Medios de cultivo

Culture media, assemblies and microcultures

28/02/20
Autores: Naranjo Cristian, Morales Santiago

Resumen:
En esta práctica de laboratorio se realizaron siembras de Alternaria spp en los agares ogey,
Sabouraud, rosa de bengala y papa dextrosa, además se prepararon medios de cultivo donde
se haría el posterior aislamiento de microorganismos ambientales. En la práctica
observamos la estructura de Alternaria spp al microscopio y su morfología y crecimiento
en los diferentes agares, consultamos las características principales de los diferentes agares
y observamos el crecimiento del hongo en estos agres, determinando así sus necesidades
nutricionales y su capacidad de crecimiento, el microrganismos creció satisfactoriamente en
todos los agres sin contaminación notándose un crecimiento mayor en el agar Sabouraud y
el crecimiento mas inhibido en el agar rosa de bengala. Cabe destacar que también se
siembra Alternaria spp en agar agua, donde utilizó sus reservas energéticas para poder
reproducirse, en este agar fue más fácil observar sus estructuras al microscopio.

Abstract:
Introducción:
El mundo de los hongos ha estado en
contacto con el hombre desde su origen
mismo, a través de los años éstos han
tenido múltiples usos y fines, quizás en
un inicio fueron utilizados como ornato y
en el afán del hombre por encontrar
nuevas fuentes nutricionales, como
alimento. Hasta el siglo XVIII, los únicos
hongos conocidos fueron los
macromicetos o setas, pero gracias a la
creación del microscopio por
Leeuwenhoek, se nos ha permitido
asomarnos al mundo no perceptible por el
ojo humano, y por ende hemos
encontrado el vasto grupo de los hongos
microscópicos, con lo que el hombre ha
obtenido múltiples beneficios, como el
desarrollo de variados antibióticos, pero
también ha descubierto los
microorganismos patógenos para él,
animales, plantas e insectos. Los hongos
son un grupo diverso de organismos
unicelulares o pluricelulares que se
alimentan mediante la absorción directa
de nutrientes. Los alimentos se disuelven
mediante enzimas que secretan los
hongos; después se absorben a través de
la fina pared de la célula y se distribuyen
por difusión simple en el protoplasma.
Junto con las bacterias, los hongos son los
causantes de la putrefacción y
descomposición de toda la materia
orgánica. Hay hongos en cualquier parte
que existan otras formas de vida (Llontop.
2011)
Uno de los sistemas más importantes para
la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el
que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Los
medios de cultivo son mezclas de
sustancias que van a permitir el óptimo
crecimiento y desarrollo de los hongos.
Es un sustrato o solución de nutrientes, en
los que crecen y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el
objeto de aislar las diferentes especies en
este caso de hongos, para luego proceder
a su identificación y llevar a cabo una
serie de estudios complementarios. Todos
los medios de cultivo utilizados en
micología contienen los nutrientes
suficientes para asegurar el desarrollo de
los hongos (carbono, nitrógeno,
vitaminas, oligoelementos, etc.). El pH ha
de ser ligeramente ácido para facilitar el
crecimiento de los hongos e inhibir al
mismo tiempo el desarrollo de otros
microorganismos. También se añaden
antibióticos antibacterianos para inhibir el
crecimiento de las bacterias saprofitas que
suelen contaminar las muestras. Los más
usados son el Cloranfenicol y la
Gentamicina. Se añade también actidiona
(Cicloheximida) que inhibe el desarrollo
de hongos saprofitos ambientales (aunque
tiene el inconveniente de que inhibe
también el crecimiento de Cryptococcus
neoformans). (Uribarren et. Al, 2016)
Alternaria spp. es un hongo dematiáceo,
perteneciente al orden Pleosporales,
familia Pleosporaceae. El género
Alternaria abarca cientos de especies. La
mayoría son saprofitas, encontrándose en
el suelo, material en descomposición y
aire. Este es el hongo que se usará en la
práctica (Jiménez. 1993)
En esta práctica se reconoce la correcto aislamiento de hongos y
importancia de los medios de cultivo y el levaduras.

