BIOPROSPECCIÓN DE MICROORGANISMOS
Verónica Mabel Urbano Ledesma, Jhon Esteban Lame, Joselyn Peña, Jesús Vallejo
verourle@unicauca.edu.co, jhonlame@unicauca.edu.co
joselinpec@unicauca.edu.co, jesusvalle@unicauca.edu.co
I. INTRODUCCIÓN
Este informe abarca tres prácticas de
laboratorio en donde se realizó la
preparación de medios de cultivo, la
siembra y conteo de una muestra de suelo
obtenida de la facultada de ciencias
agrarias de la universidad del cauca para
el aislamiento de hongos.
Palabras claves- microorganismo, agar,
inoculo, bacterias, hongos
II. OBJETIVOS
-Preparar medios de cultivo para el
desarrollo y crecimiento de
microorganismos de interés.
-Caracterizar algunas colonias obtenidas
en la preparación de medios de cultivo y
realizar el correspondiente conteo de
acuerdo a las cantidades halladas en la
caja de Petri.
III. MARCO TEORICO
HONGOS 
Los hongos son organismos eucariotas
que no contienen clorofila, pero que
tienen paredes celulares, estructuras
filamentosas, y producen esporas. Estos
organismos crecen como saprófitos y
descomponen la materia orgánica muerta,
de los 100,000 a 200,000 especies
conocidas, cerca de 300 especies se
conocen en la actualidad a ser patógenos
para el hombre.
Hongos patógenos pueden existir como
levaduras o como mohos. Las levaduras
son organismos unicelulares y mohos son
estructuras filamentosas multicelulares.
Algunos hongos se presentan en ambas
formas, levaduriformes y filamentosas.
Estos se llaman hongos dimórficos.
Los hongos son ubicuos en la naturaleza y
la mayoría de las personas están
expuestas a ellos. El establecimiento de
una infección micótica generalmente
depende del tamaño del inóculo y de la
resistencia del huésped. La gravedad de la
infección depende principalmente en el
estado inmunológico del huésped. [1]
Figura1.Estructura de los hongos
MEDIOS DE CULTIVO

Son soluciones estériles que tienen macro

y micronutrientes, sustancias que
permiten el crecimiento de organismos.

Un medio de cultivo es un sustrato o una

solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las
condiciones de laboratorio, para realizar
un cultivo, se debe sembrar sobre el
medio de cultivo elegido las muestras en
las que los microorganismos van a crecer
y multiplicarse para formar colonias La
composición precisa dependerá de
la especie que se quiera cultivar, ya
que las necesidades nutricionales varían
considerablemente. Se pueden clasificar
de acuerdo a su estado, complejidad, y
aplicaciones. En cuanto al estado se
encuentran medios sólidos, semisólidos y
líquidos; los medios
sólidos contienen una sustancia gelificant
e conocida como agar-agar, los
semisólidos contienen una menor
concentración de agar-agar (0.5 a 0.7%) y
los líquidos no contienen agar-agar,
debido a su naturaleza, los
medios sólidos o agares se sirven en cajas
de Petri.

