2017

AISLAMIENTO E

IDENTIFICACIN

DE HONGOS
 MICROBIOLOGA AMBIENTAL

UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION

INGENIERA AGRARIA, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Y

AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL.

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TEMA: PRACTICA DE LABORATORIO N3

DOCENTE: HUAYNA DUEAS LUIS ALBERTO

ALUMNOS: PACHECO SANTILLAN DERIAN ANDR

PASTOR HUAMN CINTHYA

ROSALES BAUTISTA ROBINSON

TRUJILLO ROSALES EVELIN THALIA

ZAMUDIO CHAVEZ JUAN LUPESCO

CICLO: VI

HUACHO PER

2016

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 MICROBIOLOGA AMBIENTAL

1 OBJETIVOS

Se pretende conseguir que los alumnos conozcan:

Las buenas prcticas de trabajo en el laboratorio de Microbiologa.

Identificar los distintos tipos de hongos que se pueden encontrar en muestras
biolgicas y ambientales
Aislas y sembras estos hongos en placa Petri utilizando correctamente sus
respectivos agares, en distintos mtodos de aislamientos
Conocer las caractersticas macro morfolgicas de colonias fngicas de
distintos tipos de hongos ya sea en : color, superficie, borde, consistencia,
aspecto y desarrollo
Atender las explicaciones y sugerencias de nuestro docente antes de realizar
las practicas de laboratorio de microbiologa en el aisalmiento de hongos

2 FUNDAMENTOS

En el examen de las colonias y en las observaciones microscpicas, se utilizan una serie

de trminos que son tiles para describir las observaciones y que conviene recordar.

La unidad fundamental microscpica de un hongo es la hifa. La combinacin de

hifas da lugar al crecimiento en masa del conocido micelio.

Las hifas divididas en clulas individuales por paredes transversales son

denominadas septadas y las que no se subdividen aseptadas.

La porcin del micelio que se extiende hacia el sustrato del medio de cultivo se

denomina micelio vegetativo.

La porcin que se proyecta hacia el exterior se denomina micelio areo o micelio

reproductor.

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La identificacin de los hongos est primariamente basada en las diferencias

morfolgicas de las estructuras reproductivas y la forma en que las esporas o

conidios se producen en clulas

MORFOLOGA AL MICROSCOPIO DE DIFERENTES HONGOS

Rhizopus oryzae: Las especies del gnero Rhizopus son comunes en muchos tipos de

materiales y son frecuentes contaminantes en el laboratorio. Crecen muy bien en la mayora de

los medios de cultivo para hongos, especialmente en agar-patata a 24C. Presentan colonias

algodonosas que se extienden por toda la placa. Las esporas se encuentran en esporangios

globosos y grandes en forma de embudo. Esta especie fue utilizada en la segunda guerra

mundial por los prisioneros britnicos en Java para fermentar la soja y hacerla mas digerible.

De esta forma se complementaba la escasa dieta de la que disponan.

Cladosporium cladosporioides: las especies del gnero Clasdosporium son tambin

bastante comunes. La mayora son patgenos de plantas, aunque algunas son saprofitos y

originan problemas de putrefaccin. C. cladosporioides presenta conidios no esfricos septados

y ramificados. Es un hongo saprofito que se ha aislado del aire, suelo, textiles y pintura. Crece

bien en agar-patata a 24C. Se utiliza en la industria como microorganismo de referencia para

los ensayos de resistencia de diferentes materiales a los hongos.

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Penicillium chrysogenum: las especies del gnero Penicillium estn muy extendidas

y con frecuencia son agentes de destruccin. Algunas especies se utilizan en fermentaciones a

nivel industrial para la obtencin de diferentes compuestos como el cido ctrico, cido

glucnico, penicilina, etc. En general los miembros de este gnero presentan micelio vegetativo

septado, sin color o coloreado. Este micelio aparece en parte sumergido y en parte areo. Las

diferentes partes en que se divide el micelio reproductor aparecen en la figura. P. chrysogenum

presenta colonias azul-verdosas muy Conidios Filidas Mtula Rama Tallo 10 extendidas, con

el reverso amarillento. Esta especie produce penicilina, glucosa oxidasa, etc. Crece en agar-

extracto de malta a 24C.

