Informe Final

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA, LEÓN
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE FARMACIA
Evaluación de la calidad microbiología de los productos semisólidos

analgésicos de origen natural comercializados por vendedores
ambulantes, en el mercado La Terminal de la ciudad de León, Junio 2020.
PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN
Autores:
Br. Julio César Hernández Vanegas
Br. Manuela de Jesús Jerez Calero
Br. Jennifer Adilia Jiménez Ortega
Tutora: MSc. Gloria Maria Herrera
León, junio del 2020
´´A la libertad por la universidad´´

AGRADECIMIENTO
A Dios nuestro señor por su bondad y misericordia, por regalarme vida, sabiduría
y paciencia para llegar a esta etapa de mi vida.
A mis padres Julio Hernández y Idalia Vanegas por acompañarme en este

momento importante de mi vida en el cual me han ido formando e inculcando
valores que me han llevado a muchos éxitos como este.
A mi hermano Emilio Hernández por brindarme consejos necesarios en mi vida,

para mi formación como profesional y persona.
A una persona especial que Dios puso en mi camino mi novia Dulze Zapata, por
brindarme fortalezas, darme animo cuando más lo he necesitado y por su amor
incondicional.
A mi tutora MSc. Gloria Herrera por su acompañamiento y conocimiento

brindados en todo este trayecto de la culminación de mi carrera profesional.
A los docentes que nos han brindado el conocimiento para lograr la culminación
de esta etapa, por su apoyo incondicional y paciencia en cada momento, en
especial a Don David Espinoza por su apoyo en la realización de este estudio.

DEDICATORIA
Primeramente, a Dios nuestro señor por permitirme llegar hasta este momento y
haberme dado mucha salud, ser el manantial de vida y darnos todo lo necesario
para seguir adelante día a día para lograr nuestros objetivos, además de su
infinita bondad, sabiduría y amor.
A mis padres y hermano quienes han sido la guía y el camino para poder llegar
a este punto de la carrera, que con su ejemplo y dedicación y palabra de alientos
nunca bajaron los brazos para que tampoco lo hiciera.
A mi tutora ha desempeñado un gran apoyo, motivación y dedicación para la

culminación de nuestro trabajo; por habernos transmitido los conocimientos
obtenidos y habernos llevado paso a paso en el aprendizaje.
A mi novia por ser mí ayuda idónea en la realización de este trabajo y por su

amor incondicional.

AGRADECIMIENTO
Primeramente, doy gracias a Dios por bendecirme para llegar hasta donde he
llegado, porque hiciste realidad este sueño anhelado.
Quiero agradecer a mis padres Santiago Jerez y Lucia Calero
A mi tutora, Msc. Gloria María Herrera por su esfuerzo y dedicación, quien, con
sus conocimientos, su experiencia, su paciencia y su motivación ha logrado en
mí que pueda terminar mis estudios con éxito, por su visión crítica de muchos
aspectos cotidianos de la vida, por su rectitud en su profesión como docente, por
sus consejos, que ayudan a formarte como persona e investigador.
También me gustaría agradecer a mis profesores durante toda mi carrera

profesional porque todos han aportado con un granito de arena a mi formación,
por sus consejos, sus enseñanzas y más que todo por su amistad.
Son muchas las personas que han formado parte de mi vida profesional a las
que me encantaría agradecerles su amistad, consejos, apoyo, ánimo y compañía
en los momentos más difíciles de mi vida. Algunas están aquí conmigo y otras
en mis recuerdos y en mi corazón, sin importar en donde estén quiero darles las
gracias por formar parte de mí, por todo lo que me han brindado y por todas sus
bendiciones.
Para ellos: Muchas gracias y que Dios los bendiga.

DEDICATORIA
Dedico este trabajo principalmente a Dios, por permitirme llegar a este momento
tan especial en mi vida. Por los triunfos y los momentos difíciles que me han
enseñado a valorarlo cada día más.
A mi padre por ser la persona que me ha acompañado durante todo mi trayecto

estudiantil y de vida, a mi madre quien ha velado por mi durante este arduo
camino, que con sus consejos ha sabido guiarme para culminar mi carrera
profesional.
A mi hermana Raquel que me dio su apoyo incondicional durante todo el proceso

de mi carrera, por siempre estar dispuesta a escucharme y ayudarme en
cualquier momento.
A mi familia en general, porque me han brindado su apoyo incondicional y por

compartir momentos buenos y malos conmigo.

AGRADECIMIENTO
• Agradezco primeramente a Dios nuestro señor por permitirme culminar

mis estudios con gran éxito alcanzado.
• A mis padres por brindarme su apoyo y darme sus consejos a lo largo de
todos estos años sin ellos no estaría culminando esta etapa de mi vida.
• A nuestros maestros que con gran sacrificio y esmero nos han dado en
todo el transcurso de estos años el pan del saber y nos han orientado por
el camino del bien hasta culminar nuestra carrera.

DEDICATORIA
Dedicó este trabajo monográfico que representa la suma del esfuerzo de cada
uno de los integrantes de este grupo
A:
• Dios nuestro señor por darnos sabiduría y guiarnos en este arduo trabajo.
• A mis padres por su apoyo incondicional en este largo y duro camino que
apresar de los obstáculos me brindaron su ayuda hasta el final.
• A nuestros profesores por ser un ejemplo a seguir y el puente que nos
permite alcanzar la meta trazada.

RESUMEN
Con el propósito de verificar si estos productos de origen natural cumplen con

los estándares de calidad descritos en el RTCA11.03.56:09 y 11.01.02:04, se
realizó una evaluación de la calidad microbiológica de estos productos, utilizando
los métodos de límites microbianos y números más probables.
Se realizó recuento de bacterias aerobias, hongos y levaduras; Se Identificó en

las muestras a analizar la presencia de Salmonella sp, Staphylococcus aureus,
Pseudomona aeruginosa y Escherichia coli.; se comparó los parámetros
descritos de las etiquetas según el RTCA 11.01.02:04 y se determinó coliformes
totales y fecales.
Como resultado se obtuvo 298 UFC/g en la dilución 10-3 y 39 UFC/g en la

dilución 10-4, en el recuento de bacterias aerobias, en hongos y levaduras se
obtuvo > 300 UFC/g, en ambas diluciones 10-1 y 10-2, en la identificación de
microorganismo se obtuvieron la presencia de E. coli en agar MacConkey y
Salmonella sp en agar XLD, en la determinación de coliformes totales se obtuvo
un resultado >1100 NMP/g, en fecales se obtuvo el mismo resultado y se
procedió a identificación de E. Coli en agar MacConkey dando presencia del
patógeno en los productos reafirmando la presencia obtenida mediante limite
microbiano.
En la comparación de los parámetros de etiquetas se observó como la mayoría

de los productos no cumplía con los establecido en el RTCA, en especial la
muestra 2 ya que su comercialización es sin alguna etiqueta, mientras que en
los otros en su mayoría cumplía con la denominación del producto.
INDICE
I. introducción ................................................................................................. 1
II. Objetivos ...................................................................................................... 4
1. Objetivo general ....................................................................................... 4
2. Objetivos específicos ................................................................................ 4
III. MARCO TEORICO ................................................................................... 5
1. Producto natural medicinal ....................................................................... 5
2. Drogas crudas .......................................................................................... 5
5. Formas farmacéuticas semisólidas de aplicación tópica .......................... 5
10. Calidad de las drogas crudas ................................................................ 7
12. Características de los microorganismos................................................ 8
15. Etiquetado o rotulado .......................................................................... 12
16. Condiciones generales del etiquetado ................................................ 12
17. Etiquetado del envase / empaque primario ......................................... 13
18. Etiquetado del envase / empaque secundario .................................... 14
19. Procedimientos generales ................................................................... 15
19.2 Microorganismos aerobios .................................................................. 15
19.3 Control Negativo ................................................................................. 16
20. Propiedades de Promoción del Crecimiento e Inhibitorias de los Medios
16
21. Aptitud del Método de Prueba ............................................................. 17
22. Pruebas de productos ......................................................................... 18
23.2 Escherichia coli ................................................................................ 20
23.3 Salmonella ....................................................................................... 20
23.4 Pseudomona aeruginosa ................................................................. 21
23.5 Staphylococcus aureus .................................................................... 22
IV. Material y métodos ................................................................................. 23
1. Tipo de estudio ....................................................................................... 23
2. Área de estudio ...................................................................................... 23
3. Población de estudio .............................................................................. 23
4. Muestra .................................................................................................. 23
6. Criterios de exclusión e inclusión ........................................................... 23
9. Procedimientos ....................................................................................... 24
9.1. Recomendaciones Generales .......................................................... 24
9.2. Preparación de la muestra ............................................................... 25
10. Recuento De Organismos Mesofilos Aerobios................................. 25
10.4. Recuento De Hongos Filamentosos Y Levaduras ........................ 26
11. Determinación De Microorganismos Patógenos .............................. 27
12. NMP (número más probables) ......................................................... 28
13. Plan de análisis ................................................................................ 29
14. Operacionalización de las variables .................................................... 29
V. ANALISIS DE LOS RESULTADOS ........................................................... 32
1. Resultados de recuento de Bacteria Aerobias Mesófilas ....................... 32
2. Morfología colonial bacteriana ................................................................ 33
3. Recuentos de hongos y levaduras ......................................................... 34
4. Resultados obtenidos en medio selectivo .............................................. 35
5. Valores del número más probables de microorganismos ....................... 36
6. Resultados obtenidos de la verificación de las etiquetas ....................... 38
VI. CONCLUSIÓN........................................................................................ 40
VII. RECOMENDACIONES .......................................................................... 41
VIII. Bibliografía.............................................................................................. 42
IX. Anexos ................................................................................................... 44
Tablas de preparación de medios de cultivo y agares. ................................. 44
Abreviaturas .................................................................................................. 48
GLOSARIO ................................................................................................... 49
Evaluación de la calidad microbiología de los productos semisólidos analgésicos de origen
natural comercializados por vendedores ambulantes, en el mercado La Terminal de la ciudad
de León, junio 2020.
I. INTRODUCCIÓN
Los ungüentos y pomadas de origen animal y vegetal son comúnmente utilizados por
la mayoría de la población nicaragüense para aliviar diversos malestares como dolor
e inflamación, generalmente son comercializados por vendedores ambulantes, los
cuales los distribuyen a un costo menor que los productos sintéticos, no garantizando
la calidad y eficacia del producto a los consumidores.
La mayoría de estos ungüentos no cuentan con un registro sanitario o una base

científica que garantice la inocuidad, efectividad, así como análisis físico-químicos o
microbiológicos que verifiquen la calidad de las propiedades organolépticas de las
materias primas y de los productos terminados. Con el objetivo de regular la
producción y comercialización de productos naturales fue aprobado como Reglamento
Técnico Centroamericano, RTCA 11.03.56:09, Productos Farmacéuticos. Productos
Naturales Medicinales para uso Humano.
En los mercados populares y centros botánicos se comercializa, por ejemplo: Rax-

Flax, Pomada de Vaca, Pomada de Cascabel y Manteca Azahar en diversas
presentaciones semisólidas (cremas, ungüentos, pomadas y gel) de origen
desconocido, que supone estar hecho con extracto específicos; pese a que según las
autoridades su comercialización es ilegal por no contar con Registro Sanitario; su
demanda se incrementa cada día, por atribuirse propiedades analgésicas.
Es necesario un análisis microbiológico a los productos farmacéuticos terminados no

estériles, para garantizar la calidad del mismo. Los productos no estériles son
susceptibles a contaminación con microorganismos como bacterias, hongos,
levaduras, entre otros en diferentes momentos. En este caso los productos
comercializados ambulantemente en los mercados, probablemente no fueron
elaborados cumpliendo con buenas prácticas de manufactura, están expuestos a
microorganismos por la característica propia de venta, sumado la carencia de posibles
análisis al producto pre comercialización.
Los motivos para realizar esta investigación se centran en la vulnerabilidad que

presentan en los mercados la población; ya que se encuentra expuesta en mayor
medida a los riesgos que puede implicar la utilización continua de cualquiera de las
1
formas farmacéuticas en estudio. Se pretende verificar si estos productos cumplen

con los estándares de calidad descritos en el RTCA11.03.56:09 y 11.01.02:04.
El presente trabajo tiene como fin la evaluación de la calidad microbiológica de

ungüentos o pomadas analgésicas de origen natural (vegetal y animal)
comercializadas en la terminal de buses de la ciudad de León, los análisis a realizar
nos permitirán verificar la calidad de los productos: rax - flax, pomada de vaca, pomada
de cascabel y manteca sajar verificando por método farmacopeico microbiológico USP
39 si cumple con las especificaciones del RTCA vigente de acuerdo a lo declarado
en su marbete, con el propósito de brindar información sobre la calidad microbiológica
de dicho producto que es ofertado sin registro sanitario y es consumido por gran parte
de la población.
Se realizó revisión bibliográfica de investigaciones relacionadas al tema obteniendo

las siguientes investigaciones:
Egoavil; Vega (2015) realizaron una evaluación de la calidad microbiológica de cremas

faciales a base de productos naturales (lechuga, baba de caracol y concha de nácar)
comercializados por centros naturistas en Huancayo.
Se evidenció que todas las muestras analizadas sobrepasaban los límites permisibles,
siendo su calidad microbiológica inaceptable y por tanto no apta para su empleo en
humanos. (Vega Puchuc & Egoavil Villegas, 2015)
Siendo inaceptable según las especificaciones de la propuesta de normativa sobre

especificaciones de producto terminado para cremas cosméticas de tipo limpiadora
(Sieka Vizza, 2006).
Gudiño (2013) realizó un estudio de control microbiológico de cremas faciales, a base

de productos naturales, comercializadas en centros naturistas de la ciudad de quito,
Ecuador.
Al realizar el control microbiológico de las cremas faciales a base de productos

naturales que se muestrearon durante la presente investigación, se determinó que no
cumplen con las especificaciones descritas por la USP 29 y la Decisión 516 de la CAN,
que son las normativas que rigen a nivel nacional. (Gudiño Cando, 2013).
2
Narváez; López (2012) realizaron un estudio de verificación de la calidad

microbiológico de un fitoterapico Mariguanol en gel comercializado en Chinandega,
León, Estelí y Managua durante el periodo enero-octubre, 2012.
El análisis microbiológico efectuado en muestras de Mariguanol, obtenidas en

diferentes departamentos, evidenciaron un alto grado de contaminación bacteriana,
con valores por encima del rango de aceptación establecido por el Reglamento
Técnico Centroamericano R.T.C.A 11.03.56:09 vigente sección microbiológica para
flora aerobia mesófila cuyo límite es ≤102.
Las muestras analizadas evidenciaron la presencia de bacterias patógenas, como

Esherichia coli, Pseudomona ssp. y Salmonella spp. Por lo que estas no cumplen con
el R.T.C.A. 11.03.56:09, ya que estas bacterias no deben estar presentes en ninguna
forma farmacéutica, por el riesgo a la salud del paciente.
Arguello; Martínez (2004) realizaron un análisis microbiológico de fitofármacos no

obligatoriamente estériles elaborados por el laboratorio de ECOLIFE.
De los fármacos analizados siete de estos cumplen con las especificaciones

establecidas para fitofármacos en la Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos
Mexicanos, siendo el extracto de Sen de Alejandría el producto que no cumplió con
estas especificaciones, ya que se encontró por encima de los valores establecidos en
cuanto al recuento de Bacterias Aerobias Mesófilas.
3
II. OBJETIVOS
1. Objetivo general
Evaluar la calidad microbiológica en productos semisólidos de origen natural
comercializadas por vendedores ambulantes en el mercado la terminal de buses de la
ciudad de León, junio 2020.
2. Objetivos específicos
• Realizar a los productos semisólidos de origen natural: Recuento total de
bacterias Aerobias mesófilas, hongos y levaduras Según el RTCA 11.03.56:09
• Determinar coliformes totales y fecales a través del método número más
probable (NMP), según USP 39.
• Identificar en las muestras a analizar la presencia de Salmonella sp,
Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa y Escherichia coli.
• Comparar los parámetros descritos en la etiqueta del producto con los descritos
en el RTCA 11.01.02:04 (Productos farmacéuticos. etiquetado de productos
farmacéuticos para uso humano).
4
III. MARCO TEORICO
1. Producto natural medicinal

Producto procesado, industrializado y etiquetado con propiedades medicinales, que
contiene en su formulación ingredientes obtenidos de las plantas, animales, minerales
o mezclas de éstos. Puede contener excipientes además del material natural. Los
productos naturales medicinales a los que se les adicionen sustancias activas de
síntesis química o aislada de material natural como responsables de la actividad
farmacológica, no son considerados como productos naturales medicinales. (Sánchez
Narváez & Valverde López, 2012)
2. Drogas crudas
Son las drogas vegetales o animales que han recibido sólo el proceso de recolección
y secado para estar en condiciones de ser almacenadas. (Sánchez Narváez &
Valverde López, 2012)
3. Drogas vegetales
Las drogas vegetales pueden usarse frescas o secas, aunque la forma más usada es
la Tintura Madre (TM), producto de la extracción de los principios solubles de la droga
en ciertos excipientes, principalmente alcohol y agua. (Rosales de Barbero, 2014)
4. Drogas animales
Del mismo modo que las vegetales las drogas animales pueden usarse frescas, secas
o sus TM. (Rosales de Barbero, 2014)
5. Formas farmacéuticas semisólidas de aplicación tópica

Son un grupo de preparados farmacéuticos muy heterogéneo, que se caracterizan por
ser más viscosos que el agua y tener una consistencia semisólida. Están destinados
a ser aplicados sobre la piel o ciertas mucosas para ejercer una acción local o permitir
que penetren los medicamentos que contienen. (Lopez García, Ortonobes Roig, &
García Rebollar, 2015).
Están formados por una base (simple o compuesta), también llamada vehículo o
excipiente en la que se disuelven o dispersan uno o varios principios activos. Esta
5
base puede ser terapéutica y modificar la cesión del principio activo. (Lopez García,
Ortonobes Roig, & García Rebollar, 2015).
6. Pomadas
Las pomadas constituyen un grupo de preparados farmacéuticos muy heterogéneo,

caracterizado por su consistencia semisólida. Están destinadas a ser aplicadas sobre
la piel o sobre ciertas mucosas con el fin de ejercer una acción local o de dar lugar a
la penetración cutánea de los medicamentos que contienen. (Vila Jato, 2001).
Las pomadas propiamente dichas constan de un excipiente (también denominado

base), que es graso, en el que se pueden dispersar sólidos o líquidos. En general,
poseen capacidad oclusiva, dificultando la evaporación del agua. Dentro de este
grupo, podemos distinguir los ungüentos y las pomadas. (Lopez García, Ortonobes
Roig, & García Rebollar, 2015).
7. Ungüentos
Se realizan con excipientes grasos hidrófobos, como la vaselina y la parafina. Son los
que poseen una capacidad más oclusiva, ya que forman una capa impermeable sobre
la piel que dificulta la evaporación del agua. Por esta capacidad para retener el agua
interna y el sudor, suavizan e hidratan la piel. No absorben exudados acuosos. Debido
a estas propiedades, los ungüentos están indicados en dermatosis muy secas, en
áreas donde la piel es gruesa como las palmas, las plantas, codos y rodillas. Son la
base ideal para lesiones muy secas, como por ejemplo la psoriasis. También son
excelentes para ablandar y retirar las costras o descamaciones. Por lo contrario, están
contraindicados en zonas infectadas y lesiones exudativas, ya que su efecto oclusivo
empeoraría la infección. (Lopez García, Ortonobes Roig, & García Rebollar, 2015).
8. Cremas o emulsiones
Son una mezcla de agua y sustancias grasas (no miscibles entre sí), que se consiguen
mezclar gracias a la acción de emulgentes para producir una mezcla estable. En
función de su excipiente “principal” se pueden clasificar en cremas lipófilas e hidrófilas.
(Lopez García, Ortonobes Roig, & García Rebollar, 2015).
6
9. Geles
Son sustancias semisólidas, que se forman al tratar líquidos con gelificantes. A la

temperatura de la piel disminuye su viscosidad (útil en zonas pilosas) y pierde rápido
el agua (efecto evanescente). No contienen lípidos, por lo que están recomendados
en pieles grasas. (Lopez García, Ortonobes Roig, & García Rebollar, 2015).
10. Calidad de las drogas crudas

La calidad de las drogas crudas depende de numerosos factores que hacen variar el
contenido de constituyentes lo que incide en la calidad del producto terminado. Por
ello, la calidad del producto final no puede ser asegurada sin el uso de una droga
cruda de buena calidad, independientemente de cuan especial es su proceso de
manufactura. (Sánchez Narváez & Valverde López, 2012).
10.1 Factores que influyen en la calidad de las drogas crudas

• Factores genéticos
• Estado de desarrollo
• Factores climáticos
• Factores nutricionales
• Fuente de obtención
• Tratamientos post-colecta o post-cosecha
• Almacenamiento. (Sánchez Narváez & Valverde López, 2012)
11. Control de calidad
El control de calidad es el conjunto de técnicas y procedimientos del que se sirve la

dirección para la obtención de un producto de la calidad deseada, a su vez es una
inversión que debe producir rendimientos adecuados y en el cual deben estar
involucrados todos los miembros de una empresa. (Cabezón Gutierrez, 2014).
Uno de los pasos imprescindibles que debe efectuarse previamente a su utilización

en un proceso de elaboración industrial o magistral de medicamentos. Su realización
responde a la necesidad de asegurar su identidad, de garantizar su pureza, es decir
de descubrir eventuales adulteraciones, falsificaciones o contaminaciones, de
certificar su estado de conservación y de identificar y valorar su contenido en principios
7
activos, los cuales son, en definitiva, los responsables de su acción farmacológica y

los que le confieren valor terapéutico.
➢ Producto Terminado.
➢ Análisis de materia prima (Droga Cruda y Material semiprocesado -Extractos)
(Sánchez Narváez & Valverde López, 2012).
11.1 Pruebas físicas, químicas y microbiológicas que se le realizan a los
semisólidos.
• Características organolépticas
• Llenado mínimo
• pH
• Identificación general o específica Recuento microbiano (Reglamento técnico
centroamericano RTCA 11.03.56:09, 2009).
12. Características de los microorganismos

12.1 Bacterias aerobias
Bacterias que necesitan oxígeno como un aceptor terminal de electrón y no crecen en

condiciones anaerobias (es decir, ante la falta de O2). Algunas Micrococcus sp. y
Nocardia asteroides son aerobios estrictos (es decir, deben tener oxígeno para poder
sobrevivir). (Jawetz, 2010).
12.1.1 Escherichia coli
Es un bacilo corto que puede formar cadenas y que reacciona negativamente a la

tinción de Gram. Es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su
cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba
de IMVIC es ++--. (Velarde, 2016).
E. coli y la mayor parte de las bacterias intestinales forman colonias circulares

convexas y lisas con bordes definidos. La E. coli O157:H7 es una de cientos de cepas
de la E. coli. Aunque la mayoría de las cepas son inocuas y viven en los intestinos de
los seres humanos y animales saludables, esta cepa produce una potente toxina y
puede ocasionar una enfermedad grave. Se diferencia de las otras E. coli en que no
fermenta el sorbitol, no crece a 44 °C y no produce ß-glucoronidasa. (Velarde, 2016).
12.1.2 E. coli enteropatogénica (ECEP):
8
Es el agente causal predominante de diarrea en niños que viven en países en vías de

desarrollo. ECEP interacciona con las células epiteliales produciendo una lesión
histopatológica característica conocida como “adherencia / destrucción” o lesión A/E.
La temperatura óptima de crecimiento del microorganismo es de 37º C con un intervalo
de crecimiento de 4 a 10ºC. Su pH óptimo de crecimiento es de 7.0 a 7.5 con un pH
mínimo y máximo de crecimiento de 4.0 y 8.5 respectivamente. (Velarde, 2016).
12.1.3 Staphylococcus aureus
Los miembros del género Staphylococcus (estafi lococos) son cocos grampositivos
que tienden a disponerse en racimos similares a uvas. A nivel mundial,
Staphylococcus aureus es una de las causas más comunes de infecciones purulentas
agudas. Otras especies son comunes en la flora cutánea, pero producen
enfermedades de baja intensidad, en forma típica en asociación con alguna
intervención mecánica en el hospedador, como la implantación de un catéter
permanente. (Ahmad, Plorde, & Drew, 2010).
12.1.4 Pseudomonas aeruginosa
Las pseudomonas son bacilos gramnegativos, móviles y aerobios, algunos de los

cuales producen pigmentos hidrosolubles. Las pseudomonas tienen una amplia
distribución en el suelo, el agua, las plantas y los animales. Pseudomonas aeruginosa
a menudo está presente en pequeñas cantidades en la microflora intestinal normal y
en la piel del ser humano y es el principal microorganismo patógeno del grupo. Otras
pseudomonas pocas veces producen enfermedad. La clasificación de las
pseudomonas se basa en la homología de rRNA/DNA y en las características de
cultivo comunes. (Jawetz, 2010).
P. aeruginosa tiene una amplia distribución en la naturaleza y suele estar presente en

medios húmedos en los hospitales. Puede colonizar al ser humano normal en quien
es un saprofito. Causa enfermedades en personas con defensas anormales. (Jawetz,
2010).
12.1.5 Salmonella spp.
Las Salmonellas son bacilos gram negativos, la mayor parte de ellas son móviles y
tiene flagelos perítricos. Estos microorganismos crecen con facilidad en medios
9
sencillos, pero casi nunca fermentan la lactosa o la sacarosa, forman ácido y a veces
gas a partir de la glucosa y manosa, suelen producir H2S, sobreviven a la congelación
en el agua durante periodos prolongados, son resistentes a ciertos productos químicos
( Ej. verde brillante, tetrationato de sodio y desoxicolato de sodio ) que inhiben a otras
bacterias intestinales; por lo tanto estos compuestos son de utilidad para su
inoculación en los medios de cultivo con objeto de aislar a Salmonella spp del
excremento. (Velarde, 2016).
12.1.6 Hongos
Los hongos son protistas no fotosintéticos que crecen en forma de aglomeración de

filamentos remificados y entrelazados (“hifas”) conocidos como micelios. A pesar de
que las hifas poseen paredes cruzadas, estas tienen perforaciones que permiten el
paso libre del núcleo del citoplasma. Por lo tanto, el microorganismo completo es un
cenocito (aglomeración multinuclear de citoplasma continuo) confinado dentro de una
serie de tubos ramificados. Estos tubos, elaborados a base de polisacáridos como
quitina, son homólogos con las paredes celulares. Los micelios se denominan mohos;
unas cuentas variedades, las levaduras no forman micelios, pero se reconocen
fácilmente como hongos por la naturaleza de su reproducción sexual y la presencia
de formas de transición. (Jawetz, 2010).
12.1.7 Levaduras
Son células únicas con forma esférica o elipsoidales, y diámetro que varía de 3 a 15
µm. Muchas de ellas se producen por gemación, y algunas especies producen yemas
que de manera características no se desprenden, y termina por alargarse; el paso
siguiente en ese proceso produce una cadena de levaduras alargadas llamadas
pseudohifas. Las colonias de tales células por lo común son suaves, opacas, de 1 a 3
mm de diámetro de color crema. La morfología de la colonia y la microscópica de
muchas levaduras son muy semejantes, razón por la cual se identifica las especies de
ellas con base en estudios fisiológicos y unas cuantas diferencias morfológicas claves.
Algunas especies de hongos dimórficas y pueden proliferar en las formas de levaduras
o mohos, según las características ambientales. (Jawetz, 2010).
10
Tabla Nº1
13. Especificaciones para determinación de recuento microbiano
Expresados en UFC/g o cm3
Producto Recuento Recuento total de Recuento total

natural total de hongos y de entero
aerobios levaduras bacterias
viables
Preparaciones ≤104 ≤102 ≤102
de
administración
oral
Producto al
que se le ≤105 ≤104 ≤103
agrega agua a
temperatura
ambiente
antes de su
uso.
Producto al ≤107 ≤105 -----
que se le
agrega agua
hirviendo
antes de su
uso.
Preparaciones ≤102 ≤102 ≤101
de
administración
tópica
(Reglamento técnico centroamericano RTCA 11.03.56:09, 2009)
Tabla Nº2
14. Especificaciones para determinación de microorganismos patógenos
Expresados en UFC/g o cm3
Producto Staphylococc Escherici Pseudomo Salmonella

natural s aureus a coli nas sp.
aerugino
sa
11
Preparacio Ausent Ausent Ausente

nes de e e
administrac -----
ión oral
Producto al Ausent
que se le e
-----
agrega Ausente
agua a
temperatura -----
ambiente
antes de su
uso.
Producto al Ausent
que se le e
-----
agrega ----- -----
agua
hirviendo
antes de su
uso
Preparacio Ausent
nes de e Ausente
administrac ----- -----
ión tópica
(Reglamento técnico centroamericano RTCA 11.03.56:09, 2009)
15. Etiquetado o rotulado

Es toda inscripción o leyenda que identifica al producto, que se imprima, adhiera o
grabe en la tapadera del envase o empaque primario, y /o envase o empaque
secundario. (Reglamento tecnico centroamericano (RTCA 11.01.02:04)).
16. Condiciones generales del etiquetado

El etiquetado o rotulado no debe desaparecer bajo condiciones de manipulación
normales, ser fácilmente legible a simple vista y estar redactado en idioma español.
Sin embargo, podrá redactarse a la vez en otros idiomas, pero la información debe ser
esencialmente la misma.
Las etiquetas podrán ser de papel o de cualquier otro material que pueda ser adherido
a los envases o empaques o bien de impresión permanente sobre los mismos; siempre
y cuando este proceso de impresión no altere la integridad del envase o empaque
sobre el cual se realiza dicha impresión.
12
La impresión de las etiquetas que se adhieran al envase o empaque, podrán estar en

el reverso de las mismas, siempre que sean claramente visibles y legibles a través del
envase o empaque con su contenido.
Para efectos de etiquetado las cunas, bandejas, burbujas y otros aditamentos, no se

consideran envase o empaque secundario.
La concentración de vitaminas, enzimas, antibióticos y otros productos que se

declaran en unidades, deberá expresarse en Unidades Internacionales (UI) o en
unidades del Sistema Internacional (SI).
Si el producto se va a comercializar sin el envase o empaque secundario, el etiquetado

del envase o empaque primario debe cumplir con todos los requisitos indicados para
el envase o empaque secundario.
Ungüentos, pomadas, cremas, geles, jaleas, pastas y otras formas similares

(cualquier vía de administración)
17. Etiquetado del envase / empaque primario

La información mínima que deberá llevar el etiquetado del envase o empaque primario
del producto, es la siguiente:
a) Denominación del medicamento;
b) Nombre del (los) principio (s) activo (s) y su concentración;
c) Nombre de la empresa responsable o laboratorio responsable o logotipo que

identifique al laboratorio y país;
d) Número de lote;
e) Fecha de vencimiento;
f) Contenido en volumen, o masa;
g) Forma farmacéutica;
h) Vía de administración;
13
i) Composición del producto por unidad de medida, (por cada gramo o por cada 100
gramos) indicando los principios activos con su concentración;
i) Condiciones de almacenamiento (cuando no tiene envase o empaque secundario

individual);
j) Modalidad de venta (cuando no tiene envase o empaque secundario);
k) Número de registro sanitario (cuando no tiene envase o empaque secundario

individual).
18. Etiquetado del envase / empaque secundario

La información mínima que deberá llevar el etiquetado del envase o empaque
secundario del producto, es la siguiente:
a) Denominación del medicamento;
b) Nombre del (los) principio (s) activo (s) y su concentración
c) Número de lote;
d) Fecha de vencimiento;
e) Contenido, en volumen, o masa;
f) Forma farmacéutica;
g) Vía de administración;
h) Composición del producto por unidad de medida, (por cada gramo o por cada 100
gramos) indicando los principios activos con su concentración;
h) Uso pediátrico o frase equivalente para productos de uso pediátrico exclusivo;
i) Manténgase fuera del alcance de los niños o frase similar;
j) Condiciones de almacenamiento;
k) Modalidad de venta;
l) Número de registro sanitario;
14
m) Nombre del laboratorio fabricante y país de origen;
n) Nombre del empresa responsable y país (si es diferente al fabricante);
o) Nombre del laboratorio acondicionador o empacador y país (si es diferente al

fabricante o al responsable);
p) Precauciones de seguridad y advertencias cuando aplique. (Reglamento tecnico

centroamericano (RTCA 11.01.02:04))
19. Procedimientos generales

La preparación de muestras se realiza según se indica en Examen Microbiológico de
Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano.
Si el producto a examinar posee actividad antimicrobiana, ésta debe eliminarse o

neutralizarse en la medida de lo posible según se describe en Examen Microbiológico
de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano.
Si se emplean sustancias tensoactivas en la preparación de la muestra, se debe

demostrar su ausencia de toxicidad para los microorganismos y su compatibilidad con
cualquier inactivador usado, según se describe en Examen Microbiológico de
Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano (Farmacopea de los
Estados Unidos (USP) 39 - NF 34, 2016).
19.1 Propiedades de promoción del crecimiento e inhibitorias de los

medios, aptitud de la prueba y controles negativos.
Se debe establecer la capacidad de la prueba para detectar microorganismos en

presencia del producto a examinar. Se debe confirmar la aptitud de la prueba si se
introduce un cambio en la ejecución de la prueba o en el producto que pudiera afectar
los resultados.
19.2 Microorganismos aerobios

Cultivar por separado cada cepa bacteriana de prueba en recipientes que contengan
Caldo Digerido de Caseína y Soja o Agar Digerido de Caseína y Soja a una
temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 24 horas. Cultivar por separado
la cepa de prueba de Candida albicans en Agar Sabouraud Dextrosa o Caldo
Sabouraud Dextrosa a una temperatura de 20º a 25º durante un período de 2 a 3 días.
15
Usar Solución Amortiguada de Cloruro de Sodio-Peptona de pH 7,0 o Solución

Amortiguadora de Fosfato de pH 1,2 para preparar las suspensiones de prueba. Usar
las suspensiones dentro de las 2 horas o dentro de las 24 horas si se almacenan a
una temperatura de 2º a 8º.
19.3 Control Negativo

Para verificar las condiciones de prueba, realizar un control negativo usando el
diluyente seleccionado en lugar de preparación de prueba. No debe observarse
crecimiento de microorganismos. Asimismo, realizar un control negativo al analizar los
productos según se indica en Pruebas de Productos. Es necesario investigar cualquier
falla en el control negativo.
Tabla Nº3
20. Propiedades de Promoción del Crecimiento e Inhibitorias de los Medios

Analizar cada partida de medio listo para usar y cada partida de medio preparado a
partir de medio deshidratado o de los ingredientes. Verificar las propiedades
adecuadas de los medios pertinentes según se indica en la Tabla Nº 3.
Prueba/Medio Propiedad Cepas de prueba

Prueba para bacterias Gram-negativas tolerantes a la bilis
Caldo Mossel para Promoción del E. coli
Enriquecimiento de crecimiento
Enterobacterias
P. aeruginosa
Inhibitoria S. aureus
Agar Violeta Rojo Bilis Promoción del E. coli
Glucosa crecimiento + Indicadora
P. aeruqinosa
Prueba de Escherichia coli
Promoción del E. coli
crecimiento
Agar MacConkey Promoción del E. coli
crecimiento + Indicadora
Prueba de Salmonella
Caldo Rappaport- Promoción del Salmonella enterica
Vassiliadis para crecimiento subesp. enterica serovar
Enriquecimiento de Typhimurium
Salmonella
16
Salmonella enterica
subesp. enterica serovar
Abony
Agar Xilosa Lisina Promoción del Salmonella enterica
Desoxicolato crecimiento + Indicadora subesp. enterica serovar
Typhimuriumo
Salmonella enterica
subesp. enterica serovar
Abony
Prueba de Pseudomonas aeruginosa
Agar Cetrimida Promoción del P. aeruginosa
crecimiento
Inhibitoria E. coli
Prueba de Staphylococcus aureus
Agar Manitol Salado Promoción del S. aureus
crecimiento + Indicadora
Inhibitoria E. coli
Prueba de Clostridios
Medio Reforzado para Promoción del CI. sporogenes
Clostridios crecimiento
Agar Columbia Promoción del C/. sporogenes
crecimiento
Prueba de Candida albicans
Caldo Sabouraud Promoción del C. albicans
Dextrosa crecimiento
Agar Sabouraud Promoción del C. albicans
Dextrosa crecimiento + Indicadora
(Farmacopea de los Estados Unidos (USP) 39 - NF 34, 2016)
21. Aptitud del Método de Prueba

Para cada producto nuevo a analizar, realizar una preparación de la muestra según
se indica en el párrafo pertinente en Pruebas de Productos. Al momento de la mezcla,
agregar cada cepa de prueba en el medio de crecimiento indicado. Inocular
individualmente las cepas de prueba. Usar un número de microorganismos
equivalente a no más de 100 UFC en la preparación de prueba inoculada.
Realizar la prueba según se indica en el párrafo pertinente en Pruebas de Productos

empleando el período más corto de incubación indicado.
Se deben detectar los microorganismos específicos con las reacciones indicadoras

según se describe en Pruebas de Productos.
17
Cualquier actividad antimicrobiana del producto requiere de una modificación del

procedimiento de la prueba (ver Neutralización/ Eliminación de la Actividad
Antimicrobiana en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de
Recuento Microbiano para un producto determinado, si la actividad antimicrobiana con
respecto al microorganismo para el cual se indica la prueba no puede neutralizarse,
se asume que el microorganismo inhibido no estará presente en el producto.
22. Pruebas de productos

Bacterias Gram-Negativas Tolerantes a la Bilis
Preparación de la Muestra e Incubación Previa-Preparar una muestra empleando una

dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar según se indica en
Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano,
excepto que se debe usar Caldo Digerido de Caseína y Soja como diluyente de
elección, mezclar e incubar a una temperatura de 20º a 25º durante un período
suficiente para resucitar las bacterias pero que no estimule la multiplicación de los
organismos (por lo general 2 horas pero no más de 5 horas).
Prueba de Ausencia-A menos que se indique algo diferente, usar un volumen

correspondiente a 1 g del producto, según se indica en Preparación de la Muestra e
Incubación Previa, para inocular Caldo Mossel para Enriquecimiento de
Enterobacterias.
Incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 24 a 48 horas.

Subcultivar en placas de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa. Incubar a una temperatura
de 30º a 35º durante un período de 18 a 24 horas.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias.
23. Prueba de Promoción del Crecimiento de Organismos Aerobios,

Anaerobios y Hongos
Evaluar cada lote de medio listo para usar, y cada partida de medio preparado ya sea
a partir de medio deshidratado o mezclando los ingredientes.
Inocular porciones de Medio Líquido de Tioglicolato con un número pequeño (no más
de 100 UFC) de los microorganismos siguientes, usando una porción de medio distinta
18
para cada una de las especies: Clostridium sporogenes, Pseudomonas aeruginosa y

Staphylococcus aureus. •Inocular porciones de medio de tioglicolato alternativo con
un número pequeño (no más de 100 UFC) de Clostridium sporogenes .• Inocular
porciones de Medio de Digerido de Caseína y Soja con un número pequeño (no más
de 100 UFC) de los microorganismos siguientes, usando una porción de medio distinta
para cada una de las especies: Aspergillus brasiliensis, Bacillus subtilis y Candida
albicans. Incubar durante no más de 3 días en el caso de bacterias y durante no más
de 5 días en el caso de hongos. Las técnicas de mantenimiento de cultivos de lote de
siembra (sistemas de lote de siembra) se usan para que los microorganismos viables
empleados para la inoculación correspondan a no más de cinco pasajes desde el lote
de siembra maestro original.
Los medios son adecuados si se produce un crecimiento claramente visible de los

microorganismos.
23.1 Prueba Cuantitativa
Selección y Subcultivo-lnocular cantidades adecuadas de Caldo Mossel para

Enriquecimiento de Enterobacterias con la preparación según se indica en
Preparación de la Muestra e Incubación Previa y/o diluciones de la misma que
contengan respectivamente 0, 1 g; 0,01 g y 0,001 g (ó 0, 1 ml; 0,01 ml y 0,001 ml) del
producto a examinar. Incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un período de
24 a 48 horas. Subcultivar cada uno de los cultivos en una placa de Agar Violeta Rojo
Bilis Glucosa.
Incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 24 horas.
Interpretación-El crecimiento de colonias constituye un resultado positivo. Indicar la

menor cantidad del producto que produce un resultado positivo y la mayor cantidad
que produce un resultado negativo. Determinar la cantidad probable de bacterias a
partir de la Tabla 4.
19
Tabla Nº 4. Interpretación de Resultados
Resultados para Cada Cantidad Cantidad

del Producto Probable de
0,1g o 0,1 Ml 0,01 g o 0,01 mL 0,001 g o 0,001 Bacterias por g o
mL mL del Producto
+ + + más de 103
+ + - menos de 103 y
más de 102
+ - - menos de 102 y
más de 1º
- - - menos de 1O
23.2 Escherichia coli

Preparación de la Muestra e Incubación Previa-Preparar una muestra usando una
Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano
y usar 10 ml o la cantidad correspondiente a 1 g o 1 ml, para inocular una cantidad
adecuada (determinada según se describe en Aptitud del Método de Prueba) de Caldo
Digerido de Caseína y Soja, mezclar e incubar a una temperatura de 30º a 35º durante
un período de 18 a 24 horas.
Selección y Subcultivo-Agitar el recipiente, transferir 1 ml de Caldo Digerido de

Caseína y Soja a 100 ml de Caldo MacConkey e incubar a una temperatura de 42º a
44º durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar en una placa de Agar Mac
Conkey a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 72 horas.
Interpretación-El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli. Esto

se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias o si los resultados de

las pruebas de identificación son negativos. (Farmacopea de los Estados Unidos
(USP) 39 - NF 34, 2016).
23.3 Salmonella
Preparación de la Muestra e Incubación Previa-Preparar el producto a analizar según
se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento
Microbiano y usar una cantidad correspondiente a no menos de 10 g ó 10 ml, para
20
inocular una cantidad adecuada (determinada según se describe en Aptitud del

Método de Prueba) de Caldo Digerido de Caseína y Soja, mezclar e incubar a una
temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 24 horas.
Selección y Subcultivo-Transferir O, 1 ml de Caldo Digerido de Caseína y Soja a 10

ml de Caldo Rappaport-Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella e incubar a
una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 24 horas. Subcultivar en
placas de Agar Xi/osa Lisina Desoxicolato. Incubar a una temperatura de 30º a 35º
durante un período de 18 a 48 horas.
Interpretación-El crecimiento de colonias bien desarrolladas de color rojo, con o sin

centros negros indica la posible presencia de Salmonella. Esto se confirma mediante
pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos

o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.
(Farmacopea de los Estados Unidos (USP) 39 - NF 34, 2016).
23.4 Pseudomona aeruginosa

y usar 10 ml o la cantidad correspondiente a 1 g ó 1 ml, para inocular una cantidad
Digerido de Caseína y Soja y mezclar. Al analizar parches transdérmicos, filtrar el
volumen de muestra correspondiente a un parche de la preparación (ver Parches
Transdérmicos en Preparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos
No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano a través de un filtro de membrana
estéril y colocar en 100 ml de Caldo Digerido de Caseína y Soja. Incubar a una
Selección y Subcultivo-Subcultivar en una placa de Agar Cetrimida e incubar a una

Interpretación-El crecimiento de colonias indica la posible presencia de P. aeruginosa.

Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
21

las pruebas de identificación confirmatorias son negativos. (Farmacopea de los
Estados Unidos (USP) 39 - NF 34, 2016).
23.5 Staphylococcus aureus

y usar 10 ml o la cantidad correspondiente a 1 g ó 1 ml, para inocular una cantidad
Digerido de Caseína y Soja y homogenizar. Al analizar parches transdérmicos, filtrar
el volumen de muestra correspondiente a un parche de la preparación (ver Parches
Transdérmicos en Preparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos
No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano a través de un filtro de membrana
estéril y colocar en 100 ml de Caldo Digerido de Caseína y Soja. Incubar a una
Selección y Subcultivo-Subcultivar en una placa de Agar Manito/ Salado e incubar a

una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 72 horas.
Interpretación-El crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas de una zona

amarilla indica la posible presencia de S. aureus. Esto se confirma mediante pruebas
de identificación.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos

o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.
(Farmacopea de los Estados Unidos (USP) 39 - NF 34, 2016).
22
IV. MATERIAL Y MÉTODOS
1. Tipo de estudio
Experimental: Porque se tendrá un control máximo de las variables para lograr los
resultados deseados.
De corte transversal: porque se realiza en un tiempo determinado, Junio 2020.
2. Área de estudio
Laboratorio de Microbiología del departamento de Farmacia Industrial de la carrera de
Farmacia facultad de Ciencias Químicas de la UNAN-león
3. Población de estudio
Productos semisólidos analgésicos de origen natural comercializados por vendedores
ambulantes, en el mercado la terminal de León.
4. Muestra
Se tomará 4 unidades por cada producto semisólidos seleccionado (Manteca Azahar,
Pomada de Vaca, Pomada de cascabel, Rax – Flax), verificando si son del mismo lote,
en el caso que no fuese así se tomarían 4 que no tengan número de lote.
5. Variable
Microorganismos aerobios
Hongos y levaduras
Bacterias patógenas
Etiqueta
Coliformes totales
Coliformes fecales
6. Criterios de exclusión e inclusión

6.1. Criterios de inclusión
• Productos semisólidos de origen natural comercializados por vendedores
ambulantes de la terminal de buses en la ciudad de León, que tengan una mala
23
manipulación de los productos por parte de los comerciantes y que no cumplan

con los parámetros descritos en el RTCA 11.01.02:04.
6.2. Criterios de exclusión
• Productos semisólidos de origen natural comercializados por vendedores
ambulantes de la terminal de buses en la ciudad de León, que tengan una
buena manipulación de los productos por parte de los comerciantes y que
cumplan con los parámetros descritos en el RTCA 11.01.02:04.
7. Fuentes de información
Fuentes de información primaria: Libros de microbiología clínica, Normas técnicas

como los RTCA 11.03.56:09, 11.01.02:04 y la farmacopea estadounidense (USP 39).
Fuentes de información secundaria: Investigaciones realizadas acerca de control

microbiológico a productos farmacéuticos no obligatoriamente estériles.
8. Instrumento y procedimiento de recolección de muestras
Para la adquisición de la muestra se consideró el mercado la terminal de buses de la

ciudad de León, en el cual se da la mayor cantidad de comerciantes ambulantes de
productos farmacéuticos de origen natural en el departamento debido al gran tránsito
de personas que se movilizan a diferentes ciudades del país, posteriormente se
procederá la gestión de compra en dicho mercado considerando los vendedores de
mayor reconocimiento y de mayor cantidad de productos por parte de la población,
para cumplir con el requisito de inclusión como era productos semisólidos de origen
natural de mala manipulación por parte de los comerciantes y que no cumplan con el
RTCA 11.01.02:04.
9. Procedimientos
9.1. Recomendaciones Generales

• Toda muestra deberá analizarse bajo condiciones asépticas.
• El tiempo transcurrido desde la primera dilución hasta su incorporación en el
medio de cultivo, no deberá exceder de una hora.
• Antes de proceder a realizar el análisis microbiológico los envases que
contienen la muestra, deberán ser limpiados con algodón y alcohol de 70º y se
debe esperar a que seque el envase para luego iniciar el trabajo.
24
9.2. Preparación de la muestra

1. Se tomarán cuatro pomos de Rax – flax, pomada de vaca, pomada de cascabel
y manteca de Azahar; del vendedor seleccionado.
2. Se tomará la mitad de cada producto de los cuatro pomos para obtener nuestro
pool utilizando una espátula diferente, esta previamente esterilizada, para cada
pomo.
3. Luego se adicionará 10g del pool a un Erlenmeyer que contenía 90 mL de
solución fosfato (diluyente), para obtener nuestra dilución 10−1.
a. De la mezcla del punto 3, se tomará 1mL y se adicionará a un tubo de
ensayo que contenía 9mL de solución fosfato dilución 10−2, de esta se
tomará 1mL y se agregará a otro tubo de ensayo que contenía 9mL de
solución fosfato dilución 10−3 , de igual modo hasta llegar a obtener
diluciones hasta 10−4
4. Trabajando por duplicado se adicionará un mililitro a cada placa Petri, luego se
adicionará el medio de cultivo estéril Agar Tripitica Soya a una temperatura de
45ºC adicionando de 15 a 18 mL a cada placa Petri.
5. Posteriormente trabajando por duplicado se adiciono un mililitro a cada placa
Petri, luego se adicionará el medio de cultivo estéril Agar Saburaud Dextrosa a
una temperatura de 45ºC adicionando de 15 a 18 mL a cada placa Petri. Se
agitará suavemente en forma de ocho hasta logra una homogenización muestra
- agar.
6. Se procederá a la incubación a diferentes temperaturas de las muestras para
Bacteria Aerobias Mesófitas a 36 – 37ºC por 48 hrs. Y para Hongos y Levaduras
a 20 – 22ºC de 5 a 7 días de incubación, para proceder a su recuento.
10. Recuento De Organismos Mesofilos Aerobios

10.1. Método En Placa:
NOTA: En función del grado de contaminación esperado en el producto, efectuar las

diluciones decimales que se estimen convenientes para que 1 g contenga entre < 104
UFC / g (mayor significado estadístico). Cuando no se tiene antecedentes al respecto
es conveniente efectuar hasta la dilución 10−3 y ampliar o reducir el número de
diluciones en base a la experiencia.
25
10.3. Efectuar tres diluciones decimales:

• Primera dilución: se toman 10 ml de muestra. Se añaden a 90 ml del diluyente
seleccionado contenido en un Erlenmeyer.
• Segunda dilución: Transferir 1 ml de la primera dilución a un tubo de ensayo
conteniendo 9 ml de solución diluida de Fosfatos pH 7.2 (diluyente).
• Tercera dilución: Transferir 1 ml de la segunda dilución a un tubo de ensayo
conteniendo 9 ml de solución diluida de Fosfatos pH 7.2 (diluyente).
NOTA: Utilizar una pipeta única para cada dilución.
• Simultáneamente inocular por duplicado 1 ml de cada dilución del producto en

placa petri, añadir a cada placa 15 –20 ml de medio Agar tripticaseína
previamente esterilizado y mantenido en baño María a temperatura entre 45-
48ºC (para mantenerlo fundido).
• Con movimientos suaves rotatorios, mezclar la alícuota de la muestra con el
medio de cultivo, evitando que se produzca un derrame. Permitir que el medio
solidifique e incubar las placas en posición invertida a 35ºC – 37ºC, durante 48
– 72 horas.
• Después del período de incubación contar el número de UFC con ayuda del
contador de colonias. Se determina la media o promedio de UFC por cada
dilución. Informar el número de UFC por gramo o por ml del producto,
considerando el factor de dilución de la muestra.
• El producto se acepta si se observan UFC en cantidades menores de 105 UFC
por ml de muestra.
10.4. Recuento De Hongos Filamentosos Y Levaduras

• Se procederá igual como se indica en el recuento de organismos mesofilos
aerobios, con la excepción que se utiliza el medio agar dextrosa – sabouroud o
agar dextrosa – papa incubar a 22ºC – 25ºC durante cinco a siete días.
• Después del período de incubación contar el número de UFC existentes con
ayuda del contador de colonias. Informar el número de UFC por ml de muestra,
tomando en cuenta el factor de dilución de la muestra. El producto se acepta si
hay ausencia de colonias o la cantidad existente es menor de 102 colonias por
ml de muestra.
26
11. Determinación De Microorganismos Patógenos
11.1. Staphylococcus aureus
Preparar una muestra usando una dilución 1 en 1 O de no menos de 1 g y usar 1 O

ml o la cantidad correspondiente a 1 g ó 1 ml, para inocular una cantidad adecuada
de Caldo Digerido de Caseína y Soja y homogenizar. Incubar a una temperatura de
30º a 35º durante un período de 18 a 24 horas.
Subcultivar en una placa de Agar Manito/ Salado e incubar a una temperatura de 30º
a 35º durante un período de 18 a 72 horas.
11.2. Salmonella
Usar una cantidad correspondiente a no menos de 1 O g ó 1 O ml, para inocular una

cantidad adecuada (determinada según se describe en Aptitud del Método de Prueba)
de Caldo Digerido de Caseína y Soja, mezclar e incubar a una temperatura de 30º a
35º durante un período de 18 a 24 horas.
Transferir O, 1 ml de Caldo Digerido de Caseína y Soja a 1 O ml de Caldo Rappaport-

Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella e incubar a una temperatura de 30º a
35º durante un período de 18 a 24 horas. Subcultivar en placas de Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato. Incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 48
horas.
11.3. Escherichia coli

Caldo Digerido de Caseína y Soja, mezclar e incubar a una temperatura de 30º a 35º
durante un período de 18 a 24 horas. Agitar el recipiente, transferir 1 ml de Caldo
Digerido de Caseína y Soja a 100 ml de Caldo MacConkey e incubar a una
temperatura de 42º a 44º durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar en una
placa de Agar MacConkey a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18
a 72 horas.
11.4. Identificación de Pseudomonas aeroginosa
➢ Del medio triptica soya del procedimiento anterior si presenta evidencia de

crecimiento microbiano, inocular con un asa de cultivo en agar Cetrimide e
incubar a 30 - 35⁰C por 18 – 72 horas.
27
El crecimiento de colonias verdes fluorescentes, indica la posible presencia de

Pseudomona aeruginosa. Esto se confirma con la prueba de la oxidasa.

la prueba son negativos.
12. NMP (número más probables)

12.1. Coliformes totales
• Realizar un pool de 10 del producto con 90 ml de fosfato monobásico potásico
+ 4 % Tween 80 (Desactivante).
• Preparar diluciones decimales seriadas del producto (10-1 a 10-3).
• Preparar tres series de tres tubos cada una con 10ml de Lactosa y campana
Durham.
• Adicionar 1ml de cada una de las diluciones a cada uno de los tres tubos de
cada serie:
• A tres tubos de la primera serie se adiciona 1ml de dilución 1:10.
• A tres tubos de la segunda serie se adiciona 1ml de dilución 1:100.
• A tres tubos de la tercera serie se adiciona 1ml de dilución 1:1000.
• Incubar a 36 – 37 ºC durante 48 horas.
• Realizar lecturas a las 48 horas
Lectura e interpretación:
Observación de la generación de gas depositado en la campana Durham (al menos

en 1/10 parte de su volumen) y de la aparición de coloración amarilla en el medio de
cultivo como consecuencia de la fermentación de la lactosa.
Confirmación:
• Sembrar por estría (aislamiento) con asa de platino los tubos positivos en Caldo
Verde Brillante.
• Incubar a 36 – 37 ºC durante 48 horas.
• La aparición de colonias con brillo verde metálico o negras confirma la
presencia de coliformes.
28
• Anotar el número de tubos confirmados en cada serie y recurrir a la tabla del