Figura 2. Caja de Petri con agar


Mientras que  los medios
líquidos o caldos de cultivo y los
semisólidos se sirven en tubos de ensayo.
Figura 3. Tubos de ensayo con caldo.
Según las aplicaciones de los medios de
cultivo se clasifican en enriquecidos,
selectivos, diferenciales.
AGAR PAPA DEXTROSA (PDA)
El agar papa dextrosa es un medio de
cultivo nutritivo sólido, no selectivo. En
él pueden crecer especies bacterianas y
fúngicas, pero su uso está indicado
especialmente para el aislamiento de
hongos filamentosos y levaduras.
También es conocido como medio PDA
por la expresión en inglés Potato
Dextrosa Agar. Es particularmente útil
para el aislamiento de hongos
fitopatógenos, es decir, aquellos que
afectan a los vegetales. Para sembrar las
muestras provenientes de vegetales
infectados se pueden usar otros medios
como el agar Sabouraud o malta- agar, sin
embargo para el uso rutinario se prefiere
el agar papa dextrosa por obtenerse mayor
esporulación. El medio papa dextrosa es
un medio muy sencillo y fácil de preparar
en el laboratorio. Contiene, como su
nombre lo indica, infusión de papa,
dextrosa y agar-agar. Adicionalmente
pueden agregársele sustancias inhibidoras
para evitar el crecimiento bacteriano y
aumentar la selectividad para especies de
hongos. [2]
Figura 4. Agar (PDA)
CARACTERISTICAS
MACROSCOPICAS DE LOS HONGOS
Las colonias de hongos se pueden diferenciar
por características físicas, como:
-Color: los hongos muestran una tonalidad de
color, que permite diferenciarlo de otras
colonias.
-Topografía: describir y representar en un
plano la superficie del hongo como
rugosa, umbonada, verrucosa y
aplanada.
-Textura: puede ser algodonosa,
aterciopelada, granular, polvorienta o
glabrosa.
-También por su tasa de crecimiento.
 IV. METODOLOGIA VI. PROCEDIMIENTO

Para la preparación del medio de PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

cultivo se utilizó el agar papa dextrosa
-Medir 120 ml de H2Od y trasvasarlo al
(PDA), el cual es un medio para el
matraz de 250 ml.
cultivo de hongos.
- Medir 90 ml de H2Od con la probeta y
En el momento de realizar el trasvasarlo al matraz de 100 ml.
aislamiento, se optó por utilizar la - Medir 9 ml H2Od en cada tubo.
técnica de aislamiento por dilución
. cálculo: cada caja de Petri se llenó con
seriada y siembra en placa, ya que la
20 ml, así que por las 5 cajas se necesitó
muestra a utilizar era sólida.
100 ml; pero por prevención se preparó
Finalmente se realizó el conteo, 20 ml de más, así que en total fueron
diferenciando colonias de hongos y 120ml.
bacterias que proliferaron en las cajas
de Petri.

V. MATERIALES

-1 Erlenmeyer de 250 ml

-1 Erlenmeyer con 90 ml de H2Od

- 4 Tubos con tapa rosca Figuras 5. Agar a utilizar para el cultivo

- 5 cajas de Petri Usando una simple regla de tres se pudo

determinar cuántos gramos (g) de PDA se
- Puntas de 1 ml necesitaba disolver para obtener los ml
- Micro-pipeta de 1 ml deseados, así:

- Puntas de 100 µl 39 g 1000 ml

- Micro pipeta 100 µl X g de PDA 120 ml

- Perlas de vidrio X g de PDA = 120 ml x 39 g

- Probeta 1000 ml

- Plancha X g de PDA = 4,68 g PDA

-Papel de aluminio

. Diluir:
-Pesar 4,68 g de agar para disolverlo en
120 ml de H2O destilada para luego ser
diluido.
-Poner a calentar el Erlenmeyer en la
plancha, sin dejar que hierva y agitar
constantemente.
-Pasado unos minutos, bajar el
Erlenmeyer y cubrir con papel aluminio.
-Colocar los dos Erlenmeyer, los tubos y
las cajas de Petri en la autoclave (la cual
estará prendida previamente, con agua
suficiente) por 2 Horas.
Figura 6. Materiales listos para auto-
lavado.
. Procedimiento para el uso de la
autoclave
-Comprobar el nivel de agua.
-Colocar en su interior el material a
esterilizar.
-Atornillar la tapa, apretar los tornillos
por parejas diametralmente opuestas de
forma que la tapa encaje perfectamente.
-Abrir la válvula de vapor y encender la
fuente de calor.
-Una vez que salga el vapor por la
válvula, se espera al menos 5 minutos
para expulsar todo el aire y cerrar la
válvula.
-Vigilar el manómetro y la válvula de
seguridad. Cuando se alcanza la presión
requerid, disminuir la intensidad de calor.
-Dejar que transcurra el tiempo necesario.
-Apagar la fuente de calor.
- Esperar que el manómetro descienda a
cero, abrir la llave de vapor.
-Esperar unos minutos y abrir la tapa.
OBTENCIÓN DE MUESTRA
La toma u obtención de muestras es el
procedimiento que consiste en recoger
partes, porciones o elementos
representativos de un terreno, a partir de
las cuales se realizará pruebas en diversos
ámbitos, en nuestro caso se realizó con el
fin de encontrar hongos, entre ellos con
mayor prioridad el hongo aspergillus
Níger, ya que el objetivo de estudio es
referente a esta clase de hongos. Para la
toma de la muestra se consultó con
anterioridad en qué lugares se encuentran
ese tipo de hongos. El hongo Aspergillus
Níger se lo puede encontrar en los suelos
húmedos y con materia orgánica puesto
que estas condiciones son las que
favorecen su crecimiento, por lo tanto, la
muestra fue tomada de la facultad de
ciencias agrarias en un lugar en donde
había humedad y materia orgánica de los
árboles, para tomar la muestra se tuvo en
cuenta los siguientes aspectos:
-Se realizó en condiciones de máxima
asepsia: con el fin de evitar
contaminaciones de la muestra o del
ambiente.
-No hubo contacto con sustancias
desinfectantes.