Aspergillus flavus : las especies de este gnero crecen en casi todos los sustratos.

Tienen especial importancia en el deterioro de alimentos. Producen toxinas peligrosas para el

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hombre y los animales. No todas las especies son perjudiciales, algunas se utilizan en la

industria por sus capacidades fermentativas. As se utilizan en la produccin de sake, cido

oxlico, cido ctrico, glucnico, etc. Los conidiforos emergen de forma perpendicular desde

unas clulas especializadas con paredes engrosadas, denomonadas pie [(e) en la figura]. La

presencia de clulas pie, los diferencia del gnero Penicillium. Los conidiforos terminan en

una forma globosa denominada vescula (flecha en la figura). Estas vesculas soportan las

filidas y las mtulas. A. flavus presenta conidiforos largos y tienden a redondearse para dar

una vescula globosa. Las filidas ocupan la circunferencia completa. Las filidas son

uniseriadas o biseariadas. Los conidios son amarillo-verdosos. Crece bien en agar-patata y en

agar-extracto de malta a 24C.

3 MATERIALES Y MUESTRAS

placa Petri
mechero
vaso precipitado
autoclave
encendedor
alcohol al 96%
agua destilada
Agar sabouraund
Asas de siembra

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Levadura de panificacin
Azcar
Frutas con hongos
Pan con hongos
Hojas con hongos
Uas humanas con hongos

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4 PROCEDIMIENTO

Preparacin de levadura

1. En un vaso precipitado colocar 10ml de agua destilada

2. Agregar dos cucharadas de azcar y diluirla.

3. Agregar dos cucharadas de levadura de panificacin (granulada)

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4. Taparla con un pedazo de papel y dejar reposar por media hora

SIEMBRA MUESTRA DE PAN CON HONGOS

1.- Primero esterilizar las asas de siembra

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2. raspar la zona con hongos y tomar una pequea muestra

3. llevar la muestra tomada a las placas Petri ya preparadas con el agar para la
siembra colocar la muestra al centro con mucho cuidado

5. Sellarla y llevarala a la estufa para la incubacin a 22c -25c por 3 a 5 dias

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6. Pasado el periodo se observa la muestra

7. Observacin microscpica

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SIEMBRA DE MUESTRA DE LEVADURA

1.- Esterilizar la asa de siembra

2.-Introducir el asa de siembra en la levadura previamente preparada

3.- llevar la muestra a la placa Petri para la siembra, la placa Petri ya se encuentra con

el agar

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4.- sellarla y llevarla a incubar a una temperatura de 22c-25c por 3 a 5 dias

5.- Pasado el periodo se muestra la muestra

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6.- Muestra observada al microscopio

5 RESULTADOS

Despus del tiempo necesario que se encuentra en la estufa se observa lo siguiente:

Dentro de la observacin morfolgica al microscopio se distinguieron algunas caractersticas

de la estructuras microscpicas del micelio aislado, como las dimensiones de hifas estructuras

caractersticas como frecuencia de septos, clamp y anastomosis principalmente

6 RECOMENDACIONES

Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.

El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar cada
prctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo, Los desinfectantes ms
habituales para esto son el alcohol (etanol 96).
Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama, Se deben
evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que pueden crear
corrientes que originen contaminaciones o producir accidentes.
Durante las prcticas est prohibido comer, beber. Cuando se manipulan
microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc.
Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la realizacin
de la prctica deben estar apartados del lugar de trabajo.

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Para deshacerse del material contaminado se utilizarn los recipientes adecuados,

que sern esterilizados posteriormente, Nunca se debe tirar nada contaminado por
la fregadera o a la basura comn.
Bajo ningn concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del laboratorio.
No se debe pipetear nunca con la boca, Utilizar siempre pipeteadores manuales.
En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de microorganismos,
etc.) se comunicar inmediatamente.