Procedimiento
Siembra
Se nos entrega una caja con el hongo
Alterania spp, Posterior a esta entrega se
unos pequeños orificios para que el
microorganismo pudiera hacer
intercambio gaseoso. Se incubó a
temperatura ambiente y con la caja
invertida.
Preparación de medios de cultivo
Agar PDA
Para la preparación del agar papa-
dextrosa se cortó una papa en cuadros,
específicamente 50g y se agregaron a 250
mL de agua y se dejó hervir, después de Ilustración 2 Alternaria spp en agar
esto se extrae el líquido resultante, a este PDA, se observa un crecimiento
abundante
liquido se le agrega 3.75 g de agar-agar y
5 g de dextrosa, se llevó al autoclave el
medio, se dejó enfriar y se sirvió. En este
medio se sembraron hongos ambientales

Resultados y análisis

Se realizó la siembra de Altenaria spp en

los agares comerciales OGY, PDA, SAB,
RB y en medio con solo agua, se dejó el
hongo a temperatura ambiente y se
observo su crecimiento.
Ilustración 3 crecimiento de Altenaria
spp en agar OGY, las colonias tienen
un tamaño mediano en comparación
con las delagar PDA

Ilustración 5 En este medio se observa
el mayor crecimiento de Alternaria spp,
siendo el medio más adecuado de los
utilizados en clase para su recuperación conidio,
Altenaria spp
AGAR CON PAPA Y DEXTROSA
El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose
Agar, PDA, por sus siglas en inglés) es un
medio de propósito general para
levaduras y mohos que puede ser
suplementado con ácidos o antibióticos
para inhibir el crecimiento bacteriano. Es
recomendado para uso con métodos de
conteo en placa para alimentos, productos
lácteos y pruebas realizadas en
cosméticos. El Agar Papa Dextrosa
(PDA) puede ser usado para el cultivo de
levaduras y mohos clínicamente
Es un hongo de crecimiento rápido en
diferentes medios de cultivo como agar
Sabouraud, papa dextrosa y harina de
maíz; sin embargo, el agar papa zanahoria
es de elección para su identificación. La
incubación se realiza a 25°C por 7 días,
pudiéndose observar macroscópicamente,
colonias planas y algodonosas, de
coloración blanca grisácea inicial y
posteriormente se observa su superficie
de color café o verde oscura, el reverso de
la colonia es café oscuro a negro, como
resultado del depósito de pigmento
dihidroxinaftaleno-melanina. El examen
microscópico del cultivo puede realizarse
sin tinción, observándose hifas septadas
dematiáceas, conidióforos septados con
pared lisa o rugosa, simples o simpodiales
con varios poros de inserción y, conidios
únicos o en cadenas acropétalas con
forma ovoide u obclavada,
septados longitudinal y
transversalmente. El final del
cerca del
conidióforo es redondo, mientras que se
estrecha hacia el ápice. Dicha
característica les da la apariencia típica a
los conidios. (Jiménez, 1993)
significativos. La base (infusión de papa)
nutricionalmente rica, estimula la
esporulación de los mohos y la
producción de pigmentos en algunos
dermatofitos.
Este medio es excelente para demostrar
las características de color de las colonias
de hongos. Estudios morfológicos de los
hongos filamentosos El reconocimiento
de mohos o hongos filamentosos se basa
en el estudio macroscópico y
microscópico de las colonias.
(Vanderzant, 1992)
AGAR GLUCOSADO SABOURAUD
Este medio puede ser utilizado para el
aislamiento, identificación y conservación
de hongos saprófitos y patógenos. Es un
medio nutritivo cuya alta concentración
de glucosa y el pH ácido actúan
inhibiendo el desarrollo bacteriano. El
agregado de antibióticos aumenta la
selectividad del medio y permite eliminar
bacterias y hongos saprófitos indeseables
a partir de muestras contaminadas. Los
antibióticos que frecuentemente son
utilizados son estreptomicina (100 ug/l),
cloranfenicol (500 mg/l) y cicloheximida
(0.5 mg/l) los cuales son agregados al
medio de cultivo ya estéril y fundido a
45-50ºC. Algunos cultivos no esporulan
ni producen pigmento en agar de
Sabouraud. Para favorecer esto, han
resultado útiles los medios especiales,
como el agar con papa y dextrosa, el agar
con papa y zanahoria, el agar con harina