-Delimitación del área donde se tomó la

muestra.

-Herramientas y materiales necesarios:

Para la toma de muestra se utilizó los
implementos necesarios como barreno,
pala (fueron desinfectados con alcohol y
una mechera) y bolsa plástica.
-Toma de la muestra: se tomó la
muestra cada 30 pasos limpiando la
superficie del terreno. Las muestras se
tomaron entre 20 y 30 cm de profundidad.
Luego de tener las muestras se
homogenizaron.
Figura 8. Materiales listos para auto-
clavado
-Conservación de las muestras: las
muestras fueron guardadas en un
refrigerador. De esta manera se realizó el
procedimiento para la toma de la muestra
para su posterior estudio.
AISLAMIENTO POR DILUCIÓN SERIADA
Y SIEMBRE EN PLACA

. Preparación de la muestra

-Se pesaron 10g de la muestra los cuales

se diluyeron en el Erlenmeyer de 100 ml,
que contenía 90 ml de H2O destilada
esterilizada.

F
Figura 7.Obtencion de muestra. i
g
- Depositario de muestra: la muestra fue u
depositada en una bolsa la cual se puede r
serrarse con facilidad, impidiendo la a
contaminación de la muestra.

9. Traspaso de la
muestra al Erlenmeyer
El traspaso se hizo en un mesón de
laboratorio usando como barrera para
microorganismos dos mecheros.
. Siembra por dilución
se dejaron 8 días en la incubadora,
realizando un seguimiento cada 48 horas
para ver si hay presencia de hongos en la
muestra observando cómo crecen y se
producen.

La dilución se llevó a cabo tomando 1 ml VII.Observaciones

de la muestra diluida del Erlenmeyer y En el seguimiento del crecimiento de los
agregándosela al tubo número 1, que hongos se observó variaciones en el
contiene 9 ml de H2Od esterilizada (todos número de colonias según su grado de
los tubos tienen el mismo contenido), de dilución como muestra la Tabla 1:
este tubo se toma 1 ml nuevamente y se
traspasa al tubo 2 y así con todos los Viernes(col) Martes(col)
tubos, esto con el fin de que la
Agar 1 Más de 100 Más de 100
concentración de organismos se diluya col. col.
cada vez más y se obtengan las
concentraciones 10−2 ,10−3 ,10−4 y 10−5 Agar 2 Más o Mayor a
menos 95 100 col.
respectivamente.
col.
Para realizar las diferentes Agar 3 Más o Más o
concentraciones, cada vez que se hizo una menos 57 menos 63
nueva dilución se cambió las agujas de col. col.
inyección.
Agar 4 Más o Más o
menos 51 menos 56
col. col.
Agar 15 Más o Más o
menos 47 menos 53
col.
Figura 10. Realización de la dilución. Tabla 1. Numero de colonias. Nota: colonia (col). La segunda
observación se debió realizar el martes, porque no había
De cada tubo se tomó 1ml el cual fue ascenso al laboratorio de microbiología.
trasladado a las cajas de Petri.
Características macroscópicas de los
agares.
Finalmente, las muestras de las
Agar -1(10−1 ¿.
concentraciones se esparcen con perlas en
las cajas de Petri para que haya -Cerca de 13 colonias de hongos color
uniformidad. negro, topografía aplanada, de textura
Figura 12. Esparcimiento de la muestra con perlas. aterciopelado.

