Está en la página 1de 12

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE

HUAMANGA
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y METALURGIA
ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE INGENIERÍA EN
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

PRÁCTICA N °1

AISLAMIENTO DE LEVADURA COMO AGENTE BIOLÓGICO EN


BIOPROCESOS

PROFESOR : Ing. Jhon A. Bendezú Lope

CURSO : Bioprocesos AI-444

ALUMNOS : CHAVEZ SOTO, Liz Pamela


LOZANO SUAREZ, Kely
QUISPE MENDOZA, Karen Estefany
TENORIO QUISPE, Rosaly A.

GRUPO DE PRÁCTICA : Martes 7:00 – 10:00 a.m.

AYACUCHO - PERÚ

2018
AISLAMIENTO DE LEVADURA COMO AGENTE BIOLÓGICO EN BIOPROCESOS UNSCH

INTRODUCCIÓN

Levadura es el nombre genérico dado a un grupo de hongos Ascomicetes pertenecientes


al orden Endomicetales. Las levaduras son microhongos que se encuentran
generalmente en forma de células únicas y que se reproducen mediante gemación.

El aislamiento y reproducción de la levadura constituye un proceso largo y de gran


trabajo. Primero se identifican las cepas aisladas por lo general en los viñedos, frutas y
luego se analizan las características de fermentación. Se piensa que luego de haber
buscado durante treinta años entre los viñedos y frutas, ya se ha encontrado la levadura
ideal. En la actualidad, la tecnología se centra en comprender y manipular lo que ya se
ha establecido.

Son esenciales para la producción de muchos alimentos, como el vino, la cerveza,


panificados, productos lácteos, en frutas entre otros. En muchos de estos productos los
microorganismos hacen su función durante el proceso de producción, pero no están
presentes como células vivas en el producto alimentario, pasivamente.

Los microorganismos se usan también ampliamente para producir suplementos y


aditivos (por ej. vitaminas, conservantes, aromatizantes y colorantes naturales), o
aditivos para el procesado, como las enzimas. Por ello el interés de la práctica, con este
fin desarrollaremos inicialmente un aislamiento y preparación de medios de cultivo para
levaduras en fermentos como es la chicha de jora; en ellos tendremos como resultados
levaduras en diferentes colonias como detallaremos en los resultados obtenidos.

2
AISLAMIENTO DE LEVADURA COMO AGENTE BIOLÓGICO EN BIOPROCESOS UNSCH

I. OBJETIVOS
 Conocer las técnicas de aislamiento de un agente biológico para uso en bioprocesos.
 Preparar un medio de cultivo adecuado y selectivo para levaduras.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

II.1. Medios De Cultivo

El conocimiento de la nutrición microbiana permite el cultivo de los microorganismos


en el laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los microorganismos tienen
parecidos requerimientos de macro y micro nutrientes, Aunque ha quedado claro que la
forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras,
así como la cantidad relativa de cada nutriente. Un medio de Cultivo es una solución
acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide en estado de gel en la que están
presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un(os) determinado(s)
microorganismo(s). (Calderón, 2000)

II.2. Levaduras

Levaduras son hongos unicelulares de forma esférica alargada u ovalada y con


diferentes colores (blanco, rosado, beige o rojo). Son anaerobios facultativos, siendo las
levaduras aeróbicas productoras de CO2, agua, y biomasa relativamente alta y las
levaduras anaerobias, fermentadoras de azúcar en alcohol, CO2 y menos biomasa, la
mayoría son mesófilas con una temperatura máxima de crecimiento entre 24 y 48 0C,
crecen en un rango amplio de pH 2.5 y 8. No presentan mecanismos de locomoción, por
lo que únicamente puede ser transportado a través de corrientes de aire, fluidos o por
insectos.

Las levaduras cuando se desarrollan en medios de cultivo adecuados, sus colonias


varían en aspecto, textura y margen, así algunas son lisas, otras rugosas, algunas son
aplanadas, otras elevadas; tienen bordes bien definidos e irregulares; pueden producir
pigmentos. El tipo de desarrollo de caldo de cultivo, también proporciona información
significativa. Algunas colonias se desarrollan en el fondo del líquido a manera de
sedimento, otras crecen uniformemente en el caldo y otras crecen solo en la superficie.
(Rojas, 2011)

3
AISLAMIENTO DE LEVADURA COMO AGENTE BIOLÓGICO EN BIOPROCESOS UNSCH

Las levaduras son células de forma esférica u oval, ampliamente distribuido en la


naturaleza; frecuentemente se encuentran formando una cubierta polvosa fina sobre
frutos y hojas. (Aquiahuatl, 2004)

Entre las levaduras más comunes en los alimentos y bebidas podemos destacar:
Saccharomyces Cerevisiae, utilizada en la producción de cerveza, Vino, alcohol, pan,
etc.(Alcázar 2001)

En general las levaduras crecen con mayor rapidez a pH comprendido entre 4,5 y 6,0.
En las frutas, sin embargo, un pH más bajo impide el crecimiento bacteriano y de aquí
que su alteración sea dominada por levaduras y mohos. (Caballero, 2008)

II.3. Técnica aséptica

La técnica usada para evitar contaminantes durante la manipulación de cultivos y de


medios de cultivos estériles se llama técnica aséptica. Es necesaria dominarla para
manejarse en un laboratorio de microbiología, y constituye uno de los primeros métodos
que el microbiólogo en ciernes tiene que aprender. Los contaminantes aéreos
constituyen el problema más común ya que el aire siempre contiene partículas de polvo
que generalmente contienen comunidades de microorganismos. Cuando los recipientes
se abren, deben ser manejados de tal modo que el aire cargado de contaminantes no
entre en ellos. La transferencia aséptica de un cultivo desde un tubo a otro, se realiza
normalmente con un aza de cultivo o una aguja que ha sido previamente esterilizado por
calentamiento a la llama. Los cultivos en los que ha habido crecimiento pueden también
ser transferidos a la superficie de placas de medios con agar donde se forman colonias
mediante el crecimiento y división de células aisladas. La selección y extensión de una
colonia aislada es un método muy importante de obtener cultivos puros o axénicos a
partir de comunidades microbianas que contienen muchos organismos diferentes.
(Brock et; al 1998)

II.4. Técnicas de siembra

 Método de siembra por estría en placa


 Métodos de vertido en placa y extensión en placa

4
AISLAMIENTO DE LEVADURA COMO AGENTE BIOLÓGICO EN BIOPROCESOS UNSCH

La siguiente imagen nos muestra la forma correcta de realizar la siembra de los


microorganismos en un medio de cultivo.

Fig. 2: Siembra correcta de microorganismos en placas.

III. MATERIAES Y MÉTODOS.

3.1 Materiales y reactivos

 Muestra

 de chicha de jora  Agar – Agar


 Muestra de uva  Probeta de 100 ml (02)
 Mortero  Placas Petri (06)
 Matraz de 250 ml (04)  Fiola de 1000 ml
 Mechero de bunsen  Balanza
 Pipeta de 10 ml  Vaso de precipitado de 1000
 Vaso de precipitado de 250 ml ml
 Asa de Kolle  Papel periódico.
 Autoclave de laboratorio  Algodón
 Matraz de 1000 ml  Desecador
 Peptona  Ácido cítrico
 Glucosa  Agua destilada
 Antibiótico

3.2 PROCEDIMIENTO:

5
a) PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO
 Pesar 2,5g de peptona, 2,5 g de glucosa y 3,75g de agar-agar, y mezclar agitando
en un matraz de 250 ml.
 Con el potenciómetro medir su pH que debería estar en un rango de 6.0 – 6.4 y de
lo contrario adicionar solución de ácido cítrico de concentración de 5% p/v,
gradualmente hasta el pH indicado.
 Adicionar el antibiótico la 1/8 parte de una cápsula.
 Agitar hasta que el agar haya disuelto, si es necesario calentar levemente con el
mechero de bunsen.
 Enrazar con agua destilada en la fiola hasta 1000ml.
 Trasvasar al matraz de 1000 ml y tapar con una torunda de algodón de manera que
quede cerrada y apretada.
 Cubrir con el papel periódico el matraz toda la boca y hasta la parte media, hacer
por lo menos dos capas de papel asegurarlo con pabilo.
 Todas las placas Petri envolverlos con el papel periódico.
 Llevar al autoclave y colocarlos, el matraz con el medio y las placas Petri.
 Autoclavar a 121°C y a 15 lb/pulg2 de presión por 15 minutos.
 Después de esto sacar el medio y las placas, dejar enfriar sin sacar el papel que
envuelve los materiales.

b) AISLAMIENTO DE LOS AGENTES BIOLÓGICOS


 Lavar ligeramente con agua destilada la uva para eliminar contaminantes físicos.
 Machacar ligeramente en el mortero
 Extraer el mosto en una probeta. Reservar.
 Agita la chicha de jora y esperar que decante, el sobrenadante separar en un vaso
precipitado, repetir hasta tener una cantidad de precipitados. Reservar el
precipitado.

c) CULTIVO
 Disolver sin sacar la cubierta de papel de matraz con el medio, si aún no gelifica
el agar, no será necesario disolverlo.
 En presencia del mechero de Bunsen encendido abrir uno a uno las placas Petri y
repartirlo en cada uno de ellos hasta una altura de mitad, cerrar y dejar enfriar.
 Rotular cada placa indicando si serán para muestras de uva o chicha de jora.
 Cuando el medio en las placas Petri ya está frio y sólido, empezar el cultivo.
 Al lado del mechero de Busen abrir con cuidado la placa. Quemar la punta del asa
de kolle hasta rojo vivo. Enfriar y extraer la muestra del mosto de uva con la asa
de kolle y sembrar en forma de Z, cerrar.
 Repetir lo mismo para la chicha de jora.
 Siempre hacer los 06 cultivos en presencia cercana del mechero encendido.
 El medio de cultivo del matraz sobrante guardar con la tapa de algodón y la
cubierta de papel.
 Las placas Petri dejar en el secador cerrado y dejar el crecimiento por algunos días
en observación.
 Cuando se note colonias contar y anotar.