7 CONCLUSIONES

Personalmente se concluye que los hongos al igual que las bacterias son seres vivos

microscpicos ya que a estos tambin se le realizan los mtodos de morfologa y

todo lo que esto conlleva de igual manera la tincin claramente otro tipo de tincin

que de las bacterias puesto que su estructura no es la misma

Se pudo observar como es que se clasifican en la morfologa, tambin que tipo de

hongo era en el que se presenatba en los alimentos y la levadura

Se aprendio a realizar las tinciones en hongos y a que en ninguna de las practicas

anteriores debemos de ser mas cuidadosos de lo comn ya que aunque trabajamos

con hongos de comidas y no son tan peligrosos podramos ser alrgicos a ellos

8 CUESTIONARIO

1.- DIBUJAR LA ESTRUCTURA DE 4 HONGOS DIFERENTES?

. Somticas Micelio es el conjunto de filamentos y un trozo del mismo se denomina

hifa. Las hifas pueden presentar septos y entonces el micelio est tabicado. Septos primarios

son los formados cuando hay divisin nuclear y adventicios los otros. Si los tabiques estn

ausentes se habla de micelio continuo. Los mohos son micromicetos filamentosos. Cuando el

hongo es una clula aislada se dice unicelular o levadura . Los cortos filamentos compuestos

por las clulas que brotan de una levadura constituyen el pseudomicelio. Plectnquima es un

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conjunto de hifas entrelazadas que se asemejan a un tejido. Se dice prosnquima si las hifas

pueden ser reconocidas y pseudoparnquima cuando han perdido su individualidad. Esclerocio

es un plectnquima generalmente macroscpico que puede permanecer en vida latente.

Rizomorfa es un cordn grueso donde el conjunto de las hifas fusionadas ha tomado el aspecto

de raz. Rizoides son las hifas de succin, como raicillas, que penetran en el substrato.

Haustorio es la hifa de succin del hongo parsito dentro de la clula del hospedador.

Apresorios son unas hifas achatadas que se adhieren al substrato o al hospedador como sostn,

especialmente en el comienzo de la infeccin.

Reproductoras Anamorfo es el hongo con multiplicacin asexuada y teleomorfo es el mismo

con reproduccin sexuada. Se les asigna distinto gnero y especie. Holomorfo indica el ciclo
de vida total. Esporas son los elementos de perpetuacin de la especie. De acuerdo a la
morfologa reciben distinto nombre: alantospora con forma de banana, aleuriospora con base
plana, dictiospora con septos longitudinales y transversales, didimospora con un tabique,
equinulada como un erizo, escolescospora como un gusano, estaurospora como una estrella,
feospora de color obscuro, fragmospora con tabiques transversales, fusiforme como un huso,
helicospora como una espiral, hialospora de color claro y translcido, planospora mvil,
verrucosa con verrugas, zoospora con flagelos. Las balistosporas son proyectados
violentamente una vez maduras. Las hipnosporas son aqullas capaces de permanecer con vida
latente por largo tiempo. Las esporas pueden ser de origen asexuado (mitosporas) o sexuado

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(meiosporas), y por su ubicacin relativa internas o externas. Las mitosporas se originan en las
estructuras anamrficas y las meiosporas en las teleomrficas.