NMP donde se obtiene el recuento por gramo o mililitro del producto.
12.2. Coliformes fecales
Procedimiento:
• Tomar con pipeta 1 ml de los tubos positivos y transferir a los tubos con 10ml
de caldo E. Coli con campana Durham.
• Incubar a 44 – 45 ºC/48h.
• Anotar tubos positivos (amarillos y con gas en campana).
• Determinar NMP de coliformes fecales.
Escherichia Coli
• Procedimiento: Inoculación de las cajas por estría cruzada

• Sembrar dos placas de medio MacConkey a partir de tubos positivos con caldo
EC.
• Incubar 48h a 36 - 37°C.
13. Plan de análisis

Realizar pruebas microbiológicas para verificar la calidad de los productos semisólidos
de origen natural mediante:
• Prueba de Recuento de organismos Mesófilos aerobios, tomando en cuenta las

características de crecimiento bacteriano y periodo de incubación.
• Identificación de microorganismos patógenos.
• Recuento de hongos filamentosos y levaduras.
• Determinación de coliformes totales y fecales mediante el método de número
más probable.
Tabla N. º 5
14. Operacionalización de las variables

Variables Definición Indicador Escala
Microorganismo Las bacterias Crecimiento de UFC/g
aerobios aerobias forman colonias
parte de un tipo de No crecimiento de
organismo que colonias
29
necesita de un
ambiente que
contenga oxígeno
diatómico (un gas
compuesto por dos
átomos de oxígeno)
para poder existir y
desarrollarse
adecuadamente, es
decir, éstas bacterias
necesitan
oxígeno para la
respiración celular.
Hongos y Los hongos son Crecimiento de UFC/g
levaduras organismos colonias
eucariotas que No crecimiento de
pertenece al reino colonias
fungí. Las levaduras
son hongos que
forman sobre los
medios de
cultivo colonias
pastosas,
constituidas en su
mayor parte por
células aisladas que
suelen ser esféricas,
ovoideas, elipsoideas
o alargadas.
Bacterias Las bacterias Escherichia coli Presencia
patógenas patógenas son Salmonella sp Ausencia
aquellas que causan Staphylococcus
enfermedades aureus
infecciosas es decir, Pseudomona
que provocan daños aeruginosa
en los organismos.
Generalmente las
bacterias patógenas
son específicas ya
que un tipo de
bacteria origina un
tipo de enfermedad.
Etiqueta La etiqueta es una Denominación del Cumple,
parte fundamental del medicamento; No cumple
producto, sirve para Nombre del (los) Con los
identificarlo, principio (s) activo parámetros
describirlo, (s) y su establecidos
diferenciarlo, dar un concentración; en el RTCA
servicio al cliente y 11.01.02:04
30
por supuesto, Nombre de la

también para cumplir empresa
con las leyes, responsable o
normativas o laboratorio
regulaciones Número de lote;
establecidas para Fecha de
cada industria o vencimiento;
sector. Contenido en
volumen, o masa;
Forma
farmacéutica;
Vía de
administración;
Composición del
producto por unidad
de medida
l) Condiciones de
almacenamiento
m) Número de
registro sanitario
Coliformes Son las Positivo
totales enterobacteriáceas Negativo NMP/g
lactosa-positivas y
constituyen un grupo
de bacterias que se
definen más por las
pruebas usadas para
su aislamiento que
por criterios
taxonómicos
Coliformes Grupo de bacterias Positiva NMP/g
fecales aerobias y Negativa
facultativamente
anaerobias,
Gramnegativas, no
esporulantes,
fermentadoras de
lactosa y habitantes
típicos del intestino
grueso humano y
animal.
31
V. ANALISIS DE LOS RESULTADOS

Tabla Nº6
1. Resultados de recuento de Bacteria Aerobias Mesófilas

Lectura a las 72 horas
Diluciones
Muestras 𝟏𝟎−𝟏 𝟏𝟎−𝟐 𝟏𝟎−𝟑 𝟏𝟎−𝟒 C.* C.¥
M1 - - 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 0
𝑼𝑭𝑪⁄ 𝑼𝑭𝑪⁄
M2 - - 298 39 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 𝒈 𝒈
𝑼𝑭𝑪⁄
𝒈
M3 - - 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈
M4 - - 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈
M1: Pomada de cascabel
M2: Manteca de Azahar
M3: Pomada de Vaca
M4: Rax – Flax
C.*: Control del medio
C.¥: Control del ambiente
La tabla 6 evidencia los resultados obtenidos para el ensayo de Bacterias Aerobias
Mesófilas aplicado a muestras de Pomada de cascabel, Manteca de azahar, Pomada
de vaca, Rax – Flax, con el medio Triptica Soya; del cual posterior a la incubación se
procedió a realización de las lecturas para lo cual a las 48 horas de incubación se
obtuvieron 298 x 10 3 UFC/g en las dilución 10-3 y en la dilución 10-4 se obtuvo 39 x 10

4 UFC/g, en la muestra 2, a diferencia de las otras muestras que se obtuvieron 0 UFC/g
en ambas diluciones. Se logró identificar con exactitud en base el recuento que la
muestra M2 presenta el mayor índice de contaminación seguido de las muestras M1,
32
M3 y M4, dichos valores corresponden a valores por encima del R.T.C.A 11.03.56:09
vigente sección microbiológica para flora aerobia mesófila cuyo límite es ≤102.
Tabla Nº7
2. Morfología colonial bacteriana

Muestras Superficie Borde Forma Pigmentación
M1 - - - -
M2 Plano - Redondeado Circular Crema
convexa
M3 - - - -
M4 - - - -
M3: Pomada de Vaca
M4: Rax – Flax
Plano-convexa:
Convexa:
Redondeado:
Ondulado:
Circular:
Irregular:
La tabla 7 evidencia la morfología de las colonias obtenidas en la determinación de
Bacterias Aerobias Mesófilas en medio de cultivo Triptica Soya, aplicado a muestras
de Pomada de cascabel, Manteca de Azahar, Pomada de Vaca, Rax – Flax; La
morfología de las colonias es una de las características básicas de las bacterias y es
indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificación preliminar.
33
Los resultados evidencian que las bacterias desarrolladas presentaron poca variedad
de tamaños y formas, predominado principalmente en la muestra 2 bacterias de borde
redondeado, superficie plano-convexa y forma circular de coloraciones crema.
Tabla Nº 8
3. Recuentos de hongos y levaduras

Lecturas a las 120 horas
Diluciones
Muestras 𝟏𝟎−𝟏 𝟏𝟎−𝟐 𝟏𝟎−𝟑 𝟏𝟎−𝟒 C.* C.¥
M1 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 - - 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈
M2 >300 >300 - -
𝑼𝑭𝑪⁄ 𝑼𝑭𝑪⁄
𝒈 𝒈
M3 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 - -
M4 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 0 𝑼𝑭𝑪⁄𝒈 - -
M3: Pomada de Vaca
M4: Rax – Flax
C.*: Control del medio
C.¥: Control del ambiente
La tabla 8 evidencia los resultados obtenidos para el ensayo de Hongos y Levaduras

aplicado a las muestras en estudio, con el medio Sabouraud; del cual posterior a la
incubación se procedió a realización de las lecturas , para lo cual a los 5 días de
incubación se obtuvieron más de 300 UFC/g en las diluciones 10-1,10-2 para la muestra
2; dichos valores sobre pasan el valor contable por placa, se logró identificar con
exactitud en base el recuento que la muestra M2 presenta el mayor índice de
contaminación seguido de las muestras M1, M3 y M4, dichos valores corresponden a
34
valores por encima del R.T.C.A 11.03.56:09 vigente sección microbiológica de

recuento de hongos y levaduras cuyo límite es ≤102.
Tabla Nº 9
4. Resultados obtenidos en medio selectivo

Medio BAM M1 M2 M3 M4
Sal Staphylococcus Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
manitol aureus
Mac E. coli Ausencia Presencia Ausencia Ausencia
Conkey
Cetrimide Pseudomonas Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
aeruginosa
XLD Salmonella sp. Ausencia Presencia Ausencia Ausencia
M3: Pomada de Vaca
M4: Rax – Flax
XLD: xilosa-lisina-dexosicolato
La tabla 9 nos refleja el resultado obtenidos en medios de cultivo selectivo posterior a

la resiembra de colonias obtenidas en la lectura de Bacterias aerobias mesófilas en
medio de cultivo Triptica soya en muestras de Pomada de cascabel, Manteca de
Azahar, Pomada de Vaca, Rax – Flax; para los cual los resultados obtenidos
evidencian que la muestra M2 mostro crecimiento de E. coli y Salmonella sp. (El Medio
Mac Conkey medio selectivo para E. coli y el medio XLD medio selectivo para
Salmonella sp., se observa las características de las colonias de E. coli, color rosa y
las características de la colonia de Salmonella sp. Color transparente con puntos
negros. Para la muestra M1, M3 y M4, no se evidencia la presencia de
microorganismo.
35
Tabla Nº 10
Número más probable (NMP): >1100 NMP/g de coliformes fecales y totales.
5. Valores del número más probables de microorganismos

Combinaciones observadas de numero de tubos NMP por g o Límites de
que muestran crecimiento en cada juego. por ml de confianza de
producto 95%
Numero de g o ml de producto por tubo
0,1 0,01 0,001
0 0 0 <3 0-9,4
0 0 1 3 0,1-9,5
0 1 0 3 0,1-10
0 1 1 6,1 1,2-17
0 2 0 6,2 4-35
0 3 0 9,4 1,3-20
1 0 0 3,6 4-35
1 0 1 7,2 1,2-17
1 0 2 11 4-35
1 1 0 7,4 1,3-20
1 1 1 11 4-35
1 2 0 11 4-35
1 2 1 15 5-38
1 3 0 16 5-38
2 0 0 9,2 1,5-35
2 0 1 14 4-35
2 0 2 20 5-38
2 1 0 15 4-38
2 1 1 20 5-38
2 1 2 27 9-94
2 2 0 21 5-40
2 2 1 28 9-94
2 2 2 35 9-94
36
2 3 0 29 9-94
2 3 1 36 9-94
3 0 0 23 5-94
3 0 1 38 9-104
3 0 2 64 16-181
3 1 0 43 9-181
3 1 1 75 17-199
3 1 2 120 30-360
3 1 3 160 30-380
3 2 0 93 18-360
3 2 1 150 30-380
3 2 2 210 30-400
3 2 3 290 90-990
3 3 0 240 40-990
3 3 1 460 90-1980
3 3 2 1100 200-4000
3 3 3 >1100
En la tabla Nº10 se señala el resultado de la determinación de coliformes totales y

fecales, en la muestra Nº2 se llegó a tener todos los tubos positivos, se realizó la
prueba confirmativa para coliformes totales en caldo verde brillante dando el resultado
de >1100 NMP/g no estando dentro de un límite de confianza aceptable y en
coliformes fecales se realizó la prueba confirmativa en caldo E. coli, dando como
resultado positivo, luego se subcultivo agar MacConkey para determinar E. coli, dando
como resultado presencia del patogeno.
37
Tabla Nº11
6. Resultados obtenidos de la verificación de las etiquetas

