UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS

ARMADAS – ESPE.
Departamento de Ciencias de la Vida

Carrera de Ingeniería
Agropecuaria
Informe de la práctica # 3

NRC

10127

Elaborado por:
Parra Guarango Genesis Nicole

Docente:
Alvaro Petronio Gavilanes Quizhpi

2022-2023
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXACTAS

UNIDAD N.º 1

INFORME DE PRACTICA N.º 3

1. Tema: La tinción de Gram

2. Objetivos.

• Estudiar lo que trata la tinción de Gram y su utilidad en reconocimiento de

bacterias.
• Aprender la manera correcta de realizar la tinción de Gram para evitar
inconveniente en su preparación.

3. Marco teórico

El procedimiento de tinción más ampliamente usado en bacteriología, Nos permite dividir a

las bacterias en dos grandes grupos taxonómicos: Gram positivas y Gram negativas, según
sea su comportamiento frente a la tinción.
La tinción de Gram diferencia a las bacterias en dos grandes grupos. Se llama bacterias Gram
positivas a aquellas que retienen la tinción azul-violeta, y se denomina bacterias Gram
negativas a las que se decoloran y después se tiñen con safranina (Rodríguez y Arenas, 2018).

Esta diferencia de tinciones se debe a la estructura de las paredes celulares de ambos tipos de
bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen una pared gruesa compuesta de
peptidoglucanos y polímeros, e impermeable, que hace que resista la decoloración. En
cambio, las bacterias Gram negativas tienen una capa delgada de peptidoglucanos más una
bicapa de lipoproteínas que se puede deshacer con la decoloración (Rodríguez y Arenas,
2018).
Los pasos en la técnica de tinción de Gram se muestran a continuación:

cristal violeta, colorante primario el cual se une a la pared celular bacteriana ya que tiene
afinidad con el peptdoglicano (González et al., 2020).

Lugol, reactivo que funciona como mordente, es decir, para la unión o fijación del colorante
e impide la salida del cristal violeta de algunas especies de bacterias, incluso luego del
tratamiento con un decolorante (González et al., 2020).

mezcla de alcohol acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de ésta,
así como también destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a
que ésta es soluble a la acción de disolventes orgánicos, como la mezcla de alcohol acetona.
safranina, la cual funciona como colorante secundario o de contratinción y sirve para teñir
las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-Lugol (González et al.,
2020).

4. Materiales y equipos.

• Simular virtual de tinción de Gram

• Computador
• Internet
• Videos relacionados con la temática
• Asa de siembra o material estéril para sembrar
• Mechero de alcohol
• Agua destilada
• Colorantes de tinción Gram (cristal violeta, lugol, alcohol-acetona 1:1, safranina)
• Portaobjetos
• Microscopio óptico

5. Procedimiento
• Se inicia simulación de tinción de Gram esterilizando el asa de inoculación pasándole
por el mechero, posteriormente extraemos con el asa de inoculación la muestra a
observar, y colocamos en el portaobjetos y la dejamos secar por cinco minutos.

• Paso los cinco minutos pasamos el portaobjetos por el mechero para fijarlo, este
procedimiento debe ser en 2 segundos. Ya está listo la muestra para colocar los
distintitos reactivos de la tinción de Gram.
• El siguiente paso es colocar el reactivo de cristal violeta en la muestra, donde todas
las bacterias se tiñen de color azul-violeta. Luego de un minuto lo lavamos
ligeramente la placa con agua.

• Como siguiente es poner el reactivo Lugol, donde todas las bacterias permanecen de
color azul-violeta., de igual manera que el anterior paso, dejamos actuar por lo
menos un minuto, luego se lava ligeramente la placa con agua.
• Utilizamos el siguiente decolorante alcohol acetona, en la cual las baterías Gram
negativas: se decoloran y Gram positivas: permanecen de color azul-violeta., pasado
un tiempo se lo lleva a lavar con agua corriente.

• Como ultimo reactivo de colocar en la placa es la safranina, en la Gram negativas: se

tiñen de color rojo-rosa. Gram positivas: permanecen de color azul-violeta. se deja
actuar por durante un minuto aproximadamente, luego se lava con agua corriente.
Con esto ya se encuentra listo para observar la muestra con el microscopio.
Luego de haber realizado correctamente la tinción de Gram, se lleva la placa al microscopio
para observar. Por medio de esta tinción se divide a los microorganismos en dos grandes
grupos, Gram positivos y Gram negativos, según retenga o no el cristal violeta utilizado en
la tinción, entonces las bacterias teñidas de color violeta nos indica que se trata de bacterias
Gram positivas y en cambio las que se tiñen de color rojo son bacterias Gram negativas.

6. Conclusiones.
• Con la tinción de Gram que consiste en teñir las estructuras de las paredes celulares
de las bacterias, en la cual se clasifican en dos grupos, Gram positivos que se visualiza
de color violeta, en cambio las que se observan de color rosado-rojo se tratan de
bacterias Gram negativas.
• En conclusión, se logro aprender los lineamientos a seguir para realizar la Tinción de
Gram, en la cual consiste teñir con distinto reactivos.

7. Recomendaciones.
En la tinción tener en cuenta el orden de colocar los reactivos para obtener un buen teñido de
las bacterias. También al momento de quitar el exceso de reactivos, que sea lo más cuidadosa
posible para evitar estropear el teñido.

8. Bibliografía.

Rodríguez PA, Arenas R.2018. Hans Christian Gram and His Staining. Dermatología
Cosmética, Médica y Quirúrgica 16 (2): 166-167.
https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2018/dcm182n.pdf

Arenas R, Micología médica ilustrada, 5ª ed., México, McGraw Hill, 2014, p. 381.
Química ES. (s.f.). tinción de Gram.
https://www.quimica.es/enciclopedia/Tinci%C3%B3n_de_Gram.html

González RC, Cuevas BE, Cortes ME, Orduña M. 2020. Las tinciones básicas en el
laboratorio de Microbiología: Un enfoque gráfico. UNAM FES Zaragoza.
https://www.zaragoza.unam.mx/wpcontent/Portal2015/publicaciones/libros/cbiologi
cas/libros/Tinciones.pdf