Una vez terminada la siembra se pasa las -Dos colonias de hongos color blanco,
cajas de Petri a la incubadora la cual está con textura algodonosa y topografía
a 25ºc y para esperar los resultados totales aplanada.
-Dos colonias de color blanco, con textura
algodonosa y topografía aplanada, pero se
diferencia de la anterior por segregar una
sustancia color amarillo.
-Se observaron colonias de bacterias
filamentosas de margen blanqueado, de
elevación plana, de superficie lisa, de
textura viscosa, de color blanco opaco,
con un tamaño mediano.
-También se vieron bacterias de forma
circular, de margen entero y elevación
plana, teniendo una superficie lisa y con
textura viscosa, de color blanco opaco y
tamaño pequeño y mediano.
Agar -2(10¿¿−2) ¿.
-Solo se observaron colonias de bacterias,
sin hongos.
Agar -3(10¿¿−3)¿.
-Se apreció una sola colonia de color rojo,
de textura aterciopelada y topografía
aplanada. También había bacterias.
Agar -4(10¿¿−4) ¿.
-Se observaron bacterias de forma
circular, de margen entero y elevación
plana, teniendo una superficie lisa y con
textura viscosa, de color blanco opaco y
tamaño pequeño.
Agar -5(10¿¿−5) ¿.
-Crecieron solo colonias de bacterias.
VIII. Análisis de resultados
La siembra fue hecha por dilución: 10−1
10−2 , 10−3 , 10−4 y 10−5 .Se emplean
soluciones diluidas para que cada colonia
formada provenga de un solo
microorganismo, aunque algunas
agrupaciones no pueden ser separadas por
las diluciones.
Para realizar el conteo y análisis de la
siembra realizada se tuvo en cuenta algunos
criterios como:
-Cada punto es una colonia
-El rango máximo para realizar conteo de
forma individual o directa en hongos es de
10 a 100 y en bacterias es de 30 a 300.
. Concentración 10−1 : se presentó 6
colonias de hongos, bacterias y presencia de
algunas levaduras.
Figura 13. Agar 1
En esta dilución se observa una mayor
cantidad de microorganismos, esto gracias a
que su concentración de muestra es mayor.
Los hongos, se ven en gran cantidad ya que
se reproducen por medio de esporas, las
cuales se dispersan en un estado latente, que
se interrumpe solo cuando se hallan
condiciones favorables para su germinación.
Cuando estas condiciones se dan, la espora
germina, surgiendo de ella una primera hifa,
por cuya extensión y ramificación se va
constituyendo un micelio.  Siendo el PDA
(agar papa dextrosa) un medio de cultivo de
propósito general para levaduras y mohos, se
estima que es este el que estimula la
esporulación de los mohos y la producción de
pigmentos que observamos en esta dilución.
.Concentración 10−2 : en esta concentración
crecieron 6 bacterias de color amarillento, 40
de color blanco, con una forma circular 4.
Al diluir más, se reduce la concentración de
carga microbiana y es por eso que vemos una
ligera reducción de colonias de los
microorganismos presentes en la muestra
inicial
Figura 14. Agar 14
Concentración 10−3
Figura 15. Agar 3
. Concentración 10−3 : se observa la
presencia de 43 colonias de bacterias, 3
levaduras y no se observa presencia de
hongos.
En la dilución número tres, se observa la
presencia de bacterias y algunas
levaduras, pero no de hongos, esto pudo
ser provocado por la misma dilución
realizada donde probablemente los
hongos no había presencia de hongos
(hay que tener en cuenta que se esperaba
mayor producción de hongos en las
diluciones en general pero no fue así) o
por la contaminación de los instrumentos
utilizados. Por otro lado, las levaduras
crecen a temperatura ambiente ,1
atmósfera y a un pH ligeramente ácido, lo
cual puede ayudar a que no crezcan
