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UNIVERSIDAD

MAYOR

DE SAN SIMN

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGA


LIC. EN INGENIERA QUMICA

PRACTICA N2
PRODUCCIN DE
LEVADURAS

MATERIA: Laboratorio de introduccin a la ingeniera bioqumica


CARRERA:

Ing. Qumica

DOCENTE:

Lic. Ruder

UNIVERSITARIOS:
Chambi Licona Nelson Freddy
Cordova Herbas Pablo

COCHABAMBA BOLIVIA

I.- MARCO TERICO


1.1 ANTECEDENTES
Las levaduras se han utilizado desde la prehistoria en la elaboracin del pan y del vino,
pero los fundamentos cientficos de su cultivo y uso en grandes cantidades fueron
descubiertos por el microbilogo francs Louis Pasteur en el siglo XIX.
Hoy se utilizan en distintos tipos de fermentacin. Los diferentes usos de las levaduras
son: como fuente de vitaminas del complejo B y de tiamina, en algunas fases de la
produccin de antibiticos y hormonas esteroides, y como alimento para animales y seres
humanos.
Las cepas puras de levaduras se cultivan en un medio con azcares, compuestos
nitrogenados, sales minerales y agua.
El producto final puede aparecer en forma de clulas secas de levadura o prensado en
pastillas con algn material excipiente.
Cuando se termina de utilizar un lote de levaduras destinadas a la fabricacin del pan, a
usos mdicos, o para fabricacin de alimentos, el medio de cultivo en el que han crecido
se desecha.
Sin embargo en la elaboracin de vinos, cervezas, licores y alcoholes industriales, el
medio de cultivo es el producto final, y en este caso son las propias levaduras las que se
desechan, o bien se utilizan como pienso o alimento para animales.
1.2 DEFINICION DE LEVADURA
Levadura, cualquiera de los diversos hongos microscpicos unicelulares que son
importantes por su capacidad para realizar la fermentacin de hidratos de carbono,
produciendo distintas sustancias.
Las levaduras son abundantes en la naturaleza, y se encuentran en el suelo y sobre las
plantas.
La mayora de las levaduras que se cultivan pertenecen al gnero Saccharomyces, como
la levadura de la cerveza, que son cepas de la especie Saccharomyces cerevisiae.
I.2.1 MORFOLOGA

Suelen ser esfricos, alargados, medida, color, dimetro.


Tienen tendencia a depositarse en el fondo del lquido o flotar. Suelen formar cpsula
(tincin negativa con tinta china separacin entre la tinta y la clula).
La mayora de las levaduras tienen un ciclo de reproduccin asexual por gemacin.
Algunas tienen una reproduccin asexual por fisin binaria.
Cuando la clula se separa de la madre, deja una cicatriz. Las gemas se pueden hacer en
un determinado polo o a lo largo de toda la superficie.
Algunas levaduras tienen gemacin unipolar siempre geman slo por un polo.
Es muy caracterstico de Malassezya pachydermatis que es un agente etiolgico de otitis
en perros y dermatitis crnica en gato y perro. Tiene como caracterstica que tiene una
base muy amplia.
Otras levaduras pueden dividirse bipolares o multipolares. Algunas levaduras no separan
la clula hija (gema o blastospora o blastoconidio) y forman pseudomicelio.
La clula hija va unida y se va alargando.
Es importante saber si puede o no formar pseudomicelio para clasificar una levadura.
La prueba de filamentacin va muy ligada a la identificacin de Candida albicans, porque
slo da positiva ella. A partir de una muestra aislada, la levadura se siembra en un tubo
con 1 ml de suero bovino. Se incuba a 37C durante 3-4 horas y despus se hace una
preparacin microscpica y se mira.
Si es positiva, algunas levaduras producen 1 tubo de germinacin o sedimentacin.
Crecen ms rpido que los hongos miceliares pero hace falta 48 horas como mnimo.
1.2.2 CARACTERSTICAS FISIOLGICAS Y BIOQUMICAS
Son pruebas que tardan 24-48 horas y que muchas son parecidas a las de las bacterias.

Crecen a 32C.

Resistencia a actidiona o ciclohexidina.

Fermentacin de carbohidratos.

Pruebas de asimilacin de carbohidratos.

Estn muy estandarizadas las pruebas de asimilacin.

Slo sirven para identificar algunas levaduras de inters clnico.

1.3 JUSTIFICACION DEL TEMA


Durante el aislamiento se diluir una muestra del fermento en agua salada para asegurar
la esterilidad de la muestra, es por esto que se realizara la dilucin 8 veces, de esta
manera se obtendr una muestra pura de levadura, la cual posteriormente ser sembrada
para observar el crecimiento de las colonias, las colonias con mejor crecimiento de
levaduras sern aisladas y vistas al microscopio.
El medio de cultivo universal para las levaduras es el agar-malta, el mejor lugar para sacar
levaduras es de la flora epifitica por este motivo trabajaremos con un fermento para lograr
aislar las cepas de levaduras que se encuentren presentes en el fermento.
1.4. OBJETIVOS
1.4.1. OBJETIVO GENERAL

El aislamiento y purificacin de levaduras partiendo de la flora epiftica


que se encuentra en el fermento.

