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Materiales y métodos
1. Biológico: Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Muestra de orina a analizar.
3. Colorantes y reactivos
2. Equipos:
Cinta reactiva para uroanálisis.
Tubo cónico para centrifuga.
Reporte
EXAMEN FISICO
El examen físico de la orina incluye la determinación de su color, aspecto y gravedad especifica. La
observación de estas características provee información preliminar respecto a algunas enfermedades
como sangrado glomerular, enfermedades hepáticas, errores innatos del metabolismo e infecciones en
el tracto urinario. Estos resultados pueden utilizarse para confirmar o explicar algunos resultados del
examen químico y microscópico de la orina.
EXAMEN QUÍMICO
El examen químico de la orina se basa en la metodología de tiras reactivas. Aunque su uso es
relativamente sencillo, representa una serie de variadas y complejas reacciones que requieren
condiciones específicas para su uso e interpretación Se agita la orina y se coloca en tubos cónicos de
plástico de 12 a 12 ml.
Anota el color y la turbidez
Introducir la cinta reactiva para uroanálisis. Se lee de acuerdo a la escala del colorímetro del envase.
EXAMEN MICROSCOPICO
El examen microscópico del sedimento urinario constituye un procedimiento de gran utilidad en el
estudio del riñón. Podemos observar cristales orgánicos e inorgánicos poco solubles, células como
eritrocitos, leucocitos y células epiteliales, así como material de naturaleza proteica insoluble como los
cilindros, además encontrar bacterias, levaduras, parásitos y muchos otros componentes.
Desarrollo de la práctica
Examen físico
Color y aspecto:
Mezcle la muestra, utilice un tubo claro, observe contra un fondo claro, utilice buena
iluminación, registre el color y el aspecto.
Gravedad especifica:
Siguiendo las instrucciones del fabricante, determine gravedad especifica según los métodos
que se tenga disponible (urinometro, refractómetro y/o reacción en tira reactiva). Compare los
resultados obtenidos por diferentes métodos.
QUIMICO
Objetivos:
Lograr el óptimo procedimiento para poder aprender la técnica de Tinción Gram de todos los
integrantes del grupo y comprender la importancia y la diferencia entra las estructuras de las
diferentes bacterias.
Materiales y métodos
1. Biológico:
2. Equipos:
a) Portaobjetos: varios
c) Guantes: varios
d) Asa bacteriológica
f) Rejilla de tinción
Violeta de genciana................................... 1g
Alcohol absoluto........................................10 mL
Desarrollo de la práctica
PROCEDIMIENTO:
SIEMBRA: Preparar un porta bien limpio y Coger una porción pequeña de muestra
con un palillo o una aguja enmangada y hacer una extensión sobre el porta.
Procesamiento de la muestra
1. Se toma cuidadosamente el plato de cultivo bacteriano con las manos cubiertas con
guantes como forma de evitar contacto directo con el germen cultivado.
2. Con el asa bacteriológica esterilizada (por flameo), se toma una pequeña muestra del
cultivo y se deposita sobre una gota de agua esterilizada en un portaobjetos limpio y
debidamente rotulado y se distribuye homogéneamente por la plaquita sin dispersarlo
mucho o dejarlo muy compacto para luego proceder al proceso de fijación.
FROTIS: Se fijo las células de ida y vuelta – hasta que se desagrego - hasta la mitad
del portaobjetos.
FIJACIÓN: con esto evitamos que cualquier sustancia infecte nuestra muestra y
luego, que nuestra muestra permanezca en el porta objeto (Se fijo por calor – a mechero.
• Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta
tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la muestra
contenida en el asa.
• Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la
muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama),
puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar.
El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser
colocado sobre el dorso de la mano.
Tinción GRAM
Tinción
Con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho
colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al
colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura
ambiente de 25 °C.
Enjuague
3. Echar sobre la preparación el lugol de Gram., hasta cubrir el frotis dejando que actué
durante 30 segundos.
Mordiente
Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto
más. El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y
determine su fijación a las bacterias
Sabemos también que los poros de las Gram + son mas pequeños que los de las
Gram -.
Entonces, la solución alcohol, contrae los poros de las bacterias cerrando completamente
los de las Gram + y parcialmente los de las Gram -. El resultado es que dicha solución ingresa
en estas últimas decolorándolas. Hasta aquí tenemos las Gram + violetas y cerradas y las
Gram - incoloras y abiertas.
Lavado y secado
Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire
libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.
6. Echar sobre la preparación la solución de safranina, dejándola actuar por espacio de
30 segundo.
Tinción de contraste
Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar
un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto.
Nuevo enjuague
8. Secado de lámina
Al concluir el proceso de coloración, la lámina se debe colocar de canto para que se escurra.
Debe tenerse en cuenta que el agua y en especial, el agua destilada, es un agente
decolorante, por lo que si se deja sobre el portaobjetos después de teñirlo demasiado
tiempo quita parte del colorante. Lo ideal es escurrir la lámina poniéndola de canto y
seguidamente secarla con papel de filtro.
Observar en el microscopio
Gráficos: