MICOLOGIA

LIC. EN BIOLOGIA

TERCER SEMESTRE

PRACTICA # 1 PREPARACION Y MANEJO DE MEDIOS DE

CULTIVO

PROFA. BIOL. ANAEL GUADALUPE RUIZ GUZMAN

Biol. Anael Gpe. Ruiz Guzmn Los Mochis, Sinaloa Septiembre 2015.
INTRODUCCION

Los medios de cultivo son mezclas de sustancias que se usan para el

aislamiento y desarrollo de hongos, bacterias y otros microorganismos. Cabe
sealar que la mayora de los hongos fitopatgenos se pueden cultivar de
manera relativamente sencilla en medios adecuados. Sin embargo existen
grupos de patgenos denominados parsitos obligados cuyo cultivo an no se a
logrado a menos que se inoculen en plantas vivas.

Los medios de cultivo requieren de ciertas caractersticas mnimas para

lograr exitosamente el desarrollo de los hongos y entre los ms importantes se
encuentran:

1. El medio deber contener elementos nutritivos tales como: fuentes de

carbono, nitrgeno, fsforo, potasio, magnesio, cobre y molibdeno.
Tambin pueden ser necesarias algunas vitaminas y otras sustancias que
se hallan presentes en los materiales naturales o artificiales que
componen los medios.
2. El medio no deber deshidratarse fcilmente, por que se evita
manejndolo en recipientes adecuados que adems permitan su manejo
en condiciones estriles es decir, evitando contaminaciones. El oxigeno
es necesario en todos los casos por lo que deber permitirse la aireacin.
Ya sea en las cajas de Petri o en tubos de cultivo.
3. La mayora de los medios de cultivo para hongos requieren esterilizacin
antes de usarse, lo que generalmente se logra mediante calor hmedo
usando autoclave u olla express.
4. La mayora de los hongos crecen bien a temperatura de 20 a 32 oC, pero
existe mucha variacin entre grupos o especies. La temperatura ptima
para el desarrollo de la enfermedad que causen puede servir como punto
de referencia para la temperatura de incubacin del hongo en el medio de
cultivo.
5. La mayora de los hongos crecen bien a Ph de 5 a 6, pero hay
excepciones. La temperatura y/o Ph ptimo para la esporulacin puede
ser distinto que para el crecimiento del micelio. En ocasiones es
conveniente agregar pequeas cantidades de cido lctico para eliminar
bacterias contaminantes en el medio, pues estas generalmente no toleran
la acidez, permitiendo el crecimiento fungoso.

Biol. Anael Gpe. Ruiz Guzmn Los Mochis, Sinaloa Septiembre 2015.
6. El crecimiento del micelio y sobre todo la esporulacin de los hongos en
el medio, esta muy influido por la luz. Muchos hongos esporulan
fcilmente sin necesidad de luz artificial o aun en plena oscuridad, pero
otros requieren condiciones especiales de calidad y confiabilidad de luz.
Este factor puede ser clave cuando se requieren altas cantidades de
esporas con fines de investigacin o para identificar alguna especie en
particular.

El medio de cultivo sustituye parcialmente las propiedades

nutricionales del hospedante o sustrato natural del hongo por cultivar. La
utilidad del medio es proporcionar energa al microorganismo, para que
desarrolle en la forma ms normal posible.

Por su composicin nutritiva los medios de cultivo pueden ser:

1. Medios naturales. Estn compuestos por materiales enteramente

naturales, tales como partes de plantas, malta, levadura etc se requieren
en forma de extractos o decocciones o simplemente esterilizando las
partes vegetales con calor u otro mtodo. Aunque se usan poco, pueden
ser superiores a otros medios sobre todo en el caso de hongos de difcil
esporulacin. Por ejemplo se pueden conseguir altas cantidades de
esporas de Stemphylium, sembrando a este hongo en tallos de cartamo
esterilizados en autoclave.
2. Medios semisintticos. Estn compuestos parcialmente por materiales
naturales y sintticos, el ejemplo mas comn es el de papa dextrosa y
agar, V8 agar, harina de maz, agar etc son los ms usados.
3. Medios sintticos. Se conoce perfectamente su composicin, ejemplo
medio de Komada o de Awuah y Lorbeer, para Fusarium oxisporum, por
su consistencia los medios de cultivo pueden ser:
a) Slidos. Contienen agentes solidificantes principalmente el agar,
proporcin de 1 a 3%, el agar esta compuesto por una mezcla de
carbohidratos complejos y se obtiene a partir de algas.
b) Semislidos. Aunque generalmente se usan poco en micologa, estos se
obtienen bajando la concentracin del agar o usando gelatina como
agente solidificante.
c) Lquidos. Se preparan sin agente solidificante. Se usan principalmente
para obtener altas concentraciones de esporas, ejemplo: papa- dextrosa.

