LABORATORIO No.
1
TINCION DE GRAM.
Álvarez Eduardo.1, Pacheco Angelee.1
1. Estudiantes de la Facultad de Odontología
Abril 2021
INTRODUCCIÓN.
Para la identificación de un
microorganismo es fundamental su
morfología tal como lo es su tamaño (de
unos pocos micrómetros), formas
incluyendo esferas (cocos), barras
(bacilos), filamentos curvados (vibrios),
helicoidales (espirilos y espiroquetas),
entre otras características que pueden ser
observadas mediante muestras en el
microscopio. Una de las técnicas más
empleadas en estas prácticas es la tinción
de Gram usada para la detección de
microorganismos presentes en medios
sospechosos que se basa principalmente en
la coloración de bacterias de tipo gram
positivas de color azul o violeta gracias al
cristal violeta y las bacterias gram
negativas de color rosa o rojo por la
safranina. Esta coloración se da debido a
la pared celular de estos microorganismos,
las bacterias se clasifican en Gram
positivas y en Gram negativas de acuerdo
a los componentes químicos de su pared
celular. Las Gram positivas poseen una
pared celular poco permeable y resisten la
decoloración. Las Gram negativas poseen
una pared celular más permeable, se
decoloran y luego adquieren la coloración
de la safranina. La coloración Gram
consiste en una técnica de tinción que
utiliza 4 componentes: un colorante básico
(cristal violeta), un mordiente (lugol), un
decolorante (alcohol cetona) y un
colorante de contraste (safranina). La
tinción de Gram o coloración Gram es un
tipo de tinción diferencial empleado en
microbiología para la visualización de
bacterias. Debe su nombre al bacteriólogo
danés Christian Gram, que desarrolló la
técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder
referirse a la morfología celular bacteriana
como para poder realizar una primera
aproximación a la diferenciación
bacteriana, considerándose Bacteria Gram
positiva a las bacterias que se visualizan de
color violeta y Bacteria Gram negativa a
las que se visualizan de color rosa.
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVO GENERAL
Adquirir los conocimientos necesarios
para planear, realizar, y poder interpretar
una tinción de Gram con los colorantes que
la componen, e identificar si se tratan de
bacterias Gram positivas o Gram negativas
al momento de observarla en el
microscopio
1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Elaborar correctamente frotis a
partir de una muestra de placa
dental supragingival.
 Conocer los pasos necesarios para
la correcta realización de la tinción
de gram.
 Manipular debidamente cada uno
de los materiales de uso recurrente
en las prácticas de laboratorio, con
base a las normas ya establecidas.
 Identificar qué tipo de bacteria es,
según los criterios de reacción al
Gram. si las bacterias son Gram (+)
o Gram (-).
2.1 MATERIALES. 4. Debido a que la muestra no es líquida,
se coloca una pequeña gota de solución
 Asa bacteriológica
salina sobre el portaobjetos antes de
 Porta objetos
realizar el frotis; se traza con la muestra un
 Cubreobjetos
espiral desde el centro hasta la periferia.
 Guantes
 Mechero 5. Nuevamente se calienta el asa para
 Fuscina desinfectarla.
 Microscopio
6. Dejar secar el frotis a temperatura
ambiente.
2.2 REACTIVOS. 7. Para la fijación se pasó tres veces a
través de la llama con la muestra hacia
 Azul de metileno – Cristal violeta
arriba.
 Lugol.
 Etanol 95% - Alcohol acetona 3.2 TINCIÓN
 Agua destilada.
Posteriormente se realiza el procedimiento
 Safranina.
para la coloración:
 Aceite de Inmersión.
8. Se agrega el cristal violeta sobre el
portaobjetos y se deja actuar por 1 minuto.
2.3 MUESTRAS/ORGANISMOS
9. Enjuagar con agua corriente y dejar
 Muestra de placa dental escurrir.
supragingival.
10. Después se le agrega la solución de
lugol y dejar actuar por 1 minuto
3. PROCEDIMIENTO 11. Escurrir la solución y enjuagar el
portaobjetos con agua corriente
3.1. CULTIVO.
12. Se agrega el alcohol-acetona, hasta que
- Se prepara el área de trabajo, los medios
se decolorara completamente.
de cultivos proporcionados y uso de los
guantes. 13. Por último, se agrega la solución de
Safranina y se deja actuar por 5 segundos,
1. Calentar el asa de inoculación hasta que
enjuagar, escurrir y dejar secar a
esté al rojo.
temperatura ambiente.
2. Tomar la porción de la muestra (de la
14. Colocar el portaobjetos bajo el
placa supra gingival) que posteriormente
microscopio óptico y agregarle una gota de
se va a examinar por medio de una asa o
aceite de inmersión en el portaobjetos
escobillón.
evitando el movimiento durante la
3. Se coloca la muestra sobre un aplicación para evitar burbujas, dejar que
portaobjetos limpio y sin grasa, el lente toque el aceite inversión y de esta
debidamente marcado forma enfocar en 100X para empezar a
identificar las bacterias.
 7. ¿Por qué Streptococcus mutans
adquiere el color del cristal violeta
y no el de la Safranina? ¿De qué
está compuesta su pared celular?.
Explique brevemente.

4. CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se ven las bacterias tras 5. RECURSOS
realizar una tinción de Gram?
 https://youtu.be/d0Pn2IaaYkk
2. ¿Qué es un mordiente en la tinción  https://xyoutu.be/30htD86TWzE
de Gram?  https://youtu.be/0TIoar2eH6o
3. ¿Cuáles son las tinciones simples?  https://youtu.be/FceD8FFhuew
4. ¿Qué es una tinción diferencial?  https://youtu.be/vJ_SBesXeJw
5. ¿Qué significa ácido alcohol
resistente?
6. ¿Cuáles son los reactivos y tiempos
empleados para la coloración
Gram?