Información de M1 M2 M3 M4
las etiquetas
Denominación Cumple No cumple Cumple Cumple
del
medicamento
Nombre del (los) No cumple No cumple Cumple No cumple
principio (s)
activo (s) y su
concentración
Nombre de la No cumple No cumple No cumple No cumple
empresa
responsable o
laboratorio
responsable o
logotipo que
identifique al
laboratorio y
país.
Número de lote No cumple No cumple No cumple No cumple
Fecha de Cumple No cumple No cumple Cumple
vencimiento
Contenido en No cumple No cumple No cumple No cumple
volumen, o
masa
Forma Cumple No cumple No cumple No cumple
farmacéutica
Vía de No cumple No cumple No cumple No cumple
administración
Composición del No cumple No cumple Cumple No cumple
producto por
38
unidad de
medida,
indicando los
principios
activos con su
concentración
Condiciones de No cumple No cumple No cumple No cumple
almacenamiento
Modalidad de No cumple No cumple No cumple No cumple
venta
Número de Cumple No cumple No cumple No cumple
registro sanitario
M3: Pomada de Vaca
M4: Rax – Flax
En la tabla Nº11 se presenta los aspectos que tienen que llevar las etiquetas según el
RTCA 11.01.02:04 de etiquetados de productos farmacéutico, en el cual se observa
como en las muestras no cumplen con la mayoría de estos aspectos, como: registro
sanitario, solo lo cumple la M1, siendo estos unos de los aspectos más importantes a
la hora de comercializar un producto farmacéutico, también no se cumple aspectos
importantes como el nombre y concentración de los excipientes y/o principios activos,
en la M2 no cumple con ningún requisito del RTCA ya que su comercialización es sin
ninguna etiqueta, en la M3 con la denominación de su producto y nombre de los
principios activo y/o excipientes a diferencia de la M4 que solo cumple con su
denominación y fecha de vencimiento.
Estos productos de origen animal en su mayoría no cumplen con los ítems que se
evalúan por el RTCA de etiquetado de productos semisólidos, pudiendo generar
desconfianza en aquellos que conocen del tema, no así en los no tienen conocimiento
alguno.
39
VI. CONCLUSIÓN
El presente trabajo tuvo como fin la evaluación microbiológica de los productos
semisólidos analgésicos de origen natural comercializados por vendedores
ambulantes, en el mercado la terminal de la ciudad de León, según método de
referencia el RTCA 11.03.56:09, RTCA 11.01.02:04 y USP 39, donde se determinó la
presencia de coliformes totales y fecales; Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp, recuento de bacterias aerobias mesófilas y
recuento de hongos y levaduras. En relación a esto se llegó a la siguiente conclusión:
1. De las 4 muestras analizadas 3 de ellas resultaron dentro de los límites

establecidos según el RTCA 11.03.56:09 de verificación de la calidad, siendo
las M2 la única que no cumplió con varios de estos parámetros.
2. La M2 que presento diversas inconformidades se logró obtener presencia de
Escherichia coli, Salmonella sp, el recuento de bacterias aerobias, hongos y
levaduras supero los límites establecidos por el RTCA 11.03.56:09, además
presentaron coliformes totales y fecales. Por lo tanto, este producto posee
bacterias patógenas que pueden producir una enfermedad a los pacientes
después de su aplicación.
3. En la evaluación de la etiqueta las M1, M3 y M4 con 1 o 2 parámetros
establecidos por el RTCA 11.01.02:04, a diferencia de la M2 que no cumplió
con ninguno de los parámetros, porque no posee etiqueta, debido a su popular
forma de comercialización.
Por lo tanto, podemos concluir que la M2 no puede ser utilizado por la población ya
que sobrepasa el número de UFC / g establecidos en la RTCA 11.03.56:09, además
de que posee coliformes fecales y totales, presentando agentes patógenos que puede
ser perjudicial para la piel de las personas. También siendo de gran desconfianza el
no brindar información necesaria del producto reflejado en la etiqueta.
40
VII. RECOMENDACIONES
Después de haber concluido el estudio investigativo recomendamos lo siguiente:
Realizar ensayos fisicoquímicos que permitan la cuantificación de los componentes

presentes en el marbete de los productos en estudio.
Efectuar estudios para la verificación de la calidad a productos medicinales de mayor

auge que no cuenten con registro sanitario.
Aplicar el marco normativo para la comercialización de estos productos, ya que en los

canastos que los caminan los vendedores, están expuestas a cambios atmosféricos
que puedan afectar la estabilidad de estos productos.
Al Ministerio de Salud que realicen inspecciones más frecuentes a los lugares en

donde comercializan estos productos a nivel nacional y que verifiquen la calidad de
los productos comercializados, los cuales deben ser inocuos al consumidor.
Persuadir como profesionales de la salud a la población, a tener mayor cuidado con

los productos de origen natural que se distribuyen libremente en mercados y pulperías,
sin ningún respaldo científico.
A la Facultad de Ciencias Químicas, específicamente a la carrera de Farmacia que

promueva la realización de trabajos monográficos enfocados en el cumplimiento de la
calidad de productos naturales a través de Buenas Prácticas de Manufactura y de
Almacenamiento.
41
VIII. BIBLIOGRAFÍA
1. Ahmad, N., Plorde, J., & Drew, L. (2010). Microbiologica médica (Quinta ed.).
(K. Ryan, G. Ray, Edits., S. M. Olivares Bari, & G. A. Rebatet, Trads.) Mexico
DF: Mc Graw Hill Interoamericanas editores S.A.
2. Cabezón Gutierrez, S. (2014). Control de calidad en la producción idustrial.

Valladolid: Universidad de Valladolid.
3. Farmacopea de los Estados Unidos (USP) 39 - NF 34. (2016). Examen

microbiologico de productos no esteriles (Vol. I).
4. Jawetz, M. A. (2010). Microbiologia Medica. Mexico DF: Mc Graw Hill.
5. Lopez García, B., Ortonobes Roig, C., & García Rebollar, C. (2015).
Pequeñeces y rarezas. Recuperado el 15 de Marzo de 2020, de Pequeñeces y
rarezas: http://archivos.fapap.es/files/639-1294-
RUTA/FAPAP_4_2015_Unguentos_pomadas.pdf
6. Reglamento tecnico centroamericano (RTCA 11.01.02:04). (s.f.). Etiquetados

de productos farmacéuticos para uso humano.
7. Reglamento técnico centroamericano RTCA 11.03.56:09. (2009). Productos

farmacéuticos. Productos naturales medicinales para uso humano. verificación
de la calidad.
8. Rosales de Barbero, I. (2014). Farmaconogsia. Madrid: El mundo.
9. Sánchez Narváez, J., & Valverde López, K. (2012). Verificación de la calidad

Microbiologica de un Fitoterápico Marihuanol en gel comercializado en
Chinandega, León, Estelí y Managua durante el periodo enero-octubre 2012.
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10. Vega Puchuc, B. E., & Egoavil Villegas, H. M. (20 de diciembre de 2015).
Blogspot. Recuperado el 3 de noviembre de 2019, de Blogspot:
http://egoavilvillegas15.blogspot.com/2015/12/evaluacion-de-la-calidad-
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11. Velarde, M. (2016). Slideshare. Recuperado el 31 de marzo de 2020, de

Slideshere: https://es.slideshare.net/josuesilva526/examen-microbiologico-y-
reporte-de-control-microbiologico-de-productos-farmaceuticos-no-
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12. Vila Jato, J. L. (2001). Tecnología farmacéutica Volumen II: Formas

farmacéuticas. Madrid: SINTESIS S.A.
13. Cerra H; Fernández, M.C; et – al. (2013). Manual de Microbiología aplicada a

las Industrias Farmacéutica, Cosmética y de Productos Médicos. Asociación
42
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Disponible en: http://www.aam.org.ar /descarga-archivos/manual-
microbiologia-aplicada.pdf
14. Coordinación de Establecimientos Farmacéuticos y Afines, Guatemala. 2003.
Manual de Buenas Prácticas de Manufactura para la Industria Cosmética
(Normativas Internas del Departamento de Regulación y Control de Productos
Farmacéuticos y Afines). [En línea]. Fecha de Revisión: Febrero 2020.
Disponible en: http://medicamentos.mspas.gob.gt/ index.php/legislacion-
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15. Ramírez V, Castellón M. (2004). Determinación de la Actividad Antimicrobiana
en cepas de Pseudomona aeruginosa, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Salmonella typhymurium,
Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae, a seis extractos de plantas que fueron
colectadas en la Biodiversidad Vegetal de la Estación Biológica de Bartola –
Río San Juan. Tesis para optar al Título de Licenciado Químico-farmacéutico.
Universidad Nacional Autónoma de NicaraguaLeón
16. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos Sexta edición Pág.1733 –1740
17. . Medrano K, Mayorga D, Mantilla E. (2013). Evaluación de Actividad
Antimicrobiana de 5 especies vegetales colectadas en la ciudad de León a
través del Método MTT (Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5
difeniltetrazolio). Tesis para optar al Título de Licenciado Químico-
farmacéutico. Universidad Nacional Autónoma de NicaraguaLeón.
18. María Milagro Montero, 2012 Pseudomona aeruginosa multiresistente:
aspectos epidemiológicos, clínicos y terapéuticos. Tesis doctoral
19. Lic. Lisseth Arauz, Examen microbiológico de productos no estériles: prueba
de recuento microbiano y prueba de microorganismos específicos, guía de
laboratorio de control microbiológico-UNAN LEÓN.
20. (María José Suarez, 2000) Preparaciones farmacéuticas elaboradas con base
en productos naturales, tesis de grado, Facultad de Ciencias Jurídicas y
Socioeconómicas Santafé de Bogotá D.C. – Colombia.
43
IX. ANEXOS
Anexo 1
Tablas de preparación de medios de cultivo y agares.

