Está en la página 1de 5

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

´´CULTIVO PURO Y MIXTO. ´´


Cultivos mixtos

En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se encuentran diversos


microorganismos, el primer paso para proceder a su estudio es el aislamiento, es decir la
separación de cada uno de los posibles integrantes microbianos de la muestra.
Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría de ellos basados en la
inmovilización de las células microbianas en la superficie de los medios de cultivo sólidos. Al
depositar una célula bacteriana o una levadura en un punto del medio de cultivo, ésta quedará
inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por absorción de los nutrientes del medio. Las
nuevas células generadas permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones
conformarán lo que denominamos una "colonia" que no es más que un montón de células
derivadas de una sola célula madre inicial, es decir, un clon de la bacteria o levadura
depositada al sembrar. Esta colonia es visible al ojo humano y presenta diferentes
características según el microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir las
diferentes poblaciones microbianas que se encuentran en la muestra sembrada y separarlas
transfiriendo una colonia de cada tipo a un nuevo medio de cultivo estéril, a estos cultivos los
consideraremos "puros" por poseer un sólo tipo de microorganismo. (El fundamento es válido
teniendo en cuenta sólo microorganismos cultivables)

Técnicas de aislamiento. Se realiza un aislamiento de los microorganismos presentes en un


cultivo mixto en caldo ordinario, sobre agar nutritivo. Se siembran dos placas de agar nutritivo,
una mediante la técnica del agotamiento de asa y otra mediante la de estrias escocesas.
Estas técnicas pretenden diluir la carga microbiana que se deposita sobre el medio de cultivo de
forma que, en los últimos trazos de la siembra, haya tan pocas células que queden
suficientemente separadas unas de otras y puedan desarrollar colonias independientes.

Técnica de aislamiento y recuento: el banco de diluciones. Se realizan una serie de


diluciones seriadas a partir del cultivo mixto Con esta técnica conseguimos además de aislar
colonias, obtener un recuento del número de bacterias que tenemos en el cultivo.

Esquema que representa el aislamiento de un microorganismo cultivable unicelular


Técnica del agotamiento de asa
Tomar el tubo con el cultivo mixto, agitar para homogeneizar su contenido. Flamear el asa
bacteriológica y tomar una muestra del cultivo. Flamear la boca del tubo tanto al abrirlo como
antes de cerrarlo.
En una placa con agar nutritivo y tocando con suavidad la superficie del medio, extender la
muestra siguiendo el esquema de la figura. El recorrido del asa debe ser lo más largo posible
con el fin de conseguir al final del mismo células aisladas que darán lugar a colonias. Al
destapar la placa de Petri mantener la tapa en la mano, abriéndola sólo lo necesario para
realizar la siembra. Después de sembrar cerrar la placa y dejar en posición invertida para llevar
a incubar a 37ºC.

Técnica de las estrías escocesas

El procedimiento es igual al del agotamiento de asa pero la muestra de cultivo se siembra


siguiendo el esquema de la figura. Después de realizar la primera descarga se cierra la placa y
se flamea el asa. Sin cargarla de nuevo, se gira la placa unos 45º y arrastrando del final de las
estrías realizamos la segunda fase de las mismas, se repite el procedimiento dos veces más
hasta la última estría que finaliza con un pequeño agotamiento en el centro de la superficie del
medio de cultivo. La placa se cierra y se invierte para llevar a incubar a 37ºC.
Técnica de aislamiento y recuento: Banco de diluciones

Esta técnica nos permite un doble objetivo, el aislamiento de colonias y además el recuento de
los microorganismos que tenemos en el cultivo inicial.
Se trabaja con cinco tubos con suero fisiológico estéril, uno de ellos con 10 ml y el resto con 9
ml, en el orden que se muestra en la figura. Mediante una pipeta estéril tomar 1 ml del cultivo
mixto y depositarlo en el primer tubo. Agitar hasta conseguir una suspensión homogénea.
Tomar otra pipeta estéril y de este primer tubo transferir 0,1 ml al segundo tubo, agitar y repetir
la operación transfiriendo 1ml del segundo al tercer tubo, del tercero al cuarto y del cuarto al
quinto.
Una vez realizado el banco de diluciones procederemos a sembrar de los tres últimos tubos
(diluciones 104, 105 y 106) 0,1 ml en placas de agar nutritivo, mediante la técnica de siembra por
extensión (ver video). Se depositan los 100 microlitros en la superficie del agar y se debe
extender la muestra en toda la superficie del mismo, utilizando para ello el asa de vidrio.
Para esterilizar el asa de vidrio, en primer lugar se introduce en alcohol y se flamea
encendiéndola con la llama del mechero bunsen. Dejar que se consuma la llama y abriendo la
placa lo justo para introducir el asa, extender la muestra arrastrándola con

la base del triángulo por toda la superficie del medio hasta que éste absorba toda el
agua. Incubar a 37ºC durante 24 horas y realizar el recuento de las colonias
calculando la concentración de células en el tubo inicial mediante la fórmula:

ufc / ml = N x D x 10
Donde:
ufc = unidades formadoras de colonias
D = dilución
N = nº de colonias

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/tecnicas-de-
aislamiento/banco-de-diluciones-1

También podría gustarte