de maíz, agar arroz, o agar de Sabouraud
con el agregado de tiamina e inositol.
(Murray 1995)
AGAR OGEY
El agar OGYE se usa con oxitetraciclina
en la detección y aislamiento de levaduras
y mohos de los alimentos en un entorno
de laboratorio. El agar OGYE no está
destinado a ser utilizado en el diagnóstico
de enfermedades u otras condiciones en
humanos.
Mossel, Visser y Mengerink describieron
el agar de extracto de levadura de
oxitetraciclina-glucosa (OGYE) para la
detección y enumeración de levaduras y
mohos en alimentos y otras muestras de
importancia sanitaria. Mossel y favoreciendo también la producción de
col. describió una recuperación mejorada
de levaduras y mohos en comparación
con el agar acidificado. Este medio se
complementa con oxitetraciclina como
agente selectivo, en lugar de depender del
bajo pH del agar acidificado para suprimir
el crecimiento bacteriano. El agar
acidificado se usa comúnmente para la
detección de levaduras y mohos en
alimentos y productos lácteos, y la base
de agar OGYE proporciona un medio
alternativo. (Neogen. 2019)
AGAR HARINA DE MAÍZ
El agar harina de maíz es un medio de
cultivo sólido, de bajo poder nutricional,
útil para el sub-cultivo de ciertos hongos
y para la demostración de clamidosporos
en cepas del complejo Candida albicans.
En inglés se conoce como Corn Meal
Agar.
El medio harina de maíz convencional
tiene una composición muy simple,
contiene harina de maíz, agar-agar y agua.
Por su bajo nivel nutricional es ideal para
utilizarlo en el mantenimiento de cepas
fúngicas por moderados períodos de
tiempo, en especial de hongos negros.
El agar harina de maíz puede ser
suplementado con tween 80 (polyester 80
de sorbitan monooleato o polisorbato).
Este compuesto disminuye la tensión
superficial del medio por su poder
emulsificante.
Además, crea un ambiente hostil que
inhibe la multiplicación celular exagerada
y estimula el crecimiento de hifas,
clamidosporas; estas últimas consideradas
estructuras de resistencia. Esta estructura
ayuda en la identificación de la especie
de Candida albicans.
Por su parte, la glucosa en este medio
aumenta la capacidad de formación de
pigmentos de algunos hongos. (Murray
1995)
AGAR ROSA DE BENGALA
Agar Rosa de Bengala + Cloranfenicol es
un medio neutral selectivo recomendado
para la enumeración de hongos y
levaduras en alimentos, agua y materiales
ambientales. El Agar Rosa-Bengala +
Cloranfenicol se recomienda para
alimentos frescos proteicos con flora
compuesta principalmente de bacterias
Gram-negativas en forma de vara.
También es apropiado cuando se
requieren tiempos y temperaturas de
incubación mayores, alrededor de 35 °C.
La peptona bacteriológica proporciona la
fuente de nitrógeno, vitaminas, minerales
y aminoácidos. La dextrosa es el
carbohidrato fermentable como fuente de
carbono y energía. El fosfato de potasio
es el tampón. El sulfato de magnesio
proporciona azufre y otros
oligoelementos. El rosa de bengala es un
agente selectivo que inhibe el crecimiento
de bacterias y limita el tamaño y la altura
de los hongos con crecimiento rápido, lo
que permite el desarrollo y la detección
de otras levaduras de crecimiento más
lento: los hongos aparecen de color
rosado. El cloranfenicol sirve como un
agente selectivo, inhibiendo el
crecimiento bacteriano. Es un antibiótico
recomendado para medios neutros debido
a su estabilidad térmica y amplio espectro
bacteriano. El agar bacteriológico es el
agente solidificante. (Neogen 2019)
AGAR AGUA
Medio de cultivo sin ningún suplemento
nutricional, especialmente diseñado para
observar estructuras reproductivas.
Conclusiones
 Se logró utilizar la técnica más
común de sembrado, la cual fue
punción superficial con asa
micológica
 Se pudo identificar los diferentes
agares que existen para hongos y
cuál es su importancia en la
reproducción de estos
 Se estableció la importancia de
cada agar dependiendo el
microorganismo, ya que cada
hongo crece diferente en cada
medio, escoger el agar ideal para
cada hongo es de vital importancia
para prácticas posteriores.