1.4.2. OBJETIVO ESPECFICO

Trabajar con precisin y orden en el laboratorio para evitar la


contaminacin de las cepas.

Lograr Obtener cepas puras de levaduras a partir de La flora epifitica.

Observar las levaduras en el microscopio.

II MARCO PRCTICO
2.1. MATERIALES DE LABORATORIO

1 Vaso de precipitado de 1000 o 600ml

1 Matraz Erlenmayer de 250 o 600ml

Cajas petri

Tubos de ensayo

4 Pipetas de 1 ml

1 Pipeta de 10ml

Porta y cubreobjetos

Gotero

Asa

Algodon

2.2. EQUIPOS DE LABORATORIO

Autoclave

Microscopio

2.2.3 REACTIVOS

Agar-agar

Malta

2.2.4 PROCEDIMIENTO

a) Preparacin del mosto de malta


200g de malta en 1500ml de agua.
Se caliente la muestra en las siguientes condiciones:

Almidn
10min
Agua

15min
62C

10min 52C
42C

10min
72C

b) Filtracin (centrifugacin)
c) Agregar Agar-agar al mosto
Se preparan aproximadamente 30 tubos (5ml/tubo).
Pesar Agar-agar 5% en 150ml de mosto.
Se calienta en hornilla hasta disolucin de Agar y se pasa a cada tubo 5ml.
Se tapa con algodones y se lleva a autoclave 15min a 121C y 1,2atm.
Se deja secar los tubos en posicin inclinada para obtener pico de flauta.
d) Aislamiento
Una ves se han formado en los tubos de ensayo los picos de flauta, se toma
aproximadamente 1ml de Agar malta estril en un tubo de ensayo1 y se le agrega
9ml de agua salada al 5%.
Del tubo de ensayo1 se toma un mililitro de muestra y se lleva al tubo de ensayo2 al
cual tambin se le aaden 9ml de agua salada.
Este procedimiento se repite hasta obtener un octavo tubo de ensayo con una
dilucin de 108, ser con este ltimo tubo que se trabajara para realizar el
sembrado.
El sembrado se realizara en cajas petri con Agar-agar el tiempo de espera puede
variar de 1 a 5 das.
Para el sembrado se toma una muestra con un aza, previamente esterilizada y
enfriada, y se la depositara en la caja petri sobre el Agar-agar extendido, todo este
procedimiento debe ser realizado frente a un mechero para evitar contaminar la
muestra con microbios que se encuentren presentes en el aire.
e) Crecimiento de colonias

Despus de 5 das se revisara el crecimiento de las colonias, forma, tamao y color,


para proceder al aislamiento de las colonias.
Solo se aislaran las colonias que hayan tenido un crecimiento correcto y libre de
impurezas.
f) Aislamiento de colonias
De las cajas petri que hayan tenido un crecimiento correcto de las levaduras, se
seleccionaran las colonias mas grandes, marcndolas por debajo de la caja petri
con un marcador, de esta forma se evitara tambin tomar muestras de la misma
colonia.
Las muestras tomadas sern sembradas en los tubos de ensayo con pico de flauta
anteriormente usados, cada toma de muestra y siembra sern marcadas con el
mismo nombre tanto en el tubo de ensayo como en la caja petri.
Es importante tapar los tubos de ensayo con algodn pues de esta manera se evita que
los tubos de ensayo exploten debido a la presin del CO2, y dejar las cajas petri envueltas
en papel y en un lugar oscuro para ayudar al crecimiento de las levaduras.
Observacin microscpica
o Seleccionamos alrededor de 15 colonias.
o Confirmamos la pureza de las levaduras de las colonias que elegimos: En
un portaobjetos tomamos solo la mitad de la colonia (cada colonia mide
aproximadamente 3 a 5 mm) con ayuda de un asa la mezclamos con una
gota de agua destilada tapamos con un cubreobjetos y observamos en el
microscopio.
o Elegimos 5 colonias, las ms puras (que tienen menos tipos de levaduras
mximo 2 a 3 tipos).
IV.- CONCLUCIONES

Durante la prctica se realizaron muchos errores, en especial debido a la falta de


experiencia, una gran parte de las muestras en las cajas petri no crecieron
adecuadamente o fueron contaminadas por la mala manipulacin de las mismas
mayormente en el proceso de sembrado.

De la misma forma las muestras con pico de flauta no fueron bien manipuladas, no
se sostuvo de manera correcta, pues al realizar la toma de muestra en ningn
momento se debe soltar el algodn y antes de tapar el tubo de ensayo el algodn
debe ser a la flama del mechero para eliminar microbios.

Todo el trabajo de la siembra y la dilucin debe ser realizado frente a un mechero


para evitar contaminar las muestras con nuestro aliento.

El aza a utilizar para tomar las muestra debe ser esterilizado y cada ves que se lo
reutilice debe ser expuesto a la flama del mechero para desinfectarlo, sin olvidar
dejarlo enfriar antes de tomar la muestra pues de no hacer lo mataramos a la
levadura.