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 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

La preparacin de medios de cultivo presenta distinto grado de

complejidad, pero en general se tarda una o dos horas para la elaboracin de las
ms comunes. A continuacin se describe la forma de preparar el medio papa
dextrosa agar, jugo V8 agar, agua agar, por ser los ms comunes n la mayora
de los laboratorios de fitopatologa en el mundo.

OBJETIVOS

Aprender a elaborar los medios de cultivo ms comunes

usados en el aislamiento de hongos fitopatgenos.

a) Elaboracin de papa dextrosa agar (PDA).

Crecen la mayora de hongos y bacterias.

Papa partida 200 gr
Dextrosa (glucosa) 13 gr
Agar 18-16 gr
Agua destilada 1000 ml

1. Hierva las papas partidas en 500 ml de agua.

2. En otro recipiente disuelva el agar, calentando para ayudar a
disolver.
3. Cuele el caldo de papa a travs de la manta de cielo o algodn.
Mezcle ambos lquidos, agregue la dextrosa y homogenice.
4. Divida el lquido en recipientes adecuados (matraces o tubos).
Tapar los matraces con tapn de algodn. En caso de requerir el
medio en tubos de cultivo, se vaca a estos cuidadosamente,
procurando no derramar medio en la boca de los tubos. Los tubos
tambin se tapan con algodn (al igual que los matraces); en caso
de ser tubos con tapa de rosca, esta deber quedar ligeramente floja
durante la esterilizacin.
5. Esterilizar matraces y/o tubos en el autoclave u olla de presin de
15-20 libras/pulgada2 ( 120 oC durante 15-20 minutos) contados
a partir del momento en que se alcance la presin ya mencionada.
6. Abra la olla o autoclave hasta que la presin baje a cero. Deje
enfriar el medio al contacto con el aire, cuando este se encuentre
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 tibio se vaca a cajas de Petri en condiciones aspticas, es decir en
la cmara de transferencia o al manos desinfectando una mesa y
auxilindose de mecheros de gas. Las corrientes de aire debern
evitarse al mximo. Los tubos de ensayo se colocan en posicin
inclinada hasta que el medio solidifique, apretando los tapones de
rosca o algodn, segn se trate.
7. En ocasiones se agregan 2 o 3 gotas de cido lctico (antes de
vaciar) para prevenir el desarrollo de bacterias. en otros casos se
agregan pequeas cantidades (50-200 ppm) de antibiticos tales
como la estreptomicina, penicilina, etc., tambin antes de vaciar,
el cloranfenicol tolera la esterilizacin en las condiciones antes
sealadas. A ciertos medios selectivos tambin se le pueden
incorporar PCNB, Benomyl u otros fungicidas pero en dosis bajas
(mg/lt).

b). Elaboracin de V8-agar.

Para Phycomycetes y otros

Jugo V8 200 ml
Carbonato de calcio 3 gr
Agar 16-18 gr
Agua destilada 800 ml

Agregue 200 ml de jugo V8 a 800 ml de agua tibia, agregue el

carbonato de calcio y el agar agitando la mezcla, caliente en bao
Maria hasta disolver el agar. Una vez que el agar este disuelto, lleve
el volumen a 1000 ml con agua destilada. Vace el medio en
recipientes adecuados y esterilice en el autoclave a 15 libras de
presin durante 20 minutos.

c). Elaboracin de agua-agar.

Phycomycetes y otros. No crecen bacterias.

Agar 16 gr
Agua destilada hasta completar 1000 ml

Disuelva el agar en 800 ml de agua utilizando un bao Maria, una vez

disuelto, lleve el volumen con agua a 1000 ml, vace el medio en
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 recipientes apropiados y esterilice en el autoclave a 15 libras de
presin.

RESULTADOS

Sern los medios en si, elaborados correctamente.

DISCUSION

Complemente la informacin de la introduccin, discuta las

dificultades, ventajas y desventajas de cada medio. Indique como cultivar royas
y cenicillas.

BIBLIOGRAFIA

Agrios, G.N. 2007. Fitopatologa. LIMUSA, Mxico. 285-288 p.

Lpez, A.G. 1979. Manejo de Hongos Fitopatgenos. Universidad Autnoma

de Chapingo, Mxico.

Biol. Anael Gpe. Ruiz Guzmn Los Mochis, Sinaloa Septiembre 2015.