bacterias en este medio tan rico puesto
que las as bacterias tienen una tasa de
crecimiento mayor que las levaduras, por
lo que pueden contaminar el medio e
impedir el crecimiento de la levadura, es
por esto que en esta concentración se
obtiene menos levaduras que en las
anteriores, siendo las bacterias los
microorganismos dominantes y con
mayor reproducción.
En esta concentración si se logró hace el
conteo de colonias dando como resultado:
63x103x10= 630000 UFC/gml
= 63x 105 UFC/gml
Concentración 10−4 :
Figura 16. Agar 4
En esta concentración se puede analizar
cómo va disminuyendo la concentración de
la muestra lo cual no indica que el
crecimiento en la siguiente vaya hacer menor
de igual forma se observan dos tipos de
colonia, una pulvida y una circular de color
blanco de aspecto seco.
Se determinaron 56x 105 UFC/gml en este
agar, mostrando una disminución en la
población de microorganismos.
Concentración 10−4 :
Figura 17. Agar 5
En la última concentración se puede
observar que las disoluciones, la muestra va
disminuyendo las concentraciones de la UFT
en este caso se puede observar con mejor
visualización como hay solo dos colonias, la
colonia que en este caso se mira de forma
filiforme de color blanco con un tono gris en
el centro de aspecto seco se alcanza a contar
26 de esa especie y por otra parte 8 de la
especie circular y pequeña de color blanco
total. Hubieron 53x105 UFC/gml en el agar,
siendo la de menor numero de
microorganismos de todos los medios de
cultivo.
En la discusión de resultados se analizó que
el conteo en general no dio el resultado
esperado al momento de realizar el
aislamiento, porque se encontró una gran
variedad de bacterias como era de esperar a
la -1 se encontró 2 tipos de hongos uno de
aspecto algodonoso y color blanco con una
textura aterciopelada y el otro de color
negro, con topografía aplanada y textura
granular, características muy parecidas al
aspergillus Níger con menor cantidad de
colonias pero mayor diversidad de especies
de bacterias y sucesivamente -2,-3, -4, -5
fueron aumentando la cantidad pero con el
factor de menor diversidad y ya no había
presencia de hongos. Esto conlleva a pensar
que al momento de hacer las diluciones lo
que se obtuvo fue la separación de la
bacteria y el objetivo era encontrar el hongo
pero se proliferaron las bacterias
rápidamente, lo cual indica que las bacterias
son capaces de degradar el almidón y vivir
allí además de que otra hipóstasis que
conlleva a especular por qué no crecieron
más hongos, es que el suelo donde se
obtuvo la muestra tenía pocas esporas de
hongos, posiblemente por ser un ambiente
inadecuado para el crecimiento de hongos.
IX. Cronología
Miércoles
Viernes
Martes
Jueves
Lunes
Prepar
Semana 1
ación
de
medios
de
Recole Siembr Observaci
Semana 2
cción a de ón de
de inocul crecimient
muestr o o de
a microorga
 Observ
Semana 3
ación
de Caract
crecimi erística
Tabla 2. Tablaento s
de cronología

X. Conclusiones

-Las bacterias crecieron en todos los

agares, con múltiples colonia a diferencia
de los hongos, que solo se encontraron en
dos cajas de Preti.

-El número de organismos formadores de

colonias es relativo a la concentración del
inoculo, entre más concentrado sea, más
microrganismos van a crecer.

BIBLIOGRAFIA

-[1] Hongos - Microbiologia II.Recuperado

el 16 de noviembre de 2019-de-
https://mundodemicrobiologia.weebly.com/-
hongos.html

-[2] Agar papa dextrosa: fundamento,

preparación y uso – Lifeder.Recuperado el 16
de noviembre de 22019-de-
https://www.lifeder.com/agar-papa-dextrosa/