Bibliografía
 JIMENEZ F. (1993). Especies
interesantes. Boletín Asociación
Micológica Lactariu
 Llontop Gianina (2011) micología
general. Universidad Pedro Ruiz
Gallo. Perú
 Uribarren, B., Bazán, M. y
Castañón, O. (2016).
Generalidades de micología.
México: UNAM. Recuperado de:
http://www.facmed.unam.mx/dept
os/microbiologia/
micologia/generalidades.html
Temas de revisión
Realice un cuadro comparativo entre los medios de cultivo para el crecimiento de bacterias
y hongos
Medios para hongos
AGAR CEREBRO DE CORAZÓN Medio
altamente nutritivo para el cultivo de una
gran variedad de microorganismos
exigentes. Al añadirle antibióticos, puede
utilizarse para el aislamiento y cultivo de
hongos.
AGAR DEXTROSA SABOURAUD
Medio para el cultivo de hongos
filamentosos y levadura.
Agar de Czapek-Dox (Modificado) Medio
 Murray, P.R., E. J. Baron, M. A.
Pfaller, F. C. Tenover, and R. H.
Yolken (eds.). 1995. Manual of
clinical microbiology, 6th ed.
American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
 Neogen. Base de agar ogey. 2019.
Recuperado de:
https://foodsafety.neogen.com/en/
ogye-agar-base#
 Neogen. Rose Bengal
Chloramphenicol Agar. 2019.
Recuperado de:
https://foodsafety.neogen.com/en/
rose-bengal-chloramphenicol-agar
 Vanderzant, C., and D. F.
Splittstoesser (eds.). 1992.
Compendium of methods for the
microbiological examination of
food, 3rd ed. American Public
Health Association, Washington,
D.C
Medios para bacterias
XLD es un medio moderadamente
selectivo y de diferenciación para el
aislamiento y la diferenciación de
patógenos entéricos gram negativos
(Salmonella y Shigella) a partir de
muestras clínicas. Es adecuado en especial
para el aislamiento de la especie Shigella.
MCK es un medio de diferenciación
selectivo para el aislamiento y la
diferenciación de Enterobacteriaceae y
para el cultivo de hongos y bacterias
capaces de utilizar el nitrato de sodio como
única fuente de nitrógeno.
Agar Extracto de Malta Medio para la
detección, aislamiento y enumeración de
levaduras y mohos.
Agar Malta Medio para la detección,
aislamiento y enumeración de levaduras y
mohos.
Agar Maltosa de Sabouraud Medio para el
cultivo de hongos filamentosos y
levaduras.
Agar de Littman con Bilis de Buey Medio
selectivo, que suplementado con
estreptomicina, se emplea para el
aislamiento primario y cultivo de hongos,
especialmente dermatofitos.
Agar Papa y Dextrosa Medio para el
cultivo y enumeración de levaduras y
mohos.
Caldo Corazón Medio de propósito general
para el cultivo de una gran variedad de
microorganismos.
Caldo de Czapek-Dox (Modificado) Medio
para el cultivo de hongos y bacterias
capaces de utilizar el nitrato de sodio como
única fuente de nitrógeno.
Caldo Extracto de Malta Medio para el
cultivo de mohos y levaduras y utilizado en bacilos entéricos patógenos, en especial los
los ensayos de esterilidad.
Caldo Nutriente Medio general para el
cultivo de microorganismos poco
exigentes.
Caldo Lauril Triptosa Medio para la
detección de microorganismos coliformes
en materiales de importancia sanitaria.
Caldo Triptona Soya Medio altamente
nutritivo para el cultivo de una gran
diversos otros bacilos gram negativos a
partir de muestras clínicas.
EMB es un medio ligeramente selectivo y
de diferenciación para el aislamiento y la
diferenciación de bacilos gram negativos
entéricos (Enterobacteriaceae y diversos
otros bacilos gram negativos) a partir de
muestras clínicas.
SANGRE es un medio de cultivo sólido
enriquecido, diferencial pero no selectivo.
Es utilizado para la recuperación y
crecimiento de una gran variedad de
microorganismos provenientes de muestras
clínicas o para subcultivos.
MOSSEL Medio diagnóstico utilizado para
el aislamiento y recuento de Bacillus
cereus en alimentos.
NUTRITIVO Medio de cultivo utilizado
para propósitos generales, para el aisla-
miento y recuento de microorganismos con
escasos requerimien- tos nutricionales. Su
uso está descripto en procedimientos para
el análisis de ali- mentos, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.
NFB, Es un medio selectivo para bacterias
fijadoras de nitrógeno en suelo.
SS es un medio selectivo y de
diferenciación para el aislamiento de
pertenecientes al géneroSalmonella, a
partir de muestras clínicas.
HE es un medio moderadamente selectivo
y de diferenciación para el aislamiento y el
cultivo de microorganismos gram
negativos entéricos, y especialmente para
el aislamiento de especies de Shigella y
Salmonella a partir de muestras fecales.
PK
se recomienda para la detección de
variedad de microorganismos exigentes. Se
recomienda para los ensayos de esterilidad
y para uso general de laboratorio.
Medio Líquido de Sabouraud Medio
empleado para el aislamiento y cultivo de
levaduras y mohos.
m-Medio de Sabouraud Medio para la
detección y aislamiento de hongos en
muestras, mediante la técnica de filtración
por membrana.
microorganismos del suelo solubilizadores
de fosfato.
CHOCOLATE es un medio de cultivo
sólido, enriquecido, no selectivo y no
diferencial. Es utilizado principalmente
para el aislamiento de microorganismos
exigentes desde el punto de vista
nutricional, aunque en él pueden crecer
cualquier tipo de bacterias.
TSI cuando se utiliza como medio en
placa, se emplea para la diferenciación de
Enterobacteriaceae, en especial Salmonella
de otras bacterias entéricas.
ADN se utiliza para diferenciar los
microorganismos basados en la actividad
de desoxirribonucleasa (DNasa).
CETRIMIDE se utiliza para el aislamiento
selectivo de Pseudomonas aeruginosa a
partir de muestras clínicas.
ALMIDON medio de agar-almidón es
utilizado en la selección de
microorganismos productores de amilasas
y también en los cultivos de hongos.
MRS es un medio de cultivo sólido
selectivo, utilizado para el aislamiento y
recuento de bacterias ácido lácticas,
especialmente del género Lactobacillus.
Este agar fue creado en 1960 por Man,
Rogosa y Sharpe, llevando el medio el
mismo nombre, pero por su complejidad a
menudo se utiliza la abreviación M.R.S.
MANITOL se utiliza para el aislamiento
selectivo de estafilococos y para la
detección de Staphylococcus aureus a
partir de muestras clínicas.
LBS es un medio semi-definido
parcialmente selectivo para el aislamiento
y recuento de lactobacilos a partir de
alimentos y flora intestinal, vaginal y
 dental.

