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Esta técnica nos permite un doble objetivo, el aislamiento de colonias y además el recuento de
los microorganismos que tenemos en el cultivo inicial.
Se trabaja con cinco tubos con suero fisiológico estéril, uno de ellos con 10 ml y el resto con 9
ml, en el orden que se muestra en la figura. Mediante una pipeta estéril tomar 1 ml del cultivo
mixto y depositarlo en el primer tubo. Agitar hasta conseguir una suspensión homogénea.
Tomar otra pipeta estéril y de este primer tubo transferir 0,1 ml al segundo tubo, agitar y repetir
la operación transfiriendo 1ml del segundo al tercer tubo, del tercero al cuarto y del cuarto al
quinto.
Una vez realizado el banco de diluciones procederemos a sembrar de los tres últimos tubos
(diluciones 104, 105 y 106) 0,1 ml en placas de agar nutritivo, mediante la técnica de siembra por
extensión (ver video). Se depositan los 100 microlitros en la superficie del agar y se debe
extender la muestra en toda la superficie del mismo, utilizando para ello el asa de vidrio.
Para esterilizar el asa de vidrio, en primer lugar se introduce en alcohol y se flamea
encendiéndola con la llama del mechero bunsen. Dejar que se consuma la llama y abriendo la
placa lo justo para introducir el asa, extender la muestra arrastrándola con
la base del triángulo por toda la superficie del medio hasta que éste absorba toda el
agua. Incubar a 37ºC durante 24 horas y realizar el recuento de las colonias
calculando la concentración de células en el tubo inicial mediante la fórmula:
ufc / ml = N x D x 10
Donde:
ufc = unidades formadoras de colonias
D = dilución
N = nº de colonias
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aislamiento/banco-de-diluciones-1