Agar tripticaseina soya
Componentes Cantidades
Digerido pancreático de caseína 15.0g
Digerido papainico de soja 5.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agar 15.0 g
Agua purificada 1000 ml
pH después de esterilizar 7.3 ± 0.2
Preparación:
Disolver el digerido pancreático de caseína y el digerido papainico de soja, calentar
de 48° C a 50° C en BM por 30 minutos aproximadamente. Adicionar el cloruro de
sodio, agar, mezclar y esterilizar.
Agar cetrimide
Digerido pancreático de gelatina 20.0g
Cloruro de magnesio 1.4g
Sulfato de potasio 10.0 g
Cetrimide 0.3 g
Agar 13.6g
Agua purificada 1000 ml
Preparación: Disolver en el agua los componentes sólidos. Calentar a ebullición
con agitación constante durante un minuto.
Agar Mac Conkey
Digerido pancreático de gelatina 17.0 g
Peptonas (de carne y caseina) 3.0 g
Lactosa Monohidrato 10.0g
Mezcla de sales Biliares 1.5g
Cloruro de sodio 5.0g
Agar 13.5g
Rojo neutro 30.0 mg
Cristal violeta 1 mg
Agua destilada 1000ml
Preparación:
44
Disolver 50 g de medio en 1 litro de agua destilada.

Calentar lentamente hasta ebullición, agitando para su completa disolución.
Repartir en tubos ó frascos.
Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.
Agar Dextrosa Sabouraud
Dextrosa 40.0 g
Digerido péptico de tejido animal 5.0 g
Digerido pancreático de caseína 5.0 g
Agar 15.0 g
Agua destilada 1000 ml
Preparación:
Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. Calentar
agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver
completamente los ingredientes. Evitar el sobrecalentamiento. Esterilizar a 121°C
durante 15 minutos. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su
utilización.
Agar verde brillante
Extracto de Levadura 3.0 g
Peptona 10.0 g
Extracto de carne 5.0 g
Fosfato disódico 1.0 g
Fosfato monosódico 0.6 g
Lactosa 10.0 g
Sacarosa 10.0 g
Rojo Fenol 0.09 g
Verde brillante 4.7 mg
Agar 12.0 g
pH 6.9 ± 0,2
Preparación:
Suspender 51.7 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y
disolver por calentamiento agitando con frecuencia. Hervir durante un minuto hasta
su completa disolución. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar
a 45-50 ºC, mezclar bien y dispensar en placas. Si es necesario, deje secar durante
aproximadamente 2 horas con las cubiertas parcialmente retiradas.
45
Agar xilosa - lisina – dexosicolato
Xilosa 3,5 g
L-Lisina 5,0 g
Lactosa 7,5 g
sacarosa 7,5 g
Cloruro sódico 5,0 g
Extracto de levadura 3,0 g
Rojo fenol 0,08 g
Desoxicolato de sodio 2,5 g
Tiosulfato sódico 6,8 g
Citrato férrico de amonio 0,8 g
Agar 13,5 g
pH 7,4 ± 0,2
Preparación: Suspender 55.2 g de medio en un litro de agua destilada. Mezclar
vigorosamente. Calentar con agitación suave hasta que el medio llegue a ebullición.
Evitar el sobrecalentamiento ya que puede provocar la precipitación del medio. Este
medio NO se puede esterilizar por autoclave. Enfriar a una temperatura entre 45-
50°C en un baño de maría y verter en placas de Petri estériles.
Agar citrato – desoxicolato
Sólidos de infusión de cerdo 10 g
Digerido enzimático de tejido animal 10 g
Lactosa 10 g
Citrato de sodio 20 g
Citrato férrico 1g
Desoxicolato de sodio 5g
Rojo neutral 0.02 g
Agar 17 g
Preparación:
1. Suspenda 73 g del medio en un litro de agua destilada.
2. Caliente con agitación frecuente e hierva durante un minuto para disolver
completamente el medio.
3. EVITE SOBRECALENTAR.
46
Caldo lactosado
Extracto de carne 3.0gr
Dirigido pancreático de gelatina 5.0g
Lacto 5.0g
Preparación: Disolver 13 g del medio en 1000 ml de agua destilada. Calentar hasta
dilución completa. Después de esterilizar enfriar el medio de cultivo lo más rápido
posible.
Caldo triptica soya
Tripteína 17.0 g
Peptona de soya 3.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Fosfato dipotásico 2.5 g
Glucosa 2.5 g
pH final 7.3 ± 0.2
Preparación: Suspender 30 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Dejar reposar 5
minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta disolver
completamente. Distribuir en tubos u otros recipientes apropiados y esterilizar en
autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.
47
Anexo 2
Abreviaturas
ADN: Acido desoxirribonucleico
ARNr: Ácido ribonucleico ribosómico
CAN: Comunidad andina de naciones
ECEP: Ecoli enteropatogenica
g: gramos
hrs: horas
IMVIC: Indol, Rojo de metilo, vogues – proskauer, citrato
mL: mililitro
NF: Formulario Nacional
RTCA: Reglamento técnico centroamericano
SI: Sistema internacional
TM: Tintura madre
UFC: Unidad formadoras de colonias
UI: Unidad internacional
USP: Unique selling proposition
48
Anexo 3
GLOSARIO
Agar: Es un polisacárido compuesto por galactosa, un azúcar simple. Cuando se
disuelve en agua a alta temperatura y luego se enfría, adquiere su consistencia de
gelatina.
Bacilo: Bacteria de forma cilíndrica alargada
Caldo: Es un medio líquido que favorece la proliferación o multiplicación de todo tipo

de microorganismo (Bacterias, hongos, parásitos).
Calidad: La calidad se refiere a la capacidad un objeto para satisfacer necesidades

implícitas o explicitas según parámetros, un cumplimiento de requisitos de calidad.
Cenocito: Masa del protoplasma multinucleadas formada por la división del núcleo
pero no del citoplasma, procedente de una célula original pero de un solo núcleo.
Colonias: Se denomina colonias a la agrupación de un conjunto de microorganismo

de un mismo tipo. Algunos microorganismo que formas colonias son las bacterias, los
hongos y los protozoo o protozoarios.
Fitofármacos: Son medicamentos cuyo ingredientes activos se producen

exclusivamente de planta, o de partes de plantas su uso se ajusta a los principios de
una medicina amparada por la investigación de las ciencias naturales.
Flagelos: Es el orgánulo filiforme con forma de látigo que se encuentra en diversos

organismo unicelulares en ciertas células de organismos pluricelulares.
Microorganismo: Un organismo tan pequeño que no puede verse directamente a

simple vista, incluye; bacterias, virus, protozoarios, hongos y algas unicelulares.
Patógeno: Se denomina patógeno a todo agente biológico externo que se aloja en un

ente biológico determinado dañando de alguna manera su anatomía a partir de
enfermedades o daños visibles o no. A este ente biológico que aloja a un agente
patógeno se le denomina huésped, hospedador o también hospedante, en cuanto es
quien lo recibe a entes patógenos y los alberga a su cuerpo.
Principio Activo: Sustancia química producida en el metabolismo de la planta que tiene

actividad farmacológica.
Pomos: Recipiente pequeño de cristal, metal o plástico que sirve para contener o
conservar licores aceites o perfumes.
49
Anexo 4
Esterilización
Subcultivación NMP
50
Bacterias aerobias resultados de las muestras
51
Hongos y levaduras resultados de las muestras
52
Identificación de los patógenos
53
Batería de tubos de Número más probable (NMP)
54
55
Anexo 5
Procedimiento NMP C+: Control positivo
Limpiar con algodón y alcohol C-: Control negativo

etílico 70º la tapa de los pomos
y esperar a que se seque. ¥: Control de ambiente
10-1 Verter una cantidad

representativa para obtener el
90 ml Solución pool y llevar 10 g a la solución.
fosfato
monobásico
potásico + 4 % 9 ml de solución
Tween 80 1 ml 1 1 ml fosfato
10-2 10-3
Incubar a
1:10 1 ml 1 ml
36 – 37 ºC
por 48 h
10 ml de
1:100 1:1000
caldo
lactosa
Pruebas confirmativas de Coliformes totales y fecales
De los tubos que resultaron

positivo transferir 1 ml en caldo
E. coli 44 – 45 por 48 h en baño
María, para la confirmación de
coliformes fecales.
Para determinar E. coli Subcultivar por

De los tubos que resultaron estría cruzada dos placas con agar
positivo Subcultivar en caldo MacConkey, a partir de los tubos
verde brillando a 36 – 37 por 48 positivos.
h, para la confirmación de
coliformes totales.
Posteriormente realizándose la
prueba bioquímica IMVIC
56
Procedimiento para recuento de hongos, levaduras y bacterias aerobias
Limite microbiano
Limpiar con algodón y alcohol

y esperar a que se seque.
Verter una cantidad

pool y llevar 10 g a la solución.
90 ml Solución
fosfato
En la dilución 10-1 y 10-2, agregar
monobásico
10-1 1 ml a las placas Petri por
potásico + 4 %
duplicado luego se le adicionara
Tween 80
el medio agar Sabouraud
Dextrosa aproximadamente 15 –
1 ml 18 ml, incubar a 20 – 22 ºC por 5
a 7 días, finalmente proceder al
recuento de hongos y levaduras.
9 ml de solución 10-2
fosfato
1 ml
10-3 En la dilución 10-3 y 10-4, agregar

1 ml a las placas Petri por
duplicado luego se le adicionara
el medio agar triptica soya
1 ml aproximadamente 15 – 18 ml,
incubar a 36 – 3 ºC por 48 – 72
horas, finalmente proceder al
recuento de bacteria aerobias.
10-4
57
Identificación de bacterias patógenas
Limpiar con algodón y alcohol

y esperar a que se seque.
Verter una cantidad

pool y llevar 10 g al caldo.
90 ml de Caldo
DCS
1 ml
Agar Cetrimide
9 ml de caldo Rappaport Pseudomona aeroginosa
Subcultivar
Agar MacConkey
E. coli
Agar XLD (Salmonella sp) Agar sal manitol
Staphylococcus aureus
58

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA, LEÓN

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

Evaluación de la calidad microbiología de los productos semisólidos

Tutora: MSc. Gloria Maria Herrera

León, junio del 2020

´´A la libertad por la universidad´´

A mis padres Julio Hernández y Idalia Vanegas por acompañarme en este

A mi hermano Emilio Hernández por brindarme consejos necesarios en mi vida,

A mi tutora MSc. Gloria Herrera por su acompañamiento y conocimiento

Br. Julio César Hernández Vanegas

A mi tutora ha desempeñado un gran apoyo, motivación y dedicación para la

A mi novia por ser mí ayuda idónea en la realización de este trabajo y por su

Br. Julio César Hernández Vanegas

Quiero agradecer a mis padres Santiago Jerez y Lucia Calero

También me gustaría agradecer a mis profesores durante toda mi carrera

Para ellos: Muchas gracias y que Dios los bendiga.

Br. Manuela de Jesús Jerez Calero

A mi padre por ser la persona que me ha acompañado durante todo mi trayecto

A mi hermana Raquel que me dio su apoyo incondicional durante todo el proceso

A mi familia en general, porque me han brindado su apoyo incondicional y por

Br. Manuela de Jesús Jerez Calero

• Agradezco primeramente a Dios nuestro señor por permitirme culminar

Br. Jennifer Adilia Jiménez Ortega

Br. Jennifer Adilia Jiménez Ortega

Con el propósito de verificar si estos productos de origen natural cumplen con

Se realizó recuento de bacterias aerobias, hongos y levaduras; Se Identificó en

Como resultado se obtuvo 298 UFC/g en la dilución 10-3 y 39 UFC/g en la

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