IV.RESULTADO Y DISCUSIONES
IV.1 Resultados

Para la obtención de resultados se siguió el siguiente procedimiento:

Fig. 3: chicha de
jora (muestra)

Fig.4:
Preparación del
medio de cultivo.

Fig. 6: De la
misma forma
todas las placas
Petri se
Fig. 5: Se tapó envolvieron.
con algodón y
luego se cubrió
con el papel
periódico.

Fig. 7: Se
llevó a la
autoclave y se
colocó el
matraz y las
placas Petri
una
temperatura de
21°C por 15
min.

Luego se observaron los siguientes resultados:


a) Enumeración de las colonias
- El primer día realizamos el cultivo

Fig.8: Inoculación de las muestras en las placas Petri


Fig.9: Placas Petri con cultivo

- El segundo día se observó el crecimiento de la primera levadura

Fig.10 crecimiento de la primera


levadura.

- El tercer día observamos


un crecimiento rápido de las levaduras que se ubican al centro de la placa
como se puede observar en la siguiente fig.

Fig. 11: Crecimiento de levaduras.

- El cuarto día se observó que la cantidad de levaduras aumento


considerablemente y se extendió hacia los bordes de la placa.
Fig. 12: Mayor cantidad de levaduras.

- El quinto día se observó el crecimiento de levaduras en toda la placa como


nos muestra la siguiente fig.

Fig.13: Crecimiento de
levaduras en toda la placa.

b) Descripción de las características de cada colonia


Fig. 14: formación de colonias
En la fig. 14 podemos observar que en las placas hay presencia de
colonias, esto debido a la cantidad del crecimiento de levaduras y a
la aglomeración de ellas. Se observa también que presentan una
forma globular y ovoide.

IV.2Discusiones

 En las muestras observamos presencia de microorganismos de formas esféricas


alargadas, ovaladas y bordes en algunos definidos. según (Aquiahuatl, 2004 y
Rojas, 2011). Las levaduras son hongos unicelulares de forma esférica alargada
esférica alargada u ovalada y con diferentes colores (blanco, rosado, beige o rojo).
Las levaduras cuando se desarrollan en medios de cultivo adecuados, sus colonias
varían en aspecto, textura y margen, así algunas son lisas, otras rugosas, algunas
son aplanadas, otras elevadas; tienen bordes bien definidos e irregulares.
 En las placas con muestra de chicha de jora se observa que los primeros días
presentaron poca presencia de microorganismos, esto puede ser a que están
pasando por un proceso de fermentación y tengan levaduras presentes. Según
(Caballero, 2008) En general las levaduras crecen con mayor rapidez a pH
comprendido entre 4,5 y 6,0. En las frutas, sin embargo, un pH más bajo impide el
crecimiento bacteriano y de aquí que su alteración sea dominada por levaduras y
mohos.
 También se observa que existe aún presencia de biomasa ya en poca cantidad, el
cual podría deberse a la presencia de levaduras aeróbicas, que como menciona
(Rojas, 2011) son fermentadoras de azúcar en alcohol, CO2 y generan menos
biomasa. La cual al igual que el cultivo de mosto de uva según (Alcázar 2001) es
el Saccharomyces Cerevisiae, que son más comunes en bebidas.
V. CONCLUSIONES.
 Se conoció las técnicas de aislamiento de un agente biológico de uso en
bioprocesos.
 Se preparó el medio de cultivo adecuado y selectivo para las levaduras de uso en
las fermentaciones alimentarias.

VI. BIBLIOGRAFÍA

 Aquiahuatl Ramos, María de los Ángeles- 2004.- “manual de prácticas del


laboratorio de microbiología general”-Universidad Autónoma Metropolitana.
Departamento de biotecnología. México
 Brock y otros 1998 “Biología de los Microorganismos”. Octava Edición.
 Caballero Torres, Ángel E. 2008. “Temas de higiene de los alimentos”. Editorial
Ciencias Médicas. La Habana.
 Calderón, F.; Colomo, B.; Morata, A.; Suárez Lepe, J.A. (2001) y Sancho, E. D.
Biotecnología de la fermentación. Principios, procesos y productos. Ed. Acribia.
Zaragoza. España.
 Rojas Alberto-Triviño.-2011- “Conceptos y práctica de microbiología general”.
Universidad Nacional de Colombia. Sede Palmira.