Anamrficas Artrosporas o artroconidios son esporas desarrolladas en una hifa terminal que
al madurar se separan. En algunos hongos se forman artrosporas separadas por una zona libre
de citoplasma (disyuntor) cuya pared se rompe liberando las entosporas o clamido-artrosporas.
Clamidospora o clamidoconidio es una hipnospora o clula de resistencia, terminal o interh
ifal, con pared gruesa y substancias de reserva. Blastosporas o blastoconidios son las esporas
que se originan de una parte de una clula somtica, una hifa, un conidiforo u otra espora, y
se desarrollan antes de la formacin del septo que lo separa de la clula de origen. Conidios o
conidiosporas son las esporas asexuadas externas. Si estn implantadas directamente sobre la
hifa se llaman ssiles. La parte del micelio que origina y sostiene a las esporas se denomina
esporforo y si se trata de conidios se dice conidiforo. Filide es la clula conidigena que
desde un extremo origina por brotacin y sin aumentar su longitud, los fialoconidios o
fialosporas. La pared de la filide suele extenderse en el pice formando un collarn. Anlide
es una clula conidigena con el pice ancho y cicatrices en anillo, que se alarga con la
formacin de cada espora. Los conidiforos pueden ser simples o ramificados y a veces estn
agrupados en un conidioma. En Penicillium cada nivel de ramificaciones recibe distinto
nombre, se llama mtulas a las que sostienen a las filides productoras de esporas. En
Aspergillus las filides o las mtulas estn implantadas sobre una vescula o dilatacin del
esporforo. Los conidios nacen de los conidiforos aisladamente o quedan reunidos, ya sea en
una cabezuela mucosa o en cadenas. stas se forman por sucesin baspeta cuando todos las
esporas surgen de la clula conidigena o basfuga si es por brotacin de la espora anterior. A
veces despus que se forma un conidio, el conidiforo se alarga lateralmente y origina el
segundo conidio. El proceso contina y las esporas quedan en zig-zag (proliferacin
simpodial). En algunos hongos surgen, simultneamente o no, varios conidios en diferentes

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puntos de la misma clula conidigena (brotacin mltiple). Los conidiforos suelen estar
reunidos en un haz llamado coremio o sobre un conjunto de hifas entrelazadas constituyendo
un conidioma, ya sea un esporodoquio (almohadilla de filides con las esporas expuestas) o
una acrvula (estructura chata y cubierta al principio por el tejido del hospedador donde los
esporforos estn en empalizada). Funculo es una cuerda de hifas de las cuales surgen, a
intervalos, los conidiforos. Picnidio es un conidioma globoso o en forma de pera, cuya pared
plectenquimatosa est recubierta internamente por las clulas conidigenas y est abierto por
un ostolo. Las esporas originadas se llaman picnidiosporas. Tambin la cavidad picnidial
puede estar encerrada en una estructura somtica compacta denominada estroma. Esporangio
es una estructura globosa con una membrana peridial simple, generalmente en el extremo de
un esporangiforo, que contiene innumerables esporangiosporas. El pice dilatado del
esporangiforo se llama columela. Cuando el esporangio tiene pocas esporas se denomina
esporangiolo. Los merosporangios son cilndricos, contienen pocas esporas y estn reunidos
sobre la columela o los extremos de las ramas del esporangiforo; si son monosporados suelen
ser considerados como conidios. Los zoosporangios de los hongos acuticos o parsitos
contienen zoosporas mviles. Conidiosporangio es el zoosporangio inmaduro liberado por
algunos hongos.