MH disponible en varios formatos de

placa, se utiliza en el procedimiento de
difusión en disco estandarizado para la
determinación de la sensibilidad de cepas
aisladas a partir de muestras clínicas de
organismos aerobios de rápido crecimiento
ante agentes antimicrobianos, conforme a
las normas de Clinical and Laboratory
Standards Institute (CLSI) y European
Committee on Antimicrobial Susceptibility
Testing (EUCAST; Comité Europeo de
Antibiogramas) .

Realice una consulta referente al uso de antibióticos que tengan efectos selectivos en el
aislamiento de hongos.
cicloheiximina inhibe el crecimiento de hongos saprofitos
hay un medio llamado agar micobiótico. El agar micobiótico es un excelente medio básico
y se agregan agentes antifúngicos, cicloheximida y cloranfenicol para estudiar su efecto
sobre los hongos. Este medio se ha demostrado útil en el aislamiento de dermatofitos y
otros hongos a partir de muestras.
Se recomienda el uso del agar micobiótico exclusivamente para aislar los dermatofitos (los
dermatofitos no son sensibles a la cicloheximida o cloranfenicol) y en paralelo a los medios
sin antibióticos para aislar hongos que causan enfermedades sistémicas.

Anexos
Ilustración 6 Alternaria spp a 40x se observan cadenas de conidios de color marrón pálido y en forma de frasco. Tienen
tabiques transversos y longitudinales