjetos No. 3
A B
E. coli S. aureus
Inmersión 100x Inmersión 100x
Portaobjetos No. 4
A B
E. coli S. aureus
Inmersión 100x Inmersión 100x
DISCUSION
La dictaminarían que dé el químico al dar los resultados sobre un estudio de Gram
positiva o negativa es realmente importante para el diagnostico y buen tratamiento
de la patología relacionada microorganismos es necesario saber cómo influyen en
las manifestaciones clínicas las diferencias existentes entre la pared celular de las
bacterias Gram positivas y Gram negativas en su detección y en el tratamiento.
Porque existen componentes de la pared celular que contribuyen a la virulencia de
las bacterias protegiéndolas de las respuestas inmunitarias.
En el laboratorio se desearía eliminar de forma selectiva las bacterias Gram
positivas de una mezcla de bacterias Gram positivas y Gram negativas.
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LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM
UAZ, ACS, UACQ, QFB, QUINTO SEMESTRE GRUPO C
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CONCLUSION
La tinción de Gram es una herramienta muy útil en el laboratorio de microbiología así
como en los análisis clínicos y diagnostico medico siendo ineludible conocer su
fundamento y procedimiento, para poder tener una correcta interpretación de los
datos que nos otorga la diferenciación de Gram positiva y negativa concluyendo que
debido a la estructura de sus paredes celulares tendrán o no propiedades
patológicas diferentes.
CUESTIONARIO
1.-Mencione el grosor de la pared celular bacterianas Gram positivas y Gram
negativas:
Una bacteria grampositiva posee una pared celular gruesa. (150 a 500 A) que rodea
la membrana citoplásmica consta de varias capas y está formada principalmente por
peptidoglicano que contiene ácidos teicoico y lipoteicoico
Las paredes celulares Gram negativas son más delgadas.
Los colorantes son compuestos químicos que poseen un grupo cromóforo que es la
una parte o conjunto de átomos en una molécula responsable de su color a la
molécula y un grupo auxocromo que otorga al colorante la capacidad de disociarse
electro-líticamente y por lo tanto formar sales. El grupo auxocromo es el que facilita
la unión del colorante a otras sustancias con carga eléctrica.
. También se puede definir como una sustancia que tiene muchos electrones
capaces de absorber energía o luz visible, y excitarse para así emitir diversos
colores, dependiendo de las longitudes de onda de la energía emitida por el cambio
de nivel energético de los electrones, de estado excitado a estado fundamental o
basal.[3]
4.- Diga que colorantes secundarios se pueden utilizar como contraste, en esta
tinción.
Fucsina básica y Safranina
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LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM
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REFERENCIAS
1Daniel RA, Errington J: Control of cell morphogenesis in bacteria: two distinct ways
to make a rod-shaped cell, Cell 113:767-776,2003.
2-http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
*gráficos obtenidos de:
http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm
3. html.rincondelvago.com/espectroscopia-de-absorcion-molecular-uv-vis.html
4. Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009.
Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química,
UNAM. México.
Versión
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