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Teleomrficas Gametas son las clulas diferenciadas que se fusionan y gametangios las
estructuras que las producen. Homotlicos son los hongos que forman los gametangios de
distinta polaridad en el mismo micelio. Cuando cada micelio da slo gametangios de la misma
polaridad, es necesario enfrentar dos micelios distintos del mismo hongo heterotlico para
originar las esporas sexuadas. En muchos macromicetos se produce la somatogamia o fusin
de clulas no diferenciadas que originan un micelio dicaritico, a veces con una conexin hifal
a manera de puente (fbula) entre cada clula. Las oosporas son hipnosporas sexuadas
originadas por heterogamia. La estructura femenina u oogonio produce unos elementos grandes
inmviles u oosferas que en algunos hongos se fusionan con los anterozoides (zoosporas)
producidos en la estructura masculina o anteridio, y en otros se ponen en contacto con el
anteridio por medio de los tubos de fertilizacin. Las zigosporas son hipnosporas sexuados
formados por isogamia. La hifa emite un mameln en el que se diferencian dos partes:
suspensor y gametangio. Los gametangios se fusionan originando la zigospora que suele estar
rodeada por hifas protectoras nacidas de los suspensores. Ascosporas son las esporas sexuadas
internas que se originan en un nmero limitado (generalmente 4 u 8) dentro de una clula
llamada asco. En las levaduras se fusionan los citoplasmas de dos clulas de polaridad distinta
e inmediatamente o mucho despus de la cariogamia ocurre la meiosis formndose las
ascosporas dentro del asco libre. En los hongos filamentosos se producen gametangios
(anteridio y ascogonio), en general morfolgicamente distintos, y los ncleos pasan a travs
del poro formado en el punto de contacto o de un tubo receptivo llamado tricogino. En algunas
especies heterotlicas los espermacios, microconidios incapaces de germinar, cumplen la
funcin de gametas masculinas. Despus de la fecundacin nacen hifas ascgenas binucleadas
cuyas clulas terminales, en forma de cayado, se convierten en ascos. Las hifas somticas
vecinas a los elementos sexuales suelen formar un plectnquima originando un ascoma que si
est cerrado y es esfrico se llama cleistotecio. Cuando tiene las hifas frtiles (himenio)
estratificadas y generalmente una forma de pera, poseyendo en la madurez un poro u ostolo
por donde salen las ascosporas, se denomina peritecio. Si el plectnquima tiene forma de copa
con el himenio expuesto se habla de apotecio. El ascostroma es una estructura con cavidades o
lculos que contienen ascos. Los ascos tienen distinta forma segn las especies, pueden ser
ssiles o pedicelados, estar organizados en un fascculo comn o nacer independientemente.
Con frecuencia hay entre los ascos hifas estriles alargadas llamadas parafises. En el ostolo

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suele haber hifas cortas como pelos, las perifises. Algunos ascomas tienen hifas ornamentales.
La liberacin de los ascos puede ser explosiva o no. En algunos ascos se abre un oprculo en
el momento de liberar las esporas. Los ascos bitunicados tienen dos paredes y la externa se
rompe, dejando expandirse la interna, antes de la descarga de las ascosporas. Basidiosporas son
las esporas sexuadas externas que se originan en el basidio. Este es una clula hifal binucleada
que sufre cambios morfolgicos y se llama probasidio al estado o parte de la misma donde se
produce la cariogamia. Se denomina metabasidio a la parte o estado en el cual ocurre la meiosis
y forma 4 (a veces 2) tubos pequeos o esterigmas en cada uno de los cuales se forma una
basidiospora. Hay dos tipos de metabasidios. El holobasidio es cilndrico o con aspecto de
clava y en algunos hongos tiene forma de tenedor. Los fragmobasidios estn divididos
generalmente en 4 clulas por septos transversales o longitudinales. En muchos hongos las
hifas se agregan para formar un basidioma macroscpico y en aqullos con el himenio
expuesto, las basidiosporas estn sobre unas laminillas radiales o tubos o espinas ubicados
generalmente en el envs. Algunos basidiomas son como una sombrilla extendida (pleo)
sostenida por un pie que a veces tiene un anillo o resto de una membrana que una al pleo con
el pie. Otras veces hay en la base una volva o resto de un velo que envolva a todo el basidioma
joven. Hay hongos cuyos basidiomas se asemejan a un abanico, en otros son cilndricos,
esfricos o coralinos. En el basidioma cerrado el peridio envuelve a la gleba frtil y se rompe
cuando las esporas estn maduras. En las royas y carbones el probasidio es una espora de pared
muy gruesa llamada teliospora o teleutospora, que germina formando un tubo o metabasidio
que dar origen a las basidiosporas. En el micelio uninucleado de algunas royas se forma el
espermogonio o picnio que da gametas llamadas espermacios o picnosporas y lleva las hifas
receptivas en la parte exterior, pero no hay autogamia. Las clulas binucleadas formadas como
resultado de la espermatizacin constituyen el estrato basal del ecidio y comienzan a dividirse
produciendo cadenas de ecidiosporas. Por germinacin de una ecidiospora surge un micelio
binucleado que origina el uredosoro con las uredosporas generalmente de largos pedicelos.
stos al germinar dan otra vez un micelio dicaritico que puede formar nuevas uredosporas o
bien teleutosporas con clulas binucleadas y paredes gruesas en el teliosoro o teleutosoro. En
los carbones el micelio binucleado se forma por fusin de dos clulas compatibles de diverso
tipo y constituye un soro de teleutosporas o ustilosporas. Cada una de stas al germinar se
convierte en un metabasidio sin esterigmas que origina las basidiosporas o esporidios por
brotacin.

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2.-DESCRIBIR OTRA TECNICA DE AISLAMIENTO DE HONGOS?

Aislamiento a partir de trozos de tejido vegetal

Trozos de tejido afectado de la zona de avance son sembrados en medio de cultivo (ej.
Madera)
Aislamiento de bacteria a partir del tejido infectado

Tocando con el ansa en la zona de avance de la infeccin es posible aislar la bacteria.

Aislamiento de bacterias por macerado del tejido vegetal

El tejido afectado es macerado en mortero y luego el macerado es estriado en placa.

Aislamiento directo a partir del signo.

Cuando la muestra vegetal presenta signo es posible tomar una pequea porcin del
mismo y sembrar en una placa con medio de cultivo.
Aislamiento a partir del exudado bacteriano

Un trozo de tallo de una planta afectada vascularmente es colocado en agua en

recipiente con agua o saline esteril.

3.-.MENCIONE LA IMPORTANCIA DE LOS HONGOS EN

MICROBIOLOGA AMBIENTAL

Se utilizan en la elaboracin de productos alimenticios como el pan, vino, cerveza y

queso.

Son una valiosa fuente de alimentacin para el ser humano como los championes, las setas ,

las trufas.

Algunas especies se utilizan en la industria para producir cidos orgnicos, como el ctrico,

lctico o glico.

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Algunos son patgenos, para plantas, animales, y hombre (pie de atleta, tia y candidiasis)

4.- ESCRIBIR ALGUNOS METODOS DE AISLAMIENTO

Mtodos de aislamiento

Tcnica de dilucin en placa

Esta tcnica se utiliz para cuantificar los microorganismos en placa de cultivo

realizando diluciones del suelo. Por consiguiente, se obtuvo un estimado de la poblacin viable

cultivable en los medios de cultivo.

Procedimiento: se hicieron diluciones seriadas en base de las muestras en agua

peptonada 0,1% desde la dilucin 101-105 , las cuales e agitaron por cinco minutos, para

luego realizar siembras masivas en superficie (0,1 mL) en los medios de cultivo. Se sembraron

las diluciones 103-105, por duplicado posteriormente se llevaron a incubar de 3 a 6 das a

25 C para observar crecimiento de colonias de hongos, a partir de las cuales por subcultivos se

obtuvieron cultivos axenicos de acuerdo a las diferentes caractersticas macroscpicas

(Valencia, 1979).

Tcnica de lavado de suelo

En esta tcnica se utiliz el aparato lavador modificado que permiti aislar hongos

filamentosos en estado activo, cuyas hifas permanecieron adheridas a las partculas o al

sustrato.

Procedimiento: se tomaron 20 g de suelo previamente cernido por tamiz de 2mm y se

colocaron en el aparato lavador. Las partculas del suelo se tomaron del segundo embudo y se

secaron sobre papel de filtro en una caja de Petri, para luego transferir 5 partculas sobre placas

con agar PDA por duplicado. Posteriormente se llevaron las placas a incubacin de 3 a 6 das

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a 25 C para observar crecimiento de colonias de hongos, a partir de las cuales se obtuvieron

cultivos axenicos realizando subcultivos de acuerdo a las diferentes caractersticas